Tas ir balstīts uz pretvīrusu antivielu noteikšanu pacienta asinīs seroloģiskās reakcijās, izmantojot specifiskus vīrusu antigēnus - diagnostikas līdzekļus vai īpašas testa sistēmas. Vīrusu infekciju seroloģiskās reakcijas tiek veiktas šķidrā vidē (RSK, RTGA, RNGA, RONGA, RTONGA, RIA), gēlā (RPG, RRG, RVIEF) vai uz cietas fāzes nesēja (piemēram, uz polistirola plāksnes akas sienām ar fiksāciju vienā no imūnās atbildes sastāvdaļas - antigēns vai antiviela). Šādas cietās fāzes metodes ir pazīstamas kā ELISA, IEM, RGadsTO, RIF, RGads, RTGads.
Bieži vien dabisko pretvīrusu antivielu klātbūtnes dēļ lielākās daļas veselīgu cilvēku asinīs vīrusu infekciju seroloģiskā diagnoze ir balstīta uz pētījumiem sapāroti serumi,ņemts slimības sākumā un pašā augstumā vai atveseļošanās periodā, lai noteiktu antivielu titra palielināšanos. Antivielu titra palielināšanās četras vai vairāk reizes tiek uzskatīta par diagnostiski nozīmīgu.
Seroloģisko metožu jutīguma palielināšana tiek panākta ar antigēnu vai antivielu adsorbciju uz eritrocītiem (RNGA, RONGA, RTONGA, RGadsTO, RRG), kas apzīmēti ar enzīmiem (ELISA), radioaktīvajiem izotopiem (RIA, RPG) vai fluorohromiem (RIF). Tiek izmantots arī eritrocītu lizēšanas princips ( antigēnu mijiedarbībā komplementa klātbūtnē (RSK, RRG).
Komplementa fiksācijas reakcija (CBC)kā komplementa saistīšanās variantu aukstumā (nakti + 4 ° C temperatūrā) bieži izmanto viroloģijā vairāku vīrusu infekciju retrospektīvai diagnostikai un vīrusu specifisko antigēnu noteikšanai pacienta materiālos.
Radiālās hemolīzes reakcija (RHR)agarozes želejā pamatā ir antigēna sensibilizēto eritrocītu hemolīzes parādība, vīrusam specifisku antivielu ietekmē komplementa klātbūtnē un tiek izmantota gripas, ARVI, masaliņu, cūciņu, togavīrusu infekciju seroloģiskai diagnostikai.
Lai formulētu reakciju, jēra eritrocītos (0,3 ml 10% suspensijas) pievieno 0,1 ml neatšķaidīta vīrusa antigēna un maisījumu 10 minūtes tur istabas temperatūrā. 0,3 ml sensibilizētu eritrocītu un 0,1 ml komplementa pievieno 1,2% agarozei 42 ° C temperatūrā, maisījumu ielej stikla priekšmetstikliņos vai polistirola plākšņu iedobumos, sasaldētajā agarozes želejā ar perforatoru izgriež caurumus un piepilda ar testa priekšmetiem un kontroles serumi. Brilles vai paneļi ir pārklāti ar vāku un ievietoti mitrā kamerā uz 16-18 stundām termostatā. Reakciju ņem vērā ar hemolīzes zonas diametru ap caurumiem, kas piepildīti ar serumu. Kontrolē hemolīzes nav.
Nr.1 Seroloģiskās reakcijas, ko izmanto diagnozei vīrusu infekcijas.
Imūnās reakcijas tiek izmantotas diagnostikā un imunoloģiskos pētījumos ar slimiem un veseliem cilvēkiem. Šim nolūkam piesakieties seroloģiskās metodes, t.i., antivielu un antigēnu izpētes metodes, izmantojot antigēnu-antivielu reakcijas, kas noteiktas asins serumā un citos šķidrumos, kā arī ķermeņa audos.
Antivielu noteikšana pret patogēna antigēniem pacienta asins serumā ļauj diagnosticēt slimību. Seroloģiskos pētījumus izmanto arī, lai identificētu mikrobu antigēnus, dažādas bioloģiski aktīvās vielas, asins grupas, audu un audzēju antigēnus, imūnkompleksus, šūnu receptorus utt.
Kad no pacienta tiek izolēts mikrobs, patogēns tiek identificēts, pētot tā antigēnās īpašības, izmantojot imūndiagnostikas serumus, tas ir, hiperimunizētu dzīvnieku asins serumus, kas satur specifiskas antivielas. Šī ir tā sauktā mikroorganismu seroloģiskā identifikācija.
Mikrobioloģijā un imunoloģijā plaši izmanto aglutināciju, izgulsnēšanu, neitralizāciju, reakcijas ar komplementa piedalīšanos, izmantojot iezīmētas antivielas un antigēnus (radioimunoloģisko, enzīmu imūnanalīzi, imunofluorescējošās metodes). Uzskaitītās reakcijas atšķiras no reģistrētā efekta un iestudēšanas paņēmiena, tomēr tās visas ir balstītas uz antigēna mijiedarbības reakciju ar antivielu un tiek izmantotas gan antivielu, gan antigēnu noteikšanai. Imunitātes reakcijām raksturīga augsta jutība un specifiskums.
Antivielu un antigēna mijiedarbības īpatnības ir laboratoriju diagnostikas reakciju pamatā. In vitro reakcija starp antigēnu un antivielu sastāv no specifiskas un nespecifiskas fāzes. Konkrētā fāzē notiek ātra antivielas aktīvās vietas specifiska saistīšanās ar antigēna determinantu. Tad nāk nespecifiska fāze - lēnāka, kas izpaužas ar redzamām fiziskām parādībām, piemēram, pārslu veidošanos (aglutinācijas parādība) vai nogulsnēm duļķainuma formā. Šai fāzei nepieciešami noteikti apstākļi (elektrolīti, optimālais vides pH).
Antigēna determinanta (epitopa) saistīšanās ar antivielu Fab fragmenta aktīvo centru ir saistīta ar van der Vālsa spēkiem, ūdeņraža saitēm un hidrofobo mijiedarbību. Antivielu saistītā antigēna stiprums un daudzums ir atkarīgs no antivielu afinitātes, aviditātes un to valences.
№ 2 leišmaniozes izraisītāji. Taksonomija. Funkcija. Mikrobioloģiskā diagnostika. Ārstēšana.
Taksonomija: Sarcomastigophorae tips, Mastigophora apakštips - flagellāti, Zoomastigophora klase, Kinetoplastida kārtība, Leishmania ģints.
Audzēšana: NNN barotne ar defibrinētu trušu asiņu agaru. Leišmanijas aug arī uz cāļa embrija koriona-alantoīna membrānas un šūnu kultūrās.
Epidemioloģija: valstīs ar siltu klimatu. Patogēnu pārnešanas mehānisms ir pārnēsājams, caur vektoru - odu kodumu. Galvenie patogēnu avoti: ar ādas antroponisko leišmaniozi - cilvēki; ar ādas zoonozes leišmaniozi - grauzēji; ar viscerālo leišmaniozi - cilvēki; ar gļotādas ādas leišmaniozi - grauzēji, savvaļas un mājas dzīvnieki.
Patoģenēze un klīnika. Ir divi ādas leišmaniozes izraisītāji: L. tropica - antroponās leišmaniozes izraisītājs un L. major - zoonotiskās ādas leišmaniozes izraisītājs.
Antroponisko ādas leišmaniozi raksturo ilgs, vairāku mēnešu ilgs inkubācijas periods. Odu koduma vietā parādās tuberkuloze, kas palielinās un čūlas pēc 3 mēnešiem. Čūlas biežāk atrodas uz sejas un augšējām ekstremitātēm, līdz gada beigām ir rētas. Zoonotiska ādas leišmanioze (agrīna čūlaina leišmanioze, pendino čūla, lauku forma) ir akūtāka. Inkubācijas periods ir 2-4 nedēļas. Raudošas čūlas bieži lokalizējas apakšējās ekstremitātēs. Mukokutāna leišmanioze izraisa leišmanijas kompleksu L. braziliensis; attīstās deguna ādas, mutes gļotādas un balsenes granulomatozi un čūlaini bojājumi. Antraponozo viscerālo leišmaniozi izraisa L. donovani kompleksās leišmanijas; pacientiem tiek ietekmētas aknas, liesa, limfmezgli, kaulu smadzenes un gremošanas trakts.
Imunitāte: neatlaidīga dzīve
Uztriepēs (no tuberkulozes, čūlu satura, punktiem no orgāniem), kas iekrāsoti pēc Romanovska-Giemsa, atrodamas intracelulāri izvietotas mazas, ovālas formas leišmanijas (amastigotes). Lai izolētu tīru patogēna kultūru, inokulāciju veic uz NNN barotnes: inkubē 3 nedēļas. Seroloģiskās metodes nav pietiekami specifiskas. Iespējama RIF, IFA izmantošana.
Leishmaniasis epidemioloģiskajos pētījumos tiek izmantots ādas alerģisks tests HAT pret leišmanīnu.
Ārstēšana: Viscerālai leišmaniozei lieto antimonu un diamidīnus (pentamidīnu). Ar ādas leišmaniozi - akrikhin, amfotericīns.
Profilakse: iznīcināt slimos dzīvniekus, veikt cīņu pret grauzējiem un odiem. Ādas leišmaniozes imunoprofilaksi veic, inokulējot L. major dzīvo kultūru.
BIĻETE # 28
№ 1 Imūnglobulīni, struktūra un funkcija.
Imūnglobulīnu raksturs. Reaģējot uz antigēna ieviešanu, imūnsistēma ražo antivielas - olbaltumvielas, kas var īpaši saistīties ar antigēnu, kas izraisīja to veidošanos, un tādējādi piedalīties imunoloģiskajās reakcijās. Tiek norādītas antivielas pret β-globulīniem, t.i., mazākā asins seruma olbaltumvielu kustīgā daļa elektriskajā laukā. Ķermenī β-globulīnus ražo īpašas šūnas - plazmocīti. β-globulīnus, kuriem ir antivielu funkcija, sauc par imūnglobulīniem un apzīmē ar simbolu Ig. Tādējādi antivielas ir imūnglobulīni, kas ražoti, reaģējot uz antigēna ievadīšanu, un spēj specifiski mijiedarboties ar to pašu antigēnu.
Funkcijas. Primārā funkcija ir viņu aktīvo centru mijiedarbība ar papildinošajiem antigēna noteicējiem. Sekundārā funkcija ir viņu spēja:
Saista antigēnu, lai to neitralizētu un izvadītu no organisma, t.i., piedalītos aizsardzības veidošanā pret antigēnu;
Piedalīties "sveša" antigēna atpazīšanā;
Nodrošināt imūnkompetentu šūnu (makrofāgu, T- un B-limfocītu) sadarbību;
Piedalieties dažādās imūnās atbildes formās (fagocitoze, slepkavas funkcija, GNT, HAT, imunoloģiskā tolerance, imunoloģiskā atmiņa).
Antivielu struktūra. Pēc ķīmiskā sastāva imūnglobulīna proteīni ir glikoproteīni, jo tie sastāv no olbaltumvielām un cukuriem; ir veidoti no 18 aminoskābēm. Viņiem ir sugu atšķirības, kas galvenokārt saistītas ar aminoskābju kopumu. Viņu molekulām ir cilindriska forma, tās ir redzamas elektronu mikroskopā. Līdz 80% imūnglobulīnu sedimentācijas konstante ir 7S; izturīgs pret vājām skābēm, sārmiem, silda līdz 60 ° C. Imūnglobulīnus no asins seruma ir iespējams izolēt ar fizikālām un ķīmiskām metodēm (elektroforēze, izoelektriskā nogulsnēšana ar spirtu un skābēm, sālīšana, afinitātes hromatogrāfija utt.). Šīs metodes izmanto ražošanā, sagatavojot imunobioloģiskos preparātus.
Struktūras, antigēnu un imunobioloģisko īpašību ziņā imūnglobulīni tiek iedalīti piecās klasēs: IgM, IgG, IgA, IgE, IgD. Imūnglobulīniem M, G, A ir apakšklases. Piemēram, IgG ir četras apakšklases (IgG, IgG 2, IgG 3, IgG 4). Visas klases un apakšklases atšķiras pēc aminoskābju secības.
Visu piecu klašu imūnglobulīna molekulas sastāv no polipeptīdu ķēdēm: divām identiskām smagām H ķēdēm un divām identiskām vieglām ķēdēm - L, kuras savieno disulfīda tilti. Attiecīgi katra imūnglobulīnu klase, t.i. M, G, A, E, D, ir pieci smago ķēžu veidi :? (mu) ,? (gamma) ,? (alfa) ,? (epsilon) un? (delta), kas atšķiras pēc antigenitātes. Visu piecu klašu gaismas ķēdes ir kopīgas un ir divu veidu: (kappa) un? (lambda); Dažādu klašu imūnglobulīnu L-ķēdes var pievienoties (rekombinēties) gan ar homoloģiskām, gan heteroloģiskām H-ķēdēm. Tomēr tajā pašā molekulā var būt tikai identiskas L-ķēdes (? Vai?). Gan H-, gan L-ķēdēs ir mainīgs - V reģions, kurā aminoskābju secība nav konstanta, un nemainīgs - C reģions ar nemainīgu aminoskābju kopumu. Vieglās un smagās ķēdēs izšķir NH2 - un COOH-termināla grupas.
Apstrādājot? merkaptoetanols ar globulīnu noārda disulfīdu saites un imūnglobulīna molekula sadalās atsevišķās polipeptīdu ķēdēs. Pakļaujot proteolītiskā enzīma papaijam, imūnglobulīns tiek sadalīts trīs fragmentos: divos nekristalizējošos fragmentos, kas satur antigēnam determinējošās grupas, un ko sauc par Fab-I un II fragmentiem, un vienu kristalizējošu Fc fragmentu. FabI un FabII fragmenti pēc īpašībām un aminoskābju sastāva ir līdzīgi un atšķiras no Fc fragmenta; Fab un Fc fragmenti ir kompakti veidojumi, kas savienoti ar elastīgām H ķēdes sekcijām, kuru dēļ imūnglobulīna molekulām ir elastīga struktūra.
Gan H ķēdei, gan L ķēdei ir atsevišķi, lineāri saistīti, kompakti reģioni, kurus sauc par domēniem; H ķēdē ir 4 no tiem un 2 L ķēdē.
Aktīvie centri jeb determinanti, kas veidojas V reģionos, aizņem apmēram 2% no imūnglobulīna molekulas virsmas. Katrai molekulai ir divi determinanti, kas saistīti ar H- un L-ķēdes hipervariējamiem reģioniem, t.i., katra imūnglobulīna molekula var saistīt divas antigēna molekulas. Tāpēc antivielas ir divvērtīgas.
Imūnglobulīna molekulas tipiskā struktūra ir IgG. Pārējās imūnglobulīnu klases atšķiras no IgG ar to molekulu organizācijas papildu elementiem.
Reaģējot uz jebkura antigēna ievadīšanu, var ražot visu piecu klašu antivielas. Parasti vispirms tiek ražots IgM, pēc tam IgG, pārējais - nedaudz vēlāk.
№ 2 Hlamīdiju izraisītājs. Taksonomija. Funkcija. Mikrobioloģiskā diagnostika. Ārstēšana.
Taksonomija:ordenis Chlamydiales, Chlamydaceae dzimta, Chlamydia ģints. Ģints pārstāv sugas C.trachomatis, C.psittaci, C.pneumoniae.
Tiek sauktas slimības, ko izraisa hlamīdijas hlamīdijas... C. trachomatis un C. pneumoniae izraisītās slimības ir antroponozes. Psitakoze, kuras izraisītājs ir C. psittaci, ir zooantropona infekcija.
Hlamīdiju morfoloģija: mazas, gramu "-" baktērijas, sfēriskas. Viņi neveido sporas, nav karogu un kapsulu. Šūnas siena: 2-slāņu membrāna. Ir glikolipīdi. Pēc Grama teiktā, tas ir sarkans. Galvenā krāsošanas metode ir saskaņā ar Romanovski - Giemsa.
2 eksistences formas: elementārķermeņi (neaktīvas infekcijas daļiņas ārpus šūnas); retikulāri ķermeņi (šūnu iekšpusē, veģetatīvā forma).
Audzēšana: Var pavairot tikai dzīvās šūnās. Vistas embriju attīstības dzeltenuma maisiņā, jutīgu dzīvnieku ķermenī un šūnu kultūrā
Fermentatīvā aktivitāte: mazs. Viņi fermentē pirovīnskābi, sintezē lipīdus. Nav spējīgs sintezēt augstas enerģijas savienojumus.
Antigēnu struktūra: Trīs veidu antigēni: ģintim raksturīgs termostabils lipopolisaharīds (šūnu sienā). Atklāts ar RSK palīdzību; olbaltumvielu dabas sugai raksturīgais antigēns (ārējā membrānā). Uzziniet, izmantojot RIF; olbaltumvielu dabas specifisks variantam specifisks antigēns.
Patogēnie faktori. Hlamīdiju ārējās membrānas olbaltumvielas ir saistītas ar to lipīgajām īpašībām. Šie adhezīni ir sastopami tikai elementāros ķermeņos. Hlamīdijas veido endotoksīnu. Dažām hlamīdijām ir siltuma šoka proteīns, kas var izraisīt autoimūnas reakcijas.
Pretestība... Augsts dažādiem vides faktoriem. Izturīga pret zemu temperatūru, žāvēšana. Karstumjutīgs.
C. trachomatis ir uroģenitālās sistēmas, acu un elpošanas ceļu slimību izraisītājs cilvēkiem.
Trahoma ir hroniska infekcijas slimība, kurai raksturīgi acu konjunktīvas un radzenes bojājumi. Antroponoze. To pārraida kontakts un ikdienas dzīve.
Patoģenēze: ietekmē acu gļotādu. Tas iekļūst konjunktīvas un radzenes epitēlijā, kur tas vairojas, iznīcinot šūnas. Attīstās folikulārais keratokonjunktivīts.
Diagnostika:konjunktīvas nokasīšanas pārbaude. Ietekmētajās šūnās, krāsojot pēc Romanovska-Giemsa, tiek atrasti violetas krāsas citoplazmas ieslēgumi, kas atrodas netālu no kodola - mazā Provačekas ķermeņa. Lai noteiktu konkrētu hlamīdiju antigēnu skartajās šūnās, izmanto arī RIF un ELISA. Dažreiz viņi ķeras pie hlamīdiju trahomas audzēšanas vistu embrijos vai šūnu kultūrā.
Ārstēšana: antibiotikas (tetraciklīns) un imūnstimulējošie līdzekļi (interferons).
Profilakse: Nespecifisks.
Uroģenitālā hlamīdija ir seksuāli transmisīva slimība. Tā ir akūta / hroniska infekcijas slimība, kurai raksturīgs uroģenitālā trakta dominējošais bojājums.
Cilvēka infekcija notiek caur dzimumorgānu trakta gļotādām. Galvenais infekcijas mehānisms ir kontakts, pārnešanas ceļš ir seksuāls.
Imunitāte: šūnu, ar inficēto specifisko antivielu serumu. Pēc slimības tā neveidojas.
Diagnostika: Acu slimību gadījumā tiek izmantota bakterioskopiska metode - intracelulāri ieslēgumi tiek atklāti konjunktīvas epitēlija skrāpējumos. Lai noteiktu hlamīdiju antigēnu skartajās šūnās, tiek izmantots RIF. Uroģenitālā trakta bojājuma gadījumā var izmantot bioloģisko metodi, kuras pamatā ir šūnu kultūras inficēšanās ar testa materiālu (epitēlija skrāpējumi no urīnizvadkanāla, maksts).
RIF, ELISA testa materiālā var noteikt hlamīdiju antigēnus. Seroloģiskā metode - IgM noteikšanai pret C. trachomatis jaundzimušo pneimonijas diagnostikā.
Ārstēšana. antibiotikas (azitromicīns no makrolīdu grupas), imūnmodulatori, eubiotikas.
Profilakse... Tikai nespecifiska (pacientu ārstēšana), personīgā higiēna.
Lymphogranuloma venereum ir seksuāli transmisīva slimība, kurai raksturīgi dzimumorgānu un reģionālo limfmezglu bojājumi. Infekcijas mehānisms ir kontakts, pārnešanas ceļš ir seksuāls.
Imunitāte: noturīga, šūnu un humorāla imunitāte.
Diagnostika: Materiāls pētījumiem - strutas, biopsija no skartajiem limfmezgliem, asins serums. Bakterioskopiskās metodes, bioloģiskās (audzēšana vistas embrija dzeltenuma maisiņā), seroloģiskās (RSK ar sapārotiem serumiem ir pozitīvas) un alergoloģiskās (intradermāls tests ar hlamīdiju alergēnu) metodes.
Ārstēšana... Antibiotikas ir makrolīdi un tetraciklīni.
Profilakse: Nespecifisks.
C. pneumoniae ir elpošanas hlamīdiju izraisītājs, izraisot akūtu un hronisku bronhītu un pneimoniju. Antroponoze. Infekcija - ar gaisā esošām pilieniņām. Viņi iekļūst plaušās caur augšējiem elpošanas ceļiem. Tie izraisa iekaisumu.
Diagnostika: RSK iestatīšana specifisku antivielu noteikšanai (seroloģiskā metode). Attiecībā uz primāro infekciju tiek ņemta vērā IgM noteikšana. RIF tiek izmantots arī hlamīdiju antigēna un PCR noteikšanai.
Ārstēšana: To veic, izmantojot antibiotikas (tetraciklīnus un makrolīdus).
Profilakse: Nespecifisks.
C. psittaci ir psitakozes izraisītājs - akūta infekcijas slimība, kurai raksturīgi plaušu, nervu sistēmas un parenhīmas orgānu (aknu, liesas) bojājumi un intoksikācija.
Zooantroponoze. Infekcijas avoti ir putni. Infekcijas mehānisms ir aerogēns, izplatīšanās ceļš ir gaisā. Izraisītājs ir gļotas. dyhata membrānas. ceļi, bronhu, alveolu epitēlijā, vairojas, iekaisums.
Diagnostika: Materiāls pētījumiem - asinis, pacienta krēpas, asins serums seroloģiskajiem pētījumiem.
Tiek izmantota bioloģiskā metode - hlamīdiju audzēšana vistas embrija dzeltenuma maisiņā, šūnu kultūrā. Seroloģiskā metode. Uzklājiet RSK, RPGA, ELISA, izmantojot pārī savienotu pacienta asins serumu. Intradermālā alerģijas pārbaude ar ornitīnu.
Ārstēšana: antibiotikas (tetraciklīni, makrolīdi).
BIĻETE # 29
Nr. 1 difterijas izraisītājs. Taksonomija un raksturojums. Nosacīti patogēnas korinibaktērijas. Mikrobioloģiskā diagnostika. Anatoksiskas imunitātes atklāšana. Specifiska profilakse un ārstēšana.
Difterija ir akūta infekcijas slimība, kurai raksturīgs fibrinozs iekaisums rīkle, balsene, retāk citos orgānos un intoksikācija. Tās izraisītājs ir Corynebacterium diphtheriae.
Taksonomija. Corynebacterium pieder pie Firmicutes, Corynebacterium ģints, dalījuma.
Morfoloģiskās un tinktūras īpašības. Difterijas ierosinātāju raksturo polimorfisms: plāni, nedaudz izliekti stieņi (visbiežāk), ir kokkoīdu un zarojošās formas. Baktērijas bieži atrodas leņķī viena pret otru. Viņi neveido sporas, tiem nav flagellu, un mikrokapsula tiek atklāta daudzos celmos. Raksturīga iezīme ir volutīna graudu klātbūtne nūjas galos (nosaka klaveda formu). Difterijas izraisītājs pēc Grama krāso pozitīvi.
Kultūras īpašības. Pēc izvēles anaerobs, optim. temperatūra. Mikrobs aug uz īpašām barības vielu barotnēm, piemēram, uz Clauberg barotnes (asins tellurīta agars), uz kuras difterijas bacillus ražo 3 veidu kolonijas: a) lielas, pelēkas, ar neregulārām malām, radiālu striatūru, kas atgādina margrietiņas; b) mazs, melns, izliekts, ar gludām malām; c) līdzīgi pirmajam un otrajam.
Atkarībā no kultūras un fermentatīvajām īpašībām izšķir 3 C. diphtheriae bioloģiskos variantus: gravis, mitis un starpposma starpposms.
Fermentatīvā aktivitāte. Augsts. Viņi fermentē glc un maltozi, veidojot skābi, nesadalās saharoze, laktoze un mannīts. Tie neražo ureāzi un neveido indolu. Tas ražo cistināzes enzīmu, kas cisteīnu sašķeļ līdz H 2 S. Tas veido katalāzi, sukcināta dehidrogenāzi.
Antigēnu īpašības. O-antigēni ir termostabili polisaharīdu antigēni, kas atrodas dziļi šūnu sienā. K-antigēni - virszemes, termolabili, pelēcīgi specifiski. Ar serumu palīdzību K-antigēns C.diph. ir sadalīti serovāros (58).
Patogēnie faktori. Eksotoksīns, kas izjauc olbaltumvielu sintēzi un tādējādi bojā miokarda, virsnieru dziedzeru, nieru un nervu gangliju šūnas. Spēja ražot eksotoksīnu ir saistīta ar propagēna klātbūtni šūnā, kas satur toksīnu, kas ir atbildīgs par toksīna veidošanos. Agresijas fermenti - hialuronidāze, neiraminidāze. Mikrokapsula pieder arī pie patogenitātes faktoriem.
Pretestība. Izturīgs pret žāvēšanu, zemu temperatūru, tāpēc vairākas dienas to var uzglabāt ūdenī esošos priekšmetos.
Epidemioloģija. Difterijas avots - slimi cilvēki Infekcija biežāk notiek caur elpošanas ceļiem. Galvenais pārraides ceļš ir gaisā, iespējams arī kontakta ceļš - caur linu, traukiem.
Patoģenēze. Infekcijas ieejas vārti ir rīkles, deguna, elpošanas ceļu, acu, dzimumorgānu, brūces virsmas gļotādas. Ieejas vārtu vietā tiek novērots fibrinozs iekaisums, veidojas raksturīga plēve, kas gandrīz nav atdalīta no pamatā esošajiem audiem. Baktērijas izdala eksotoksīnu, kas nonāk asinīs - attīstās toksinēmija. Toksīns ietekmē miokardu, nieres, virsnieru dziedzerus un nervu sistēmu.
Klīnika. Lokalizācijā ir dažādas difterijas formas: rīkles difterija, kas novērojama 85-90% gadījumu, deguna, balsenes, acu, ārējo dzimumorgānu, ādas, brūču difterija. Inkubācijas periods ir no 2 līdz 10 dienām. Slimība sākas ar ķermeņa temperatūras paaugstināšanos, sāpēm norijot, plēves parādīšanos uz mandeles, limfmezglu palielināšanos. Attīstās balsenes, difterijas krustu tūska, kas var izraisīt asfiksiju un nāvi. Citas nopietnas komplikācijas, kas var izraisīt arī nāvi, ir toksisks miokardīts, elpošanas muskuļu paralīze.
Imunitāte. Pēc slimības - noturīga, intensīva anti-toksiska imunitāte. Īpaša nozīme ir antivielu veidošanās pret fragmentu B. Tie neitralizē difterijas histotoksīnu, neļaujot pēdējam pievienoties šūnai. Antibakteriālā imunitāte - nepārspīlēta, specifiska pelēcīgi
Mikrobioloģiskā diagnostika... Ar tampona palīdzību pacientam tiek noņemta plēve un gļotas no rīkles un deguna. Iepriekšējai diagnozei ir iespējams izmantot bakterioskopisko metodi. Galvenā diagnostikas metode ir bakterioloģiska: inokulēšana uz Clauber II barotnes (asins-tellurīta agars), uz blīvas seruma barotnes, lai noteiktu cistināzes veidošanos, uz Giss barotnes, uz barotnes patogēna toksicitātes noteikšanai. Intraspecifiskā identifikācija sastāv no bio- un serovāra noteikšanas. Paātrinātai difterijas toksīna noteikšanai tiek izmantoti: RNGA (netieša hemaglutinācijas reakcija) ar antivielu eritrocītu diagnostiku, antivielu neitralizācijas reakcija (toksīna klātbūtne tiek vērtēta pēc hemagutinācijas novēršanas efekta); RIA (radioimunoanalīze) un ELISA (ar enzīmiem saistīts imūnsorbcijas tests).
Ārstēšana. Galvenā terapijas metode ir tūlītēja specifiska antitoksiska antidifterijas zirgu šķidruma seruma ieviešana. Cilvēka imūnglobulīna antidifterija intravenozai ievadīšanai.
Saistītās vakcīnas: DPT (absorbēta stingumkrampju-garā klepus vakcīna), ADS (absorbēts difterijas-stingumkrampju toksoīds).
№ 2 Imūnglobulīnu klases, to raksturojums.
Struktūras, antigēnu un imunobioloģisko īpašību ziņā imūnglobulīni tiek iedalīti piecās klasēs: IgM, IgG, IgA, IgE, IgD.
Imūnglobulīna klase G. Izotips G veido lielāko daļu seruma Ig. Tas veido 70-80% no visa seruma Ig, bet 50% ir audu šķidrumā. Vidējais IgG saturs veselīga pieauguša cilvēka asins serumā ir 12 g / l. IgG pussabrukšanas periods ir 21 diena.
IgG ir monomērs, tajā ir 2 antigēnu saistošie centri (tas vienlaikus var saistīt 2 antigēna molekulas, tāpēc tā valence ir 2), molekulmasa ir aptuveni 160 kDa un sedimentācijas konstante 7S. Ir Gl, G2, G3 un G4 apakštipi. To sintezē nobrieduši B-limfocīti un plazmas šūnas. Labi definēts asins serumā primārās un sekundārās imūnās atbildes maksimumā.
Tam ir augsta afinitāte. IgGl un IgG3 saistās ar komplementu, un G3 ir aktīvāks nekā Gl. IgG4, tāpat kā IgE, piemīt citofilitāte (tropisms vai afinitāte pret tuklajām šūnām un bazofiliem), un tas ir iesaistīts I tipa alerģisku reakciju attīstībā. Imūndiagnostikas reakcijās IgG var izpausties kā nepilnīga antiviela.
Tas viegli iziet caur placentas barjeru un nodrošina humorālu imunitāti jaundzimušajiem pirmajos 3-4 dzīves mēnešos. To difūzijas veidā var izdalīt arī gļotādās, ieskaitot pienu.
IgG nodrošina antigēna neitralizāciju, opsonizāciju un marķēšanu, izraisa komplementa mediētu citolīzi un no antivielām atkarīgu šūnu izraisītu citotoksicitāti.
Imūnglobulīna M. klase. Visu Ig lielākā molekula. Tas ir pentamērs, kuram ir 10 antigēnu saistošie centri, ti, tā valence ir 10. Tā molekulmasa ir aptuveni 900 kDa, sedimentācijas konstante ir 19S. Ir Ml un M2 apakštipi. IgM molekulas smagās ķēdes, atšķirībā no citiem izotipiem, ir veidotas no 5 domēniem. IgM pussabrukšanas periods ir 5 dienas.
Tas veido apmēram 5-10% no visa seruma Ig. Vesela pieauguša cilvēka vidējais IgM saturs serumā ir aptuveni 1 g / l. Šis līmenis cilvēkiem tiek sasniegts līdz 2-4 gadu vecumam.
IgM ir filogenētiski vissenākais imūnglobulīns. To sintezē prekursori un nobrieduši B-limfocīti. Tas veidojas primārās imūnreakcijas sākumā, tas ir arī pirmais, kas tiek sintezēts jaundzimušā ķermenī - tas tiek noteikts jau 20. intrauterīnās attīstības nedēļā.
Piemīt augsta aviditāte, visefektīvākais komplementa aktivators klasiskajā veidā. Piedalās seruma un sekrēcijas humorālās imunitātes veidošanā. Tā kā tā ir polimēra molekula, kas satur J-ķēdi, tā var veidot sekrēcijas formu un izdalīties gļotādu, ieskaitot pienu, sekrēcijā. Lielākā daļa parasto antivielu un izoaglutinīnu ir IgM.
Nešķērso placentu. Specifisku M izotipa antivielu noteikšana jaundzimušā asins serumā norāda uz bijušo intrauterīno infekciju vai placentas defektu.
IgM nodrošina antigēna neitralizāciju, opsonizāciju un marķēšanu, izraisa komplementa mediētu citolīzi un no antivielām atkarīgu šūnu izraisītu citotoksicitāti.
A klases imūnglobulīns. Tas pastāv seruma un sekrēcijas formās. Aptuveni 60% no visa IgA ir gļotādu izdalījumos.
Seruma IgA: Tas veido apmēram 10-15% no visa seruma Ig. Vesela pieauguša cilvēka asins serumā ir apmēram 2,5 g / l IgA, maksimums tiek sasniegts līdz 10 gadu vecumam. IgA pusperiods ir 6 dienas.
IgA ir monomērs, tajā ir 2 antigēnu saistošie centri (t.i., 2-valenti), molekulmasa ir aptuveni 170 kDa un sedimentācijas konstante 7S. Ir A1 un A2 apakštipi. To sintezē nobrieduši B-limfocīti un plazmas šūnas. Labi definēts asins serumā primārās un sekundārās imūnās atbildes maksimumā.
Tam ir augsta afinitāte. Var būt nepilnīga antiviela. Nesaista papildinājumu. Neiziet cauri placentas barjerai.
IgA nodrošina neitralizāciju, opsonizāciju un antigēna marķēšanu, izraisa no antivielām atkarīgu šūnu izraisītu citotoksicitāti.
Sekrēcijas IgA: Atšķirībā no seruma sekrēcijas sIgA eksistē polimēra formā kā di- vai trimērs (4- vai 6-valents) un satur J- un S-peptīdus. Molekulmasa 350 kDa un vairāk, sedimentācijas konstante 13S un augstāka.
To sintezē nobrieduši B-limfocīti un to pēcnācēji - atbilstošās specializācijas plazmas šūnas tikai gļotādās un izdalās to sekrēcijās. Ražošanas apjoms var sasniegt 5 g dienā. SlgA baseins tiek uzskatīts par vislielāko daudzumu organismā - tā daudzums pārsniedz kopējo IgM un IgG saturu. Asins serumā to nenosaka.
IgA sekrēcijas forma ir galvenais faktors kuņģa-zarnu trakta, uroģenitālās sistēmas un elpošanas trakta gļotādu specifiskajai humorālajai vietējai imunitātei. S-ķēdes dēļ tā ir izturīga pret proteāzēm. slgA neaktivizē komplementu, bet tas efektīvi saistās ar antigēniem un neitralizē tos. Tas novērš mikrobu saķeri ar epitēlija šūnām un infekcijas vispārināšanu gļotādās.
E klases imūnglobulīns. To sauc arī par reagin. Asins seruma saturs ir ārkārtīgi zems - apmēram 0,00025 g / l. Atklāšanai nepieciešams izmantot īpašas ļoti jutīgas diagnostikas metodes. Molekulmasa - aptuveni 190 kDa, sedimentācijas konstante - apmēram 8S, monomērs. Tas veido aptuveni 0,002% no visa cirkulējošā Ig. Šo līmeni sasniedz 10-15 gadu vecums.
To sintezē nobrieduši B-limfocīti un plazmas šūnas galvenokārt bronhopulmonārā koka un kuņģa-zarnu trakta limfoīdajos audos.
Nesaista papildinājumu. Neiziet cauri placentas barjerai. Ir izteikta citofilitāte - tropisms tuklo šūnu un bazofilu gadījumā. Piedalās tūlītējas paaugstinātas jutības - I tipa reakcijas attīstībā.
Imūnglobulīna D. klase. Nav daudz informācijas par šī izotipa Ig. Tas gandrīz pilnībā atrodas asins serumā koncentrācijā aptuveni 0,03 g / l (apmēram 0,2% no kopējā cirkulējošā Ig skaita). IgD molekulmasa ir 160 kDa un sedimentācijas konstante ir 7S, monomērs.
Nesaista papildinājumu. Neiziet cauri placentas barjerai. Tas ir B-limfocītu prekursoru receptors.
BIĻETE # 30
Nr. 1 amebiāzes izraisītājs. Taksonomija. Raksturīgi. Mikrobioloģiskā diagnostika. Īpaša apstrāde.
Taksonomija: tips Sarcomastigophorae, apakštips Sarcodina, Lobosia klase, pasūtījums Amoebida.
Morfoloģija: Ir divi patogēna attīstības posmi: veģetatīvā un cistiskā. Veģetācijas stadijai ir vairākas formas: liela veģetatīvā (audu), mazā veģetatīvā; precystic forma, līdzīga luminal formai, veidojot cistas.
Cistai (atpūtas stadijā) ir ovāla forma. Nobriedušā cista satur 4 kodolus. Lumen forma ir neaktīva, dzīvo resnās zarnas lūmenā kā nekaitīgs komensāls, barojas ar baktērijām un detrītu.
No nelielas veģetatīvās formas noteiktos apstākļos tiek veidota liela veģetatīvā forma. Tas ir lielākais, veido pseidopodijas un tam ir kustība. Var fagocitēt eritrocītus. Tas ir atrodams svaigos izkārnījumos ar amebiāzi.
Audzēšana: uz barības vielām bagātā vidē.
Pretestība: Ārpus ķermeņa patogēna veģetatīvās formas ātri mirst (30 minūšu laikā). Cistas ir noturīgas vidē un saglabājas izkārnījumos un ūdenī. Pārtikā, dārzeņos un augļos cistas saglabājas vairākas dienas. Viņi mirst vārot.
Epidemioloģija: Amebiāze - antroponiska slimība; iebrukuma avots ir cilvēks. Pārraides mehānisms ir fekāls-orāls. Infekcija rodas, ja cistas tiek ievadītas ar pārtiku, ūdeni, izmantojot sadzīves priekšmetus.
Patoģenēze un klīnika: Cistas, kas iekļuvušas zarnās, un amēbu lūmenu formas, kas pēc tam izveidojušās no tām, var apdzīvot resno zarnu, neizraisot slimības. Samazinoties ķermeņa pretestībai, amēbas tiek ievadītas zarnu sienās un vairojas. Zarnu amebiāze attīstās.
Audu formas trofozoīti ir pseidopodiju veidošanās dēļ mobili. Viņi iekļūst resnās zarnas sienā, izraisot nekrozi; spēj fagocitēt eritrocītus; var atrast cilvēka izkārnījumos. Ar nekrozi veidojas čūlas. Klīniski zarnu amebiāze izpaužas kā biežas vaļīgas izkārnījumi ar asinīm, ko papildina drudzis un dehidratācija. Izkārnījumos ir atrodamas strutas un gļotas, dažreiz ar asinīm.
Amēbas ar asins plūsmu var iekļūt aknās, plaušās, smadzenēs, kā rezultātā attīstās ārpuszarnu amebiāze.
Imunitāte: Nestabila, galvenokārt tiek aktivizēta mobilā saite.
Mikrobioloģiskā diagnostika. Galvenā metode ir pacienta ekskrementu, kā arī iekšējo orgānu abscesu satura mikroskopiska pārbaude. Uztriepes iekrāso ar Lugola šķīdumu vai hematoksilīnu. Seroloģiskie pētījumi (RNGA, ELISA, RSK): augstākais antivielu titrs asins serumā tiek noteikts ar ārpuszarnu amebiāzi.
Ārstēšana: Uzklājiet metronidazolu, furamīdu.
Profilakse: cistu sekrēciju un amēbu nesēju identificēšana un ārstēšana, veicot vispārējus sanitāros pasākumus.
Interferoni Nr. 2. Raksturs, iegūšanas metodes. Pieteikums.
Interferoni ir glikoproteīni, ko šūnas ražo, reaģējot uz vīrusu infekcijām un citiem stimuliem. Viņi bloķē vīrusa reprodukciju citās šūnās un piedalās imūnsistēmas šūnu mijiedarbībā. Ir divas interferonu seroloģiskās grupas: I tips - IFN-? un IFN-? II tips - IFN-.? I tipa interferoniem ir pretvīrusu un pretaudzēju iedarbība, savukārt II tipa interferons regulē specifisku imūnreakciju un nespecifisku rezistenci.
Interferonu (leikocītus) ražo leikocīti, kas apstrādāti ar vīrusiem un citiem līdzekļiem. a-interferonu (fibroblastu) ražo ar vīrusiem apstrādāti fibroblasti.
IFN I tips, saistoties ar veselām šūnām, pasargā tās no vīrusiem. I tipa IFN pretvīrusu efekts var būt saistīts arī ar to, ka tas spēj kavēt šūnu proliferāciju, traucējot aminoskābju sintēzi.
IFN-? ko ražo T-limfocīti un NK. Stimulē T- un B-limfocītu, monocītu / makrofāgu un neitrofilu aktivitāti. Tas izraisa aktivēto makrofāgu, keratinocītu, hepatocītu, kaulu smadzeņu šūnu, endotēlija šūnu apoptozi un nomāc perifēro monocītu un ar herpes inficētu neironu apoptozi.
Ģenētiski modificēts leikocītu interferons tiek ražots prokariotu sistēmās (Escherichia coli). Biotehnoloģija leikocītu interferona iegūšanai ietver šādus posmus: 1) leikocītu masas apstrāde ar interferona induktoriem; 2) mRNS maisījuma izolēšana no apstrādātajām šūnām; 3) kopējās komplementārās DNS iegūšana, izmantojot reverso transkriptāzi; 4) cDNS ievietošana Escherichia coli plazmīdā un tās klonēšana; 5) klonu atlase, kas satur interferona gēnus; 6) spēcīga promotera iekļaušana plazmīdā veiksmīgai gēnu transkripcijai; 7) interferona gēna ekspresija, t.i. attiecīgā proteīna sintēze; 8) prokariotu šūnu iznīcināšana un interferona attīrīšana, izmantojot afinitātes hromatogrāfiju.
Interferoni pieteikties vairāku vīrusu infekciju profilaksei un ārstēšanai. To iedarbību nosaka zāļu deva, bet lielām interferona devām ir toksiska iedarbība. Interferonus plaši izmanto gripas un citu akūtu elpošanas ceļu slimību gadījumos. Zāles ir efektīvas slimības sākuma stadijā, tās lieto lokāli. Interferoniem ir terapeitiska iedarbība B hepatīta, herpes, kā arī ļaundabīgu jaunveidojumu gadījumā.
11621 0
Seroloģiskās reakcijas tiek noteiktas saskaņā ar parādībām, kas pavada antigēna-antivielu kompleksa veidošanos dažādu īpašību sastāvdaļu mijiedarbības laikā. Ir aglutinācijas, nokrišņu un lizēšanas reakcijas.
Aglutinācijas tests (RA)
Aglutinācijas reakcijas (RA) pamatā ir korpuskulārā antigēna (baktēriju suspensija, sensibilizēti eritrocīti, lateksa daļiņas utt.) Mijiedarbība ar specifiskām antivielām, kā rezultātā iegūtais antigēna-antivielu komplekss izgulsnējas. Šo reakciju laboratorijas praksē plaši izmanto bakteriālu infekciju seroloģiskai diagnostikai un izolētu mikroorganismu identificēšanai.
RA lieto, lai diagnosticētu daudzas infekcijas slimības: brucelozi (Wright un Heddleson reakcijas), tularēmiju, leptospirozi (RAL - leptospiras aglutinācijas un lizēšanas reakcija), listeriozi, tīfu (PAP - riketsijas aglutinācijas reakcija), šigelozi, jersiniozi un citas.
Netieša vai pasīva aglutinācijas reakcija (RIGA vai RPGA).
Šīs reakcijas inscenēšanai tiek izmantoti ar antivielām vai antigēnu sensibilizētu dzīvnieku (auna, pērtiķa, jūrascūciņu, dažu putnu) eritrocīti, ko panāk, inkubējot eritrocītu suspensiju un antigēna vai imūnā seruma šķīdumu.
Tiek saukti diagnozi, kas iegūti, pamatojoties uz antigēniem sensibilizētiem eritrocītiem antigēnu eritrocītu diagnostika... Tie ir paredzēti antivielu noteikšanai asins serumu sērijveida atšķaidījumos, piemēram, eritrocītu šigelozes diagnostikā, eritrocītu salmonellu O-diagnostikā.
Attiecīgi tiek saukta diagnostika, kuras pamatā ir eritrocīti, kas sensibilizēti ar specifiskiem imūnglobulīniem antīks (imūnglobulīns) diagnostikasun tie kalpo antigēnu noteikšanai dažādos materiālos, piemēram, eritrocītu imūnglobulīna difterijas diagnostikai RIGA, ko izmanto koribakteriju difterijas eksotoksīna noteikšanai šķidrā barības vielā, sējot tajā materiālu no deguna un orofaringeāla.
Hemaglutinācijas reakciju izmanto, lai diagnosticētu gan bakteriālas (vēdertīfs, paratīfs, dizentērija, bruceloze, mēris, holēra utt.), Gan vīrusu (gripa, adenovīrusa infekcijas, masalas utt.) Infekcijas. RIGA pārspēj RA jutīgumu un specifiskumu.
Hemaglutinācijas inhibīcijas reakcija (RTGA)
Hemaglutinācijas inhibēšanas reakciju (RTGA) izmanto, lai titrētu pretvīrusu antivielas asins serumā, kā arī noteiktu izolētu vīrusu kultūru tipu. RTGA var izmantot, lai diagnosticētu tās vīrusu infekcijas, kuru izraisītājiem ir hemaglutinējošas īpašības.
Metodes princips ir tāds, ka serums, kas satur antivielas pret noteiktu vīrusa tipu, nomāc tā hemaglutinējošo aktivitāti un eritrocīti paliek neaglutināti.
Pasīvās hemaglutinācijas (RTPHA) reakcijas inhibīcija (kavēšanās).
RTPHA ir iesaistīti trīs komponenti: imūnserums, antigēns (testa materiāls) un sensibilizētie eritrocīti.
Ja testa materiāls satur antigēnu, kas īpaši reaģē ar standarta imūno seruma antivielām, tas tos saista, un pēc tam pievienojot eritrocītus, kas sensibilizēti ar serumam homoloģisku antigēnu, hemaglutinācija nenotiek.
RTPHA tiek izmantots mikrobu antigēnu noteikšanai, kvantitatīvai noteikšanai un arī RPHA specifiskuma kontrolei.
Lateksa aglutinācijas reakcija (LAT)
Lateksa daļiņas tiek izmantotas kā antivielu (imūnglobulīnu) nesējs. RLA ir ekspresmetode infekcijas slimību diagnosticēšanai, ņemot vērā laiku (līdz 10 minūtēm) un spēju noteikt antigēnu nelielā testa materiāla tilpumā.
RLA lieto, lai norādītu Streptococcus pneumoniae, b tipa Haemophilus influenzae, Neisseria meningitidis antigēnus cerebrospinālajā šķidrumā, A grupas streptokoku noteikšanai rīkles uztriepēs, salmonelozes, jersiniozes un citu slimību diagnosticēšanai. Metodes jutīgums ir 1–10 ng / ml vai 10–10⁶ baktēriju šūnas 1 µl.
Koaglutinācijas reakcija (RCoA)
Koaglutinācijas reakcijas (RCoA) pamatā ir stafilokoku proteīna A spēja saistīt specifiskus imūnglobulīnus. RCA - ekspresdiagnostikas metode - tiek izmantota, lai noteiktu šķīstošos termostabilos antigēnus cilvēka sekrēcijās un kā daļu no cirkulējošiem imūnkompleksiem (CIC). Konkrētu antigēnu noteikšanai CEC nepieciešams to iepriekšējs nogulsnēšanās no asins seruma.
Nokrišņu reakcija
Nogulsnēšanās reakcijā (RP) antivielu mijiedarbības rezultātā ar ļoti disperģētiem šķīstošiem antigēniem (olbaltumvielām, polisaharīdiem) veidojas kompleksi ar komplementa līdzdalību - nogulsnes. Tas ir jutīgs tests, ko izmanto, lai atklātu un raksturotu ļoti dažādus antigēnus un antivielas. Vienkāršākais augstas kvalitātes RP piemērs ir necaurspīdīgas nokrišņu joslas veidošanās mēģenē pie antigēna slāņa robežas uz imūnseruma - gredzena nogulsnēšanās reakcija. Dažādi RP veidi tiek plaši izmantoti pusšķidros agara vai agarozes gēlos (dubultās imūndifūzijas metode, radiālās imūndifūzijas metode, imunoelektroforēze).
Komplementa fiksācijas reakcija (CBC)
Komplementa saistīšanas reakcija (CSC) balstās uz hemolīzes fenomenu ar komplementa piedalīšanos, t.i. spēj noteikt tikai komplementu saistošas \u200b\u200bantivielas.
RSK plaši izmanto daudzu baktēriju un vīrusu infekciju, riketsiozes, hlamīdiju, infekciozas mononukleozes, vienšūņu infekciju, helmintiāzes diagnosticēšanai. CSC ir sarežģīta seroloģiska reakcija, kurā ir iesaistītas divas sistēmas: pētītā sistēma (asins serums), ko attēlo antigēna-antivielu un komplementa sistēma, un hemolītiskā (aitu eritrocīti + hemolītiskais serums). Hemolītiskais serums ir asins serums, kas inaktivēts, sildot trušu, kas imunizēts ar aitu eritrocītiem. Tas satur antivielas pret aitu eritrocītiem.
Pozitīvs RSK rezultāts - hemolīzes neesamība - tiek novērots, ja testa serumā ir antigēnam homoloģiskas antivielas. Šajā gadījumā izveidotais antigēna - antivielu komplekss saista komplementu, un, ja nav brīva komplementa, hemolītiskās sistēmas pievienošana netiek papildināta ar hemolīzi. Ja serumā nav antigēnu, kas atbilst antigēnam, antigēna-antivielu kompleksa veidošanās nenotiek, papildinājums paliek brīvs un serums izraisa eritrocītu hemolīzi, t.i. hemolīzes klātbūtne ir negatīvs reakcijas rezultāts.
Juščuks N.D., Vengerovs Yu.Ya.
119. Seroloģiskie testi, ko izmanto vīrusu infekciju diagnosticēšanai.
Noteikšana serumā slimas antivielas pret patogēnu antigēniem ļauj diagnosticēt slimību. Seroloģiskos pētījumus izmanto arī, lai identificētu mikrobu antigēnus, dažādas bioloģiski aktīvās vielas, asins grupas, audu un audzēju antigēnus, imūnkompleksus, šūnu receptorus utt.
Kad mikrobs ir izolēts no pacienta patogēns tiek identificēts, pētot tā antigēnās īpašības, izmantojot imūndiagnostikas serumus, t.i., hiperimunizētu dzīvnieku asins serumus, kas satur specifiskas antivielas. Tas ir tā saucamais seroloģiskā identifikācijamikroorganismi.
Mikrobioloģijā un imunoloģijā tie tiek plaši izmantoti aglutinācijas, nogulsnēšanās, neitralizācijas reakcijas, reakcijas, kas saistītas ar komplementu, izmantojot iezīmētas antivielas un antigēnus (radioimunoloģiskās, enzīmu imunoloģiskās pārbaudes, imūnfluorescences metodes). Uzskaitītās reakcijas atšķiras no reģistrētā efekta un iestudēšanas paņēmiena, tomēr tās visas ir balstītas uz antigēna mijiedarbības reakciju ar antivielu un tiek izmantotas gan antivielu, gan antigēnu noteikšanai. Imunitātes reakcijām raksturīga augsta jutība un specifiskums.
Antivielu un antigēna mijiedarbības iezīmes ir laboratoriju diagnostisko reakciju pamatā. Reakcija in vitrostarp antigēnu un antivielu sastāv no specifiskas un nespecifiskas fāzes. AT konkrētā fāzenotiek ātra antivielas aktīvā centra specifiska saistīšanās ar antigēna determinantu. Tad nāk nespecifisks posms -lēnāk, kas izpaužas redzamās fizikālās parādībās, piemēram, pārslu veidošanās (aglutinācijas parādība) vai nokrišņu veidošanās duļķainības formā. Šai fāzei nepieciešami noteikti apstākļi (elektrolīti, optimālais vides pH).
Antigēna determinanta (epitopa) saistīšanās ar antivielu Fab fragmenta aktīvo centru ir saistīta ar van der Vālsa spēkiem, ūdeņraža saitēm un hidrofobo mijiedarbību. Antivielu saistītā antigēna stiprums un daudzums ir atkarīgs no antivielu afinitātes, aviditātes un to valences.
Uz jautājumu par ātrdiagnostiku:
1. Kultūra, kas izolēta tīrā veidā, ir piemērota diagnostikai. 2. Speciāli aprīkotās laboratorijās (atļaujai jābūt) 3. Atbilstība tādiem stingriem noteikumiem kā: izolēta telpa, nepieciešamie speciālie aizsargtērpi, obligāta telpas pilnīga sanitārija pēc darba ar patogēnu, pētnieku sanitārija pēc darba beigām. Ekspertu diagnostikas metodes. 1. Bakterioloģija - kombinētas politropiskās barības vielas ātrai morfu, tinktora, bioķīmijas izpētei. īpašības. Fermentu-indikatoru lentes izmantošana, elektrofizikālā metode, papīra disku metode, kas piesūcināta ar dažādām vielām (glikozi, laktozi utt.) 2. Fagodiagnostika. 3. Serodiagnostika - Mančīni metode, nokrišņi želejā pēc Ascoli, RA, RPGA. 4. Bakterioskopija - tieša un netieša RIF. Ekspresdiagnostikas metodes holērai - M.Z. Ermoljeva, imobilizācijas rajons ar holēras diagnostisko serumu, RIF. Tularemia - RA uz stikla, RPGA Plague - fāgu tipēšana, ogļhidrātu papīra disku metode, RPGA. Sibīrijas čūla - Askoli metode, RIF, RPGA. Izaugsmes raksturs: ir trīs izkliedēti (fakultatīvi anaerobi), apakšējie (obligātie anaerobi) un virspusējie (obligātie aerobi).
Tīras anaerobo baktēriju kultūras izolēšana
Laboratorijas praksē jums bieži būs jāstrādā ar anaerobiem mikroorganismiem. Barības vielu vidē tie ir dīvaināki nekā aerobi, viņiem bieži nepieciešami īpaši augšanas papildinājumi, audzēšanas laikā ir jāpārtrauc skābekļa piekļuve, to augšanas ilgums ir ilgāks. Tāpēc darbs ar viņiem ir sarežģītāks un prasa ievērojamu bakteriologu un laboratorijas palīgu uzmanību.
Materiālu, kas satur anaerobos patogēnus, ir svarīgi aizsargāt no atmosfēras skābekļa toksiskās ietekmes. Tāpēc ieteicams veikt materiālu no strutojošas infekcijas perēkļiem to punkcijas laikā ar šļirci; laikam starp materiāla ņemšanu un sēšanu uz barības vielas jābūt pēc iespējas īsākam.
Tā kā anaerobo baktēriju kultivēšanai tiek izmantotas īpašas barības vielas, kurām nevajadzētu saturēt skābekli un kurām ir zems redoksa potenciāls (-20 -150 mV), to sastāvam pievieno tādus rādītājus kā resazurīns, metilēnzils un tamlīdzīgi, kas reaģē uz šī potenciāla izmaiņām. Ar tās augšanu bezkrāsainas indikatoru formas tiek atjaunotas un mainās to krāsa: resazurīns iekrāso vidēji sārtu, bet metilēnzils - zilu. Šādas izmaiņas norāda uz neiespējamību izmantot barotnes anaerobo mikrobu audzēšanai.
Tas palīdz samazināt redoks potenciālu, ievadot vidē vismaz 0,05% agara, kas, palielinot tā viskozitāti, palīdz samazināt skābekļa daudzumu. Tas, savukārt, tiek panākts arī, izmantojot svaigus (ne vēlāk kā divas stundas pēc ražošanas) un samazinātu barības vielu barotni.
Jāatzīmē, ka anaerobo baktēriju fermentatīvā metabolisma veida īpatnību dēļ tām nepieciešama vide, kas ir bagātāka ar uztura sastāvdaļām un vitamīniem. Visbiežāk tiek izmantoti sirds-smadzeņu un aknu uzlējumi, sojas un rauga ekstrakti, kazeīna, peptona, triptona hidrolītiskais sagremojums. Obligāti jāpievieno augšanas faktori, piemēram, tween-80, hemīns, menadions, veselas vai hemolizētas asinis.
Tīras aerobo mikroorganismu kultūras izolēšana sastāv no vairākiem posmiem. Pirmajā dienā (pētījuma 1. posms) patoloģisko materiālu ņem sterilā traukā (mēģenē, kolbā, pudelē). To pēta pēc izskata, konsistences, krāsas, smaržas un citām pazīmēm, sagatavo, krāso un pārbauda mikroskopā uztriepi. Dažos gadījumos (akūta gonoreja, mēris) šajā posmā ir iespējams veikt iepriekšēju diagnozi un papildus izvēlēties barotni, uz kuras tiks inokulēts materiāls. Tam vajadzēja bakterioloģisko cilpu (visbiežāk izmanto), izmantojot lāpstiņu pēc Drygalsky metodes, ar vates-marles tamponu. Krūzītes ir aizvērtas, apgrieztas otrādi, parakstītas ar īpašu zīmuli un ievietotas termostatā optimālā temperatūrā (37 ° C) 18-48 gadus. Šī posma mērķis ir iegūt izolētas mikroorganismu kolonijas. Tomēr dažreiz, lai materiālu sakrātu, to sēj uz šķidru barības vielu barotni.
Uztriepes sagatavo no aizdomīgām kolonijām, krāso, izmantojot Grama metodi, lai pētītu patogēnu morfoloģiskās un tinktūras īpašības, un kustīgās baktērijas pārbauda “karājošā” vai “sasmalcinātā” pilienā. Šīm pazīmēm ir ārkārtīgi liela diagnostiskā vērtība, raksturojot noteiktus mikroorganismu tipus. Izmeklēto koloniju paliekas uzmanīgi, nepieskaroties citām, tiek noņemtas no barotnes virsmas un inokulētas uz slīpa agara vai uz Petri trauku sektoriem ar barības vielu, lai iegūtu tīru kultūru. Testa mēģenes vai kultūras traukus ievieto termostatā optimālā temperatūrā 18–24 stundas.
Baktērijas dažādos veidos var augt arī uz šķidru barības vielu barotnes, lai gan augšanas izpausmju pazīmes ir sliktākas nekā uz cietām barotnēm.
Baktērijas var izraisīt barotnes izkliedētu izkliedi, savukārt tās krāsa var nemainīties vai iegūt pigmenta krāsu. Šo augšanas modeli visbiežāk novēro lielākajai daļai fakultatīvo anaerobo mikroorganismu.
Dažreiz mēģenes apakšpusē veidojas nogulsnes. Tas var būt drupans, viendabīgs, viskozs, gļotains utt. Vide virs tā var palikt caurspīdīga vai kļūt duļķaina. Ja mikrobi neveido pigmentu, nogulsnēm ir sīruva-bilija vai dzeltenīga krāsa. Anaerobās baktērijas parasti aug līdzīgā pakāpē.
Daļēja augšana izpaužas, veidojot pārslas, graudus, kas piestiprināti pie mēģenes iekšējām sienām. Tajā pašā laikā nesējs paliek caurspīdīgs.
Aerobajām baktērijām ir tendence augt virspusēji. Smalka bezkrāsaina vai zilgana plēve bieži tiek veidota uz virsmas tikko pamanāma pārklājuma formā, kas pazūd, kad barotne tiek nokratīta vai satraukta. Plēve var būt mitra, bieza, tai ir saišķis, gļotaina konsistence un aiz tās stiepjas cilpa. Tomēr ir arī blīva, sausa, trausla plēve, kuras krāsa ir atkarīga no mikroorganismu radītā pigmenta.
Ja nepieciešams, izveido uztriepi, iekrāso, pārbauda mikroskopā un mikroorganismus inokulē ar cilpu uz blīvas barības vielas virsmas, lai iegūtu izolētas kolonijas.
Trešajā dienā (pētījuma 3. posms) tiek pētīts tīras mikroorganismu kultūras augšanas raksturs un tiek veikta tā identifikācija.
Pirmkārt, viņi pievērš uzmanību mikroorganismu augšanas īpatnībām barotnē un veido uztriepi, krāsojot to, izmantojot Grama metodi, lai pārbaudītu kultūras tīrību. Ja mikroskopā tiek novērotas tāda paša veida morfoloģijas, izmēra un tinktūras (spēja krāsot) baktērijas, viņi secina, ka kultūra ir tīra. Dažos gadījumos jau aiz to augšanas izskata un īpašībām var secināt par izolēto patogēnu tipu. Baktēriju tipa noteikšanu pēc to morfoloģiskajām īpašībām sauc par morfoloģisko identifikāciju. Patogēnu veida noteikšanu pēc to kultūras īpašībām sauc par kultūras identifikāciju.
Tomēr šie pētījumi nav pietiekami, lai izdarītu galīgo secinājumu par izolēto mikrobu veidu. Tāpēc viņi pēta baktēriju bioķīmiskās īpašības. Viņi ir diezgan dažādi.
Visbiežāk tiek pētītas saharolītiskās, proteolītiskās, peptolītiskās, hemolītiskās īpašības, dekarboksilāžu, oksidāzes, katalāzes, plazmokoagulāzes, DNāzes, fibrinolizīna enzīmu veidošanās, nitrātu reducēšana par nitrītiem un tamlīdzīgi. Šim nolūkam ir īpašas barības vielas, kas tiek inokulētas ar mikroorganismiem (raiba Giss rinda, MPB, biezpiena sūkalas, piens utt.).
Patogēna veida noteikšanu pēc tā bioķīmiskajām īpašībām sauc par bioķīmisko identifikāciju.
TĪRAS BAKTERIJU KULTŪRAS AUGŠANAS UN IZOLĒŠANAS METODES Veiksmīgai kultivēšanai papildus pareizi izvēlētiem barotnēm un pareizi sētām nepieciešami optimāli apstākļi: temperatūra, mitrums, aerācija (gaisa padeve). Anaerobu audzēšana ir sarežģītāka nekā aerobu; gaisa noņemšanai no barības vielas tiek izmantotas dažādas metodes. Atsevišķu baktēriju veidu (tīras kultūras) izolēšana no testa materiāla, kas parasti satur dažādu mikroorganismu maisījumu, ir viens no jebkura bakterioloģiskā pētījuma posmiem. Tīru mikrobu kultūru iegūst no izolētas mikrobu kolonijas. Kad tīra kultūra tiek izolēta no asinīm (hemokultūra), to sākotnēji "audzē" šķidrā barotnē: 10-15 ml sterilu asiņu inokulē 100-150 ml šķidrā barotnē. Inokulēto asiņu un barotnes attiecība 1:10 nav nejauša - šādi tiek panākta asins atšķaidīšana (neatšķaidītas asinis nelabvēlīgi ietekmē mikroorganismus). Tīras baktēriju kultūras izolēšanas posmi I posms (vietējais materiāls) Mikroskopija (aptuvena mikrofloras ideja). Sēšana uz cietām barības vielām (iegūstot kolonijas). II posms (izolētas kolonijas) Koloniju izpēte (baktēriju kultūras īpašības). Mikrobu mikroskopiskā izmeklēšana notraipītā uztriepē (baktēriju morfoloģiskās īpašības). Inokulē uz barības agara slīpumu, lai izolētu tīru kultūru. III posms (tīra kultūra) Kultūras, morfoloģisko, bioķīmisko un citu īpašību noteikšana baktēriju kultūras identificēšanai BACTERIA IDENTIFIKĀCIJA Izolēto baktēriju kultūru identifikācija tiek veikta, pētot baktēriju morfoloģiju, to kultūras, bioķīmiskās un citas katrai sugai raksturīgās īpašības.
Seroloģisko diagnostiku, kuras pamatā ir antigēna-antivielu reakcija, var izmantot gan šo, gan citu noteikšanai, un tai ir nozīme vīrusu infekcijas etioloģijas noteikšanā pat ar negatīviem vīrusa izolācijas rezultātiem.
Seroloģiskās diagnostikas panākumi ir atkarīgi no reakcijas specifikas un atbilstības asins ņemšanas laika apstākļiem, kas nepieciešami, lai organisms sintezētu antivielas.
Vairumā gadījumu tiek izmantoti sapāroti asins serumi, kas tiek ņemti ar 2-3 nedēļu intervālu. Pozitīva reakcija tiek uzskatīta par antivielu titra palielinājumu vismaz 4 reizes. Ir zināms, ka lielākā daļa specifisko antivielu ietilpst IgG un IgM klasēs, kuras tiek sintezētas dažādos infekcijas procesa laikos. Šajā gadījumā IgM antivielas ir agrīnas, un to noteikšanai izmantotie testi tiek izmantoti agrīnai diagnostikai (pietiek ar viena seruma pārbaudi). IgG antivielas tiek sintezētas vēlāk un saglabājas ilgu laiku.
RN izmanto vīrusu tipēšanai, grupas specifiskai diagnostikai, piemēram, adenovīrusa infekcijai, komplementa fiksācijas reakcija (RSK). Visbiežāk tiek izmantoti hemaglutinācijas inhibīcijas reakcija (RTGA), RSK, RIF, pasīva reakcija un reversā pasīvā hemaglutinācija (RPGA, ROPGA), dažādas ELISA versijas, kas gandrīz visur aizstāja RIA ar vienādu jutību.
RTGA lieto slimību diagnosticēšanai, ko izraisa hemaglutinējoši vīrusi. Tās pamatā ir pacienta seruma antivielu saistīšanās ar pievienoto standarta vīrusu. Reakcijas indikators ir eritrocīti, kas aglutinējas ar vīrusu (veidojas raksturīgs "lietussargs"), ja nav specifisku antivielu, un, ja tādi ir, tie nogulsnējas apakšā, neizglutinēti.
RSK ir viens no tradicionālajiem seroloģiskajiem testiem un tiek izmantots daudzu vīrusu infekciju diagnosticēšanai. Reakcijā piedalās divas sistēmas: pacienta seruma antivielas + standarta vīruss un aitu eritrocīti + antivielas pret tām, kā arī titrētais komplements. Kad antivielas un vīruss sakrīt, šis komplekss saista komplementu un aitu eritrocītu lizēšana nenotiek (pozitīva reakcija). Ar negatīvu CSC papildinājums veicina eritrocītu lizēšanu. Šīs metodes trūkums ir nepietiekami augsta jutība un grūtības standartizēt standartus.
Lai ņemtu vērā CSC, kā arī RTGA nozīmi, ir nepieciešams titrēt pārus serumus, tas ir, veikt slimības sākumā un atveseļošanās periodā.
RPGA - ar vīrusu antigēniem sensibilizētu eritrocītu (vai polistirola lodīšu) aglutinācija antivielu klātbūtnē. Jebkurus vīrusus var sorbēt uz eritrocītiem neatkarīgi no hemaglutinējošās aktivitātes klātbūtnes vai neesamības. Nespecifisku reakciju klātbūtnes dēļ serumi tiek pētīti atšķaidījumā 1:10 vai vairāk.
RNGA - ar specifiskām antivielām sensibilizētu eritrocītu aglutinācija vīrusa antigēnu klātbūtnē. Visizplatītākā ROPHA tika iegūta, kad HBs antigēns tika atklāts gan pacientiem, gan asins donoriem.
JA metode arī patīk ELISA, ko izmanto, lai noteiktu antivielas serumā. ELISA diagnostikas nolūkos kļūst arvien nozīmīgāka un izplatītāka. Vīrusu antigēns tiek sorbēts uz cietās fāzes (polistirola plākšņu vai polistirola lodīšu iedobumu dibens). Pievienojot serumā atbilstošās antivielas, tās saistās ar sorbētajiem antigēniem. Vēlamo antivielu klātbūtne tiek noteikta, izmantojot antivielas (piemēram, cilvēku), kas konjugētas ar fermentu (peroksidāzi). Substrāta pievienošana un substrāta-enzīma reakcija piešķir krāsu. ELISA var izmantot arī antigēnu noteikšanai. Šajā gadījumā antivielas tiek sorbētas uz cietās fāzes.
Monoklonālas antivielas. Liels progress vīrusu infekciju diagnostikā ir sasniegts pēdējā desmitgadē, kad, attīstoties gēnu inženierijas pētījumiem, tika izstrādāta sistēma monoklonālo antivielu iegūšanai. Tādējādi vīrusu antigēnu noteikšanas diagnostikas metožu specifika un jutīgums tika strauji palielināts. Monoklonu šaurā specifika, kas pārstāv nelielu vīrusu olbaltumvielu daļu, kuras, iespējams, nav klīniskajā materiālā, tiek veiksmīgi pārvarēta, izmantojot vairākas monoklonālas antivielas pret dažādiem vīrusu determinantiem.
Dzirdes zudums - simptomi un ārstēšana, cēloņi pieaugušajiem un bērniem
Sievietes reproduktīvais vecums Menstruāciju traucējumu ārstēšana pusaudžiem
NMC diagnostika ginekoloģijā: kas tas ir?
Klotrimazols: lietošanas instrukcijas
Klotrimazols: piena sēnītes ārstēšana