Netiešās (pasīvās) hemaglutinācijas (RF) reakcija ir balstīta uz to, ka eritrocīti, ja to virsmas tiek adsorbētas ar šķīstošo antigēnu, iegūst iespēju aglutinēt mijiedarbojoties ar antivielām adsorbētām antigēniem. Rang shēma ir attēlota 1. attēlā. 34. gredzenu plaši izmanto vairāku infekciju diagnostikā.

Fig. 34. Pasīvā asinsspluatācijas reakcijas shēma (RPGA). A - eritrocītu diagnosticum: B - RPGA: 1 - eritrocīts: 2 - pētīta antigēns; 3 - eritrocitārs diagnosticums; 4 - antiviela, kas pētīta antigēna: 5 - aglutinātāts

Reakcijas formulējums. Testa serumu silda 30 minūtes 56 ° C temperatūrā, kas pastāvīgi izšķīdina attiecība 1:10 - 1: 1280 un pudelēs 0,25 ml caurulē vai akās, kur 2 pilieni eritrocītu diagnosticum (sarkanās asins šūnas ar antigēnu adsorbētu uz tiem) tiek pievienoti.

Kontrole: eritrocītu diagnosticum apturēšana ar acīmredzami imūnsistēmu; diagnostikas apturēšana ar normālu serumu; Parasto eritrocītu klusums ar seruma testu. Pirmajā kontrolē aglutinācijai otrajā un trešajā vietā nedrīkst būt.

Ar Rīgas palīdzību jūs varat definēt nezināmu antigēnu, ja ERYTHROCYTES ADSORB apzināti pazīstamas antivielas.

Hemaglutinācijas reakciju var ievietot 0,025 ml (mikrometi) tilpumā, izmantojot Takachi mikrotitru.

Pārbaudes jautājumi

1. Ko pozitīvā atgriezeniskā saite no RGA starp eritrocītiem un materiālu, kas pētīts par vīrusa klātbūtni?

2. Vai sarkano asins šūnu aglutinācija rodas, ja vīruss un atbilstošais serums to papildinās? Kāds ir reakcijas nosaukums, kas atklāj šo parādību?

Uzdevums

Apsvērt un reģistrēt Rīgas rezultātu.

Nostrādāta reakcija

Naktskretēšanās reakcijā ir noticis īpašs imūnsistēmas nogulsnes, kas sastāv no šķīstošas \u200b\u200bantigēna (lizāta, ekstrakts, hapten) un īpaša antiviela elektrolītu klātbūtnē.

Šī reakcijas rezultātā veidojās dubļainais gredzens vai nogulsnes, ko sauc par nogulsnēm. No aglutinācijas reakcijas, šo reakciju galvenokārt raksturo antigēnu daļiņu lielums.

Nokrišņu reakciju parasti izmanto, lai noteiktu antigēnu vairāku infekciju diagnozē (Sibīrijas čūlas, meningīts utt.); kriminālistikā - lai noteiktu asins, spermas utt. sugu; Sanitārajos un higiēniskajos pētījumos - produktu falsifikācija; Ar savu palīdzību tiek noteikts dzīvnieku un augu phylogenetic radniecība. Lai reakcija prasa:

1. Antivielas (nogulsnītes) - imūnās serums ar augstu antivielu titru (nav mazāks par 1: 100000). Stiprinājuma seruma saturs ir iestatīts uz augstāko antigēna audzēšanu, ar kuru tas dod reakciju. Serums parasti tiek izmantots neattīstīts vai atšķaidījumā 1: 5 - 1:10.

2. Antigēna - izšķīdinātas olbaltumvielu vai lipoid-issecaride dabas (pilnu antigēnu un HAPEN).

3. izotonisks risinājums.

Galvenās nokrišņu reakcijas veikšanas metodes: gredzena vēža reakcija un nokrišņu reakcija agārā (gēla).

Uzmanību! Visām nokrišņu reakcijā iesaistītajām sastāvdaļām jābūt pilnīgi pārredzamām.

Raupja reakcija. Ar nokrišņu cauruli, 0,2-0,3 ml (5-6 pilieni) seruma (serums nedrīkst nokrist uz testa caurules sienām), izmantojot parsētājs pipetes. Uzmanīgi novietojiet antigēnu tādā pašā apjomā, ielejot to ar plānu parsētāju pipeti uz testa caurules sienas. Testa caurule tiek turēta slīpā stāvoklī. Ar pareizi ieklāšanu starp serumu un antigēnu, jāizrāda skaidra robeža. Uzmanīgi, lai nejauktu šķidrumu, testa caurule ievieto statīvā. Ar pozitīvu reakcijas rezultātu uz antigēna robežas un antivielu, dubļainais "gredzens" veidojas - nogulsnes (sk. 48. att.).

Reakciju papildina vairākas kontroles (18. tabula). Ievades secība reakcijas sastāvdaļu mēģenē ir ļoti svarīga. Jūs nevarat likt serumu uz antigēna (kontrolē - uz izotonisku šķīdumu), jo relatīvais blīvums seruma ir lielāks, tas nokristu apakšā testa caurules, un robeža starp šķidrumiem neparādīsies.

18. tabula. Reaģēšanas reakcijas shēma

Piezīme. + "Gredzenu" pieejamība; - nē "gredzens".

Grāmatvedība rezultātiem, kas ražoti 5-30 minūšu laikā, dažos gadījumos stundu, kā vienmēr, sākot ar kontroli. "Gredzens" 2. testa caurulē norāda uz imūnās seruma spēju ievadīt konkrētu reakciju ar atbilstošu antigēnu. 3-5 testa caurulēs "gredzeni" nedrīkst būt - nav antivielu un antigēnu viens otram. "Gredzens" 1. testa caurulē ir pozitīvs reakcijas rezultāts - tas liecina, ka testa antigēns atbilst matētajam imūnajam serumam, "gredzena" trūkums ("gredzens" tikai 2. testa caurulē) norāda to neatbilstība - reakcijas negatīvs rezultāts.

Nocirstīgas reakcijas agarā (gēla). Reakcijas iezīme ir tā, ka antigēna un antiviela mijiedarbība notiek blīvā vidē, t.i. želejā. Veidošanās nogulsnes dod dubļainu sloksni biezumā. Grupas neesamība norāda uz neatbilstību reakcijas komponentiem. Šī reakcija tiek plaši izmantota medicīniskajos un bioloģiskajos pētījumos, jo īpaši, pētot toksikozi difterijas cēloņsakarībā.

Pārbaudes jautājumi

1. Kāda ir galvenā atšķirība starp aglutinācijas un nokrišņu reakciju?

2. Kāpēc nokrišņu reakcijas var neizmantot dubļainas sastāvdaļas?

Uzdevums

1. Ievietojiet gredzena vēža reakciju un skicējiet rezultātu.

2. Pārbaudiet antigēna mijiedarbības raksturu ar antivielu nokrišņu reakciju agarā, redziet rezultātu (saņemiet tasi skolotāja).

Līzes reakcija (imūnās citolīze)

Imūnās līze ir šūnu likvidācija antivielu ietekmē ar obligātu dalību papildinājumā. Lai reakcija prasa:

1. Antigen - mikrobi, eritrocīti vai citas šūnas.

2. Antiviela (lizīns) - imūnās serums, retāk seruma pacients. Bakterolisks serums satur antivielas, kas saistītas ar līzu baktērijām; hemolītiskie - hemolīni, kas veicina sarkano asins šūnu līzi; Līzai spirohet vajadzībām spirohetoles, šūnas - tyolesis utt.

3. papildinājums. Lielākā daļa papildina jūrascūciņu serumā. Šis serums (vairāku dzīvnieku maisījums) parasti tiek izmantots kā papildinājums. Svaiga (dzimtā) papildina kurjeri un viegli sabruka, apsildot, kratot, uzglabāšanu, lai jūs varētu izmantot to ne vairāk kā divas dienas pēc saņemšanas. Lai saglabātu papildinājumu, pievieno 2% borskābes un 3% nātrija sulfāta. Šādu papildinājumu var ietaupīt 4 ° C temperatūrā līdz divām nedēļām. Biežāk tiek izmantota sausa papildinājums. Pirms lietošanas to izšķīdina izotoniskā šķīdumā sākotnējam apjomam (norādīts uz etiķetes).

4. Izotonisks risinājums.

Hemolīzes reakcija (19. tabula). Lai reakcija prasa:

1. Antigēns - 3% klusums mazgāto eritrocītu no RAM ar likmi 0,3 ml nogulumu eritrocītu un 9,7 ml izotonisks šķīduma.

2. antiviela - hemolītiskais serums (hemololāze) pret ram eritrocītiem; Parasti sagatavoti ražošanā, liofilizē un titrs norāda uz etiķeti.

Hemolysin titrs ir lielākais seruma atšķaidījums, kurā ir pilnīga hemolīze 3% no eritrocītu apturēšanas papildinājuma klātbūtnē. Hemolīzes reakcijai hemolyashing tiek pieņemts trīskāršā titru, titrs. Tie ir šķīries 3 reizes mazāk nekā pirms titra. Piemēram, ja titrs seruma 1: 1200, serums tiek audzēts 1: 400 (0,1 ml seruma * un 39,9 ml izotonisks šķīduma). Pārmērīgs hemolisīns ir nepieciešams, kā daļu no tā var adsorbēt citas reakcijas sastāvdaļas.

* (Nedrīkst veikt mazāk nekā 0,1 ml seruma - mērījumu precizitāte cieš.)

3. Papildinājums tiek audzēts 1:10 (0,2 ml papildinājuma un 1,8 ml izotonisks šķīduma).

4. Izotonisks risinājums.

19. tabula. Hemolīzes reakcijas shēma

Grāmatvedības rezultāti. Ar pareizu reakciju 1. izmēģinājuma caurulē, notiks hemolīze - tās saturs kļūs pārredzams. Kontrolē, šķidrums paliek dubļainais: 2. testa caurulē hemolīzes sākumam trūkst papildinājums, 3. - nav hemolysin, 4. - nav hemolysin, nav papildinājums, 5. - antigēns neatbilst uz antivielu,

Nepieciešamības gadījumā hemolītiskais serums titrē saskaņā ar šādu shēmu (20. tabula).

Pirms titrēšanas ir sagatavots sākotnējais seruma atšķaidījums: 100 (0,1 ml seruma un 9,9 ml izotoniskā šķīduma), no kura tiek veikti nepieciešamie atšķaidījumi, piemēram: \\ t

No šiem atšķaidījumiem ir izgatavoti 0,5 ml seruma seruma titrēšanas testēšanas caurulēs, kā parādīts tabulā. 20.

20. tabula. Hemolītiskās seruma shēmas titrēšana (hemolysin)

Šajā piemērā parādīts tabulā. 20 hemolītiskā sēklu titrs ir 1: 1200.

Lietojot svaigu hemolītisko serumu, ir jāievieto, lai iznīcinātu tajā esošo papildinājumu. Par to tas tiek apsildīts 30 minūtes 56 ° C temperatūrā uz ūdens vannas vai inaktivatora ar termostatu. Pēdējais veids ir labāks: tas novērš seruma pārkaršanas iespēju, ti. tās denaturāciju. Noguldītais serums nav piemērots pieredzei.

Bakteriolizācijas reakcija. Šajā reakcijā papildinājums ir baktērijas atbilstoša (homologa) seruma klātbūtnē. Reakcijas shēma būtiski ir līdzīga hemolīzes reakcijas shēmai. Atšķirība ir tā, ka pēc tam, kad divu stundu inkubācijas visām caurulēm tiek veiktas Petri ēdieniem ar vidēja labvēlīgu, lai uzzinātu, vai tas atrodas. Ar pienācīgi piešķirta pieredze kultūrās no 2-5th caurulēm (kontrole), ir jābūt bagātīgai izaugsmei. Izaugsmes trūkums vai vājš izaugsme sējajā no 1. testa caurules (pieredze) norāda nāvi mikrobu, tas ir, ka tie ir homology antivielu.

Uzmanību! Bakteļu reakcija jāveic aseptiskos apstākļos.

Pārbaudes jautājumi

1. Kas notiks ar eritrocītiem, ja tā vietā, lai izotonisks nātrija šķīdums hlorīda uzklājiet destilētu ūdeni? Kāds ir šīs parādības pamats?

2. Kāda reakcija notiks, kad eritrocītu mijiedarbība ar homologu imūnsorumu, ja nav papildinājums?

Uzdevums

Ielieciet hemolīzes reakciju. Noteikt un ieskicēt rezultātu.

Līdzīga informācija.

Tā pamatā ir fakts, ka eritrocīti, uz kuriem antigēni ir iepriekš adsorbēti, ir iegūta spēja aglutinēt homologu serumu (antivielu) klātbūtnē.

Eritrocīti vienlaikus veic pārvadātāju lomu ar īpašiem noteicošiem faktoriem, kuru aglutinācija notiek antigēna + antivielas reakcijas dēļ.

Eritrocīti, kura virsmai ir stingri piestiprināti, ko sauc par eritrocītu antigēnu diagnostiku vai eritrocītiem, sensibēnu antigēnu.

Cita veida stienis - antivielas un turpmāka aglutinācija notiek uz eritrocītu virsmas, un pēc tam viņu aglutinācija notiek homologa antigēna klātbūtnē. Šādā gadījumā šādus eritrocītus sauc par eritrocītu antihive diagnozi vai eritrocītiem, jutīgām antivielām.

Pamatojoties uz šīm divām fundamentālajām metodiskajām pieejām, tiek izstrādātas un izmantotas daudzas gredzenu modifikācijas. Tātad, kā pārvadātāji izmanto mazas standarta lateksa daļiņas. Šādā gadījumā reakciju sauc par lateksa aglutinācijas (RLD) vai zelta stafilokokusa reakciju - tiek izmantots lathylococcus - koaggglutinācijas reakcija utt. Parasti eritrocītu diagnosticums tiek sagatavoti bioloģiskās nozares uzņēmumos, un diagnostikas laboratorijās ir jau galvenā gredzena pieredze.

Eritrocītu diagnosticuma sagatavošana ietver šādus soļus: \\ t

• eritrocītu fiksācija ar formaldehīdu vai glutāru vai akrila aldehīdiem. Šādi apstrādāti eritrocīti paliek ilgu laiku. Biežāk šim nolūkam, RAM, cilvēka, vistu utt. Eritrocīti;
• fiksēto eritrocītu apstrāde ar tanīna šķīdumu. Tā rezultātā sarkanās asins šūnas iegūst īpašumu neatgriezeniski adsorbēta uz tās virsmas proteīniem (vīrusi un antivielas);
• miecēto sarkano asins šūnu sensibilizācija ar vīrusiem vai antivielām.

Jāatzīmē, ka vīrusu infekciju eritrocītu diagnostikas sagatavošanas metodes ir atšķirīgas.

Run metodoloģija antivielu titra noteikšanai un noteikšanai ir šāda:

• secīgiem 2 reizes seruma atšķaidījumiem pievienot vienādas eritrocītu devas, kas jutīgi pret antigēnu;
• maisījums ir atļauts 2-3 stundas istabas temperatūrā vai 16-18 stundas 4 ° C temperatūrā;
• Ņemot vērā rezultātus. Ja serumā ir antivielas pret vīrusu, kas ir jutīgākas sarkanās asins šūnas, novēro hemaglutinācija, kas tiek lēsta krustos.

Lai pārbaudītu antivielas serumā, tiek ņemts augstākais seruma audzēšana, kas joprojām nodrošina hemaglutināciju vismaz divus krustus.

RF ir pievienots visām attiecīgajām kontrolēm. Parasti ielieciet mikrometegrozu reakciju.

Gredzens ļauj atrisināt šādus diagnostikas uzdevumus:

• atklāt antivielas un noteikt savu seruma titru ar zināmu eritrocītu antigēnu diagnostiku;
• atklāt un identificēt nezināmu vīrusu, izmantojot zināmu eritrocītu anthive diagnozi.

Rindas priekšrocības: augsta jutība, vienkāršība veiktspējas paņēmieniem un ātruma reakciju. Tomēr ir svarīgi atzīmēt, ka pastāv lielas grūtības stabilu eritrocītu diagnosticuma sagatavošanā (liela atkarība no izmantoto komponentu tīrības, nepieciešamība izvēlēties eritrocītu fiksācijas režīmu, miecēšanu un sensibilizāciju katram vīrusa tipam ).

Netiešās vai pasīvās hemaglutinācijas reakcija (RPGA)

Šī jutīguma reakcija pārsniedz aglutinācijas reakciju un tiek izmantota baktēriju, rickettsia, vienkāršāko un citu mikroorganismu infekciju diagnosticēšanai.

RPGA ļauj jums atklāt nelielu antivielu koncentrāciju.

Šajā reakcijā, miecizēta jēra eritrocīti vai cilvēka eritrocīti ar asinīm i ir jutīgi pret antigēniem vai antivielām.

Ja antivielas tiek noteiktas pētījuma serumā, tiek izmantoti eritrocīti, jutīgi ar antigēniem (eritrocītikas diagnostiku).

Dažos gadījumos, ja nepieciešams, dažādu antigēnu noteikšana pētījumā, eritrocīti tiek izmantoti, sensitizē imūnglobulīna.

RPGA rezultāti ņem vērā eritrocītu nogulumu raksturu.

Pozitīvs apsvērt reakcijas rezultātu, kurā eritrocīti vienmērīgi aptver visu apakšējo testa caurulēm (apgrieztā jumta).

Ar negatīvu reakciju sarkanās asins šūnas neliela diska (muca) formā atrodas testa caurules apakšas centrā.

Aglutinācijas reakcija (RA)

Sakarā ar tās specifiku, formulējuma un demonstrējumu vienkāršību, aglutinācijas reakcija tika plaši izplatīta mikrobioloģiskajā praksē, lai diagnosticētu daudzas infekcijas slimības: vēdera tiphoids un paratyphones (vazal reakcija), ātrā tīfu (Weijor reakcija) utt.

Aglutinācijas reakcija ir balstīta uz antivielu (aglutīnu) mijiedarbības specifiku ar veseliem skaitļiem mikrobu vai citām šūnām (aglutīnu). Šīs mijiedarbības rezultātā ir veidotas daļiņas - aglomerāti iekrīt no nogulsnēm (aglutinātāts).

Aglutinācijas reakcija var būt saistīta gan ar dzīvām, gan nogalinātām baktērijām, spirochetēm, sēnēm, vienkāršākajām, rickettsia, kā arī sarkanām asins šūnām un citām šūnām.

Reakcija ieplūst divos posmos: pirmais (neredzamais) ir īpašs, savienojums ar antigēnu un antivielām, otrais (redzams) ir nespecifisks, līmēšanas antigēni, ti. Aglutinācijas veidošanos.

Aglutināts veidojas, savienojot vienu aktīvo centru no divvērtīgu antivielu ar noteiktu antigēnu grupu.

Aglutinācijas reakcija, kā arī jebkura seroloģiskā reakcija ieņēmumi elektrolītu klātbūtnē.

Ārēji aglutinācijas pozitīvās reakcijas izpausme ir divvirzienu raksturs. Brigely mikrobos, kam ir tikai somatiska o- antigēna, līmējot tieši mikrobu šūnas paši. Šādu aglutināciju sauc par smalku graudainu. Tas notiek 18 - 22 stundu laikā.

Birchtikov mikrobiem ir divi antigēna - somatiska O-antigēna un aromatizēts n-antigēns. Ja šūnas ir pielīmētas ar garšu, veidojas lielas vaļīgas pārslas, un šāda aglutinācijas reakcija tiek saukta par rupju graudainu. Tas ir 2 - 4 stundu laikā.

Aglutinācijas reakciju var noteikt gan, lai varētu pretendēt uz specifisko antivielu kvalitatīvu un kvantitatīvu noteikšanu pacienta asins serumā un lai noteiktu īpašā patogēna sugu piederību. Gemaglutinācija mikrobioloģiskā infekcijas

Aglutinācijas reakciju var iestatīt gan paplašinātā iemiesojumā, kas ļauj strādāt ar serumu, kas atšķaidīts ar diagnostikas titru un indikatīvas reakcijas iemiesojumu, kas ļauj atklāt īpašas antivielas vai noteikt sugu piederību patogēna.

Gandrīz visu infekcijas slimību laboratorijas diagnoze ir balstīta uz pacientu ar antivielām, kas tiek ražotas uz patogēna antigēniem, seroloģisko reakciju metodēm. Viņi ienāca medicīnas praksi no deviņpadsmitā gada beigām - divdesmitā gadsimta sākumā.

Zinātnes attīstība palīdzēja noteikt mikrobu antigēno struktūru un to toksīnu ķīmiskos formulas. Tas ļāva izveidot ne tikai terapeitisku, bet arī diagnostikas serumus. Tos iegūst, ieviešot vājinātus patogēnus ar laboratorijas dzīvniekiem. Pēc vairāku dienu fragmentu no trušiem vai pelēm sagatavo preparātus, ko izmanto, lai identificētu mikrobus vai to toksīnus, izmantojot seroloģiskās reakcijas.

Šādas reakcijas ārējā izpausme ir atkarīga no tā formulējuma nosacījumiem un antigēnu stāvoklim pacienta asinīs. Ja mikrobu daļiņas nešķīst, tad tās tiek noguldītas, lized, saistās vai imobilizētā serumā. Ja antigēns ir šķīstošs, tad parādība neitralizācijas vai nokrišņu izpaužas.

Aglutinācijas reakcija (RA)

Seroloģiskā reakcija aglutinācija ir ļoti specifiska. Ir viegli veikt un diezgan vizuāli, lai ātri noteiktu antigēnu klātbūtni pacienta serumā. To izmanto, lai ražotu vidāla reakciju (vēdera tīfas un paratifikācijas diagnozi) un zīle (neapstrādāta zīle).

Tā ir balstīta uz konkrētu mijiedarbību starp cilvēka antivielām (vai aglutīnu) un mikrobu šūnu (aglututenogenogēnu). Pēc to mijiedarbības veidojas daļiņas, kas ietilpst sedimentos. Tā ir pozitīva zīme. Var izmantot reakcijas formulējumu, dzīvu vai nogalinātu mikrobu aģentiem, sēnēm, vienkāršākajām un somatiskajām šūnām.

Ķīmiski reakcija ir sadalīta divos posmos:

1. Īpašs antivielu savienojums (AT) ar antigēniem (AG).
2. Nespecifisks - ag-pie konglomerātu, tas ir, aglutinācijas veidošanās.

Netiešās aglutinācijas reakcija (RPGA)

Attiecībā uz tās ražošanu, attīrītiem eritrocītiem un sarkano asins pasakas, kas iepriekš tika ārstēti ar antivielām vai antigēniem (tas ir atkarīgs no tā, kas ir kā laboratorija vēlas atrast). Dažos gadījumos cilvēka eritrocīti tiek ārstēti ar imūnglobulīniem. Eritrocītu seroloģiskās reakcijas tiek uzskatītas par to, ja notika to nogulsnēšanās testa caurules apakšā. Jūs varat runāt par pozitīvu reakciju, kad šūnas atrodas apgrieztā lietussargu veidā, kas aizņem visu apakšējo daļu. Negatīvā reakcija tiek skaitīta, ja eritrocīti nomira ar kolonnu vai mijiedarboties ar mijiedarbību apakšējā daļā.

Novēršanas reakcija (RP)

Šāda veida seroloģiskie reakcijas kalpo, lai identificētu ļoti mazas antigēnu daļiņas. Tas var būt, piemēram, olbaltumvielas (vai to daļas), proteīnu savienojumi ar lipīdiem vai ogļhidrātiem, baktēriju daļām, to toksīniem.

Reakcijas serumu iegūst mākslīgi inficēti ar dzīvniekiem, parasti truši. Šajā metodē var iegūt absolūti jebkuru nogulsnējošu serumu. Sērijas seroloģisko reakciju formulēšana ir līdzīga ar aglutinācijas reakcijas mehānismu. Serumā ietvertās antivielas ir savienotas ar antigēniem, veidojot lielas olbaltumvielu molekulas, kas tiek noguldītas testa caurules vai substrāta (gēla) apakšā. Šī metode tiek uzskatīta par ļoti specifisku un pat nenozīmīgi nelielu vielu daudzumu var atklāt.

Izmanto, lai diagnosticētu mēris, tarulēmiju, sibīrijas čūlas, meningītu un citas slimības. Turklāt, iesaistot tiesu medicīnisko pārbaudi.

želejā

Seroloģiskās reakcijas var veikt ne tikai šķidrā vidē, bet arī agara želejā. To sauc par difūzās nokrišņu metodi. Ar to tas tiek pētīts sarežģītu antigēnu maisījumu sastāvs. Šī metode ir balstīta uz hemotaksis antigēniem līdz antivielām un otrādi. Gelā viņi virzās uz otru ar dažādiem ātrumiem un, tikšanās, veido nokrišņu līniju. Katra līnija ir viens kopums AG-AT.

Antitoksīna eksotoksīna (pH) neitralizācijas reakcija

Antitoksiskie serumi spēj neitralizēt eksotoksīna iedarbību, kas ražo mikroorganismus. Šīs seroloģiskās reakcijas pamatojas uz to. Mikrobioloģija izmanto šo metodi seruma titrēšanai, toksīniem un anatoksīniem, kā arī to terapeitiskās aktivitātes noteikšanu. Toksīna neitralizācijas spēku nosaka parastās vienības - AE.

Turklāt, ņemot vērā šo reakciju, ir iespējams noteikt eksotoksīna sugu vai tipisko piederību. To lieto difterijā, botulisms. Pētījumu var veikt gan "uz stikla", gan želeju.

Līzes reakcija (RL)

Imūnās serums, kas nonāk pacienta ķermenī, papildus tās galvenajai pasīvā imunitātes funkcijai, kā arī gulēja īpašības. Tas var izšķīdināt mikrobu aģentus, šūnu svešzemju elementus un vīrusus, kas ienāk pacienta ķermenī. Atkarībā no antivielu, baktēriju, citoņu, spirohetolysīnu, hemolysīnu un citu specifikas specifiku ir atdalītas serumā.

Šīs īpašās antivielas sauc par "pilnīgu". Tas ir iekļauts gandrīz visos cilvēka ķermeņa šķidrumos, ir sarežģīta proteīna struktūra un ir ļoti jutīga pret pieaugošo temperatūru, kratīšanu, skābju iedarbību un tiešu saules gaismu. Bet žāvētā stāvoklī, tas spēj saglabāt savu lizes īpašības līdz sešiem mēnešiem.

Šāda veida seroloģisko reakciju veidi:

Bakteriolīze;

Hemolīze.

Bakteriolisms tiek veikts, izmantojot pacienta asins serumu un īpašu imūnsistēmu ar dzīvām mikrobiem. Ja asinīs ir pietiekams papildinājums, pētnieks redzēs līzes baktērijas, un reakcija tiks uzskatīta par pozitīvu.

Otrā seroloģiskā asins reakcija ir tā, ka pacienta eritrocītu apturēšana tiek ārstēta ar serumu, kas satur hemolysīnus, kas tiek aktivizēti tikai konkrēta komplimenta klātbūtnē. Ja ir kāds, tad laboratorija izpaužas izšķīdināšanu sarkano asins šūnu. Šī reakcija tiek plaši izmantota mūsdienu medicīnā, lai noteiktu papildinājuma titru (I.E. tās mazākais eritrocītu līzes) daudzums serumā un, lai noteiktu papildinājumu saistošu analīzi. Šī metode tiek veikta seroloģiskā reakcija uz sifilisu -

Papildina saistošu reakciju (RSK)

Šī reakcija tiek izmantota, lai noteiktu pacienta antivielu asins serumā infekcijas aģents, kā arī identificēt patogēnu ar tās antigēnu struktūru.

Līdz šim brīdim mēs aprakstījām vienkāršas seroloģiskās reakcijas. RSK tiek uzskatīts par sarežģītu reakciju, jo tas mijiedarbojas ne divus, bet trīs elementus: antivielu, antigēnu un papildinājumu. Tās būtība ir tā, ka antivielu un antigēna mijiedarbība notiek tikai komplimentu proteīnu klātbūtnē, kas adsorbē uz AG-Pie sarežģītā virsmas.

Antigēni paši, pēc papildinājuma piesaistīšanas, ir pakļauti būtiskām izmaiņām, kas parāda reakcijas kvalitāti. Tas var būt līze, hemolīze, imobilizācija, baktericīda vai bakteriostatiska darbība.

Pati reakcija notiek divos posmos:

1. Kompleksa antigēna antivielu veidošanās, kas vizuāli nav pamanāma pētniekam.
2. Mainīt antigēnu saskaņā ar papildinājuma darbību. Šo fāzi visbiežāk izseko neapbruņotu aci. Ja vizuālā reakcija nav redzama, izmantojiet papildu indikatora sistēmu, kas ļauj noteikt izmaiņas.

Indikatora sistēma

Šī reakcija ir balstīta uz saistīšanos papildinājumu. Testa mēģenē stundā pēc Rskas ir iestatīts, lai pievienotu attīrītas filiāles un hemolītisko serumu, kas nesatur papildinājumu. Ja nesaistītā papildinājums saglabājās testa caurulē, tas pievienosies AG-pie komplekss veidojas starp filiāles šūnām un hemololiem, un izraisa viņiem likvidāciju. Tas nozīmēs, ka RSK ir negatīvs. Ja eritrocīti palika veseli skaitli, tad, attiecīgi, reakcija ir pozitīva.

Hemaglutinācijas reakcija (RGA)

Ir divas būtiskas atšķirīgas hemaglutinācijas reakcijas. Viens no tiem ir seroloģiski, to izmanto, lai noteiktu asins grupas. Šādā gadījumā sarkanās asins šūnas mijiedarbojas ar antivielām.

Un otrā reakcija neattiecas uz seroloģisko, jo sarkanās asins pasakas reaģē ar hemaglutinīniem, ko ražo vīrusi. Tā kā katrs patogēns darbojas tikai uz konkrētiem eritrocītiem (vistas, jēra gaļa, pērtiķiem), tad šī reakcija ir šauri specializēta.

Izprast pozitīvo reakciju vai negatīvu, tas ir iespējams ar atrašanās vietu asins šūnu apakšā testa caurules. Ja viņu zīmējums atgādina apgrieztu lietussargu, tad vēlamais vīruss ir klāt pacienta asinīs. Un, ja visi eritrocīti ir patika kolintu kolonnā, tad nav vēlamo patogēnu.

Gemaglutinācijas bremzēšanas reakcija (RTHA)

Tā ir ļoti specifiska reakcija, kas ļauj izveidot vīrusu tipa veidu vai konkrētu antivielu klātbūtni pacienta asinīs serumā.

Tās būtība ir tāda, ka antivielas, kas pievienotas testa caurulei ar pētījuma materiālu, novērš antigēnu nogulsnēšanu uz sarkano asins šūnām, tādējādi apturot hemaglutināciju. Tā ir kvalitatīva pazīme par konkrētu antigēnu klātbūtni asinīs uz konkrētu vēlamo vīrusu.

Imunofluorescences reakcija (rifs)

Reakcija ir balstīta uz spēju identificēt ag-pie ar to ārstēšanu ar fluorhromiskām krāsvielām. Šī metode ir viegli pārsūdzama, neprasa atbrīvot tīra kultūru un aizņem maz laika. Tas ir nepieciešams, lai ātri diagnosticētu infekcijas slimības.

Praksē šīs seroloģiskās reakcijas ir sadalītas divos veidos: taisni un netieši.

Tiešais rifs tiek ražots ar antigēnu, kas ir iepriekš apstrādāts ar dienasgaismas serumu. Un netiešā ir tā, ka pirmajā narkotiku apstrādā ar parasto diagnostiku, kas satur antigēnus līdz vēlamajām antivielām, un pēc tam tiek atkārtoti izmantota fluorescējošā serums, kas ir specifisks ag-pie kompleksa proteīniem, un mikrobu šūnas kļūst redzamas laikā mikroskopija.

Tā izmanto eritrocītus vai neitrālus sintētiskos materiālus (piemēram, lateksa daļiņas), kuru virsmas ir sorbed antigēnas (baktēriju, vīrusu, audu) vai antivielas. To aglutinācija notiek, ja pievieno atbilstošus serumus vai antigēnus. Eritrocīti jutīgi ar antigēniem sauc antigēnu eritrocītu diagnosticum un tiek izmantoti, lai identificētu un titrētu antivielas. Eritrocīti jutīgi ar antivielām. Tos sauc par imūnglobulīna eritrocītu diagnostiku un tiek izmantoti, lai noteiktu antigēnus.

Passive hemaggutinācijas reakcija tiek izmantota, lai diagnosticētu baktēriju izraisītās slimības (vēdera tiffoids un paratificēšana, dizentērija, bruceloze, mēris, holēra uc), vienkāršākais (malārija) un vīrusiem (gripa, adenovīrusu infekcijas, vīrusu hepatīta B, Cortex, ērce encefalīts, Krimas hemorāģiskais drudzis utt.), Kā arī noteikt dažus hormonus, identificēt pacienta paaugstināto jutību pret narkotikām un hormoniem, piemēram, penicilīnu un insulīnu.

Pasīvā hemaglutinācijas (RPGA) reakcija. Pasīvā hemaglutinācijas reakcija ir jutīga seroloģiskās diagnostikas metode, gan izmanto gan agrīnai, gan retrospektīvai diagnostikai, kā arī noteikt imunopohitisko štatu. Pacientiem ar Tarulēmiju advokāti parasti atrodami beigās 1. vai 2. nedēļā slimības, pēc 1-1,5 mēnešiem, RPGA titri sasniedz maksimālos rādītājus (1: 100000- 1: 20,000, retāk iepriekš) , pēc kura tas ir samazināts 1. līmenī: 100-1: 200 apkārtnē uz ilgu laiku.

Tomēr transplantācijas antivielās, pastāvīgi atklāj zemākos kredītpunktos, kas nepārsniedz 1: 2000-1: 5000 1-1,5 mēnešus pēc vakcinācijas, tiek uzglabāti vairākus gadus zemā līmenī 1: 20-1: 80.

Antigēns RPGA ražošanai kalpo Tarulemia erythrocytarian diagnosticum (antigēns). Zāles ir formalizēts rabber eritrocīts, sensitizizēts ar Tarulēmijas antigēnu, tiek ražots šķidrā un sausā veidā. Šķidrā sagatavošana - 10% suspensija no eritrocītiem formalīna 10% koncentrācijas šķīdumā. Sausā liofilizēta narkotika - 10% eritrocītu apturēšana bez konservantiem, kas žāvēti vakuumā. Pirms lietošanas tas tiek audzēts saskaņā ar norādījumiem uz etiķetes. Lai izveidotu reakciju polistirola plāksnes, abas zāles tiek izmantotas 2,5% koncentrācijā, un, reakcija mikro-sējumos, ir iestatīts - 0,5% no koncentrācijas.

RPGA tehnika. Testa serumu audzē sāls 1: 5 (1:10) un uzkarsē 56 grādos 30 minūtes. Pēc tam, lai novērstu neviendabīgas antivielas uz ram eritrocītiem, serumu apstrādā ar formālinizētu eritrocītu jēra 50% apturēšanu. Šim nolūkam eritrocīti tiek pievienoti ar 2 pilieniem (0,05 ml) uz 1 ml seruma un rūpīgi sajauc ar kratīšanu. Serums ir atstāts pilnīgai sarkano asins šūnu izlaišanai vai centrifugējot pēc vienas stundas ekspozīcijas istabas temperatūrā, pēc tam tas ir gatavs pētījumam.

Izkliedošais šķidrums ir izlijis 0,5 ml tilpuma polistirola plāksnes cauruma rindā. Ar iepriekšēju pārbaudi serumu, ir ieteicams tos pārbaudīt, reaģējot īsā plāksnes rindā (6 caurums). Attiecībā uz antivielu atklāšanu īsā seruma sērijā, atkārtoti pārbaudīja garā atšķaidījumu rindā (12 caurumi). Pēc izkliedes izplatīšanās šķidruma, pirmajā caurumā katrā rindā (īss vai garš) pievienot 0,5 ml testa serumu atšķaidīšanā 1: 5. Tad tādā pašā apjomā serumā titrē divreiz atšķaidījumus. Tādējādi seruma audzēšana īsā rindā no 1:10 līdz 1: 320 un garums - no 1:10 līdz 1: 20480. Pēc tam, kad serumu ievietošana katrā labi pievieno vienu pilienu (0,05 ml) darba 2,5% aizdarāmu eritrocīti jutīgiem eritrocītiem. Plāksnes saturs ir rūpīgi sakrata, līdz tiek iegūta viendabīga suspensija. Plāksnes paliek istabas temperatūrā uz stacionāro galda virsmu. Reakcijas iepriekšēja reģistrācija tiek ražota 2-3 stundu laikā, titra gala definīcija tiek veikta pēc eritrocītu kopējā sedimentācijas akās. Turpmāk minētās kontroles ir šādas kontroles: 1) testa serums atšķaidīšanā 1:10, kuru tilpums ir 0,5 ml + 1 piliens 2,5% aizdarāmu susbilizētiem eritrocītiem; 2) ātrs šķidrums 0,5 ml + 1 pilienam 2,5% aizdarāma sutīgām eritrocītiem; 3) Ātrais šķidrums 0,5 ml + 1 pilienam 2,5% aizdarāma eritrocītu suspensējama suspensija. Visām kontrolēm jāsniedz skaidri negatīva reakcija.

RPGA grāmatvedība un novērtēšana. Reakcijas novērtējums tiek veikts saskaņā ar šādu shēmu:

1) strauji pozitīva reakcija (++++) - sarkanās asins šūnas nokrīt uz cauruma apakšā ar vienotu slāni "lietussargu" formā, kas bieži novēro kāpšanas malu veidošanos;

2) pozitīvā reakcija (+++) - sarkanās asins šūnas samazinās vismaz 2/3 no labi;

3) viegla reakcija (++) - aglutināts ir neliels un atrodas pašā centrā labi;

4) apšaubāma reakcija (+) - ap eritrocītu nogulsnēm pašā urbumu centrā ir atsevišķi aglutīna graudi;

5) Negatīvs (-) - cauruma apakšā, eritrocīti nokārtojas "muca" vai neliela gredzena veidā ar gludām, strauji definētām malām.

Seruma titrs tiek ņemts vērā saskaņā ar jaunāko seruma audzēšanu, kas sniedza skaidru reakciju (vismaz trīs priekšrocības). Diagnostikas titrs tiek uzskatīts par atšķaidīšanu 1: 100 un augstāks, tomēr, kā tas ir RA, ir nepieciešams izsekot to palielināt.

RPGA Tularēmijā ir diezgan specifiska un atklāj dažas krustveida reakcijas tikai ar brucelulārajiem serumiem. Diferenciāldiagnoze ir iespējama augstumā nosaukumu RPGA, kas ir ievērojami augstāks ar homologo antigēnu.

RPGA tehnika mikro detaļās. RPGA var veikt mikro kontaktos, izmantojot mikroterēšanas tipu Takachi (vai apaļās microposets ar mikropipetēm), kas ļauj titrēt materiāla apjomā 25 μl un 50 μl. Reakcijas veidošanas metodes, visu darbību secība ir tāda pati kā pētījumā polistirola plāksnēs. Tomēr būtu jāpatur prātā, ka mikrometra jutīgums parasti ir viens atšķaidījums (t.sk., 2 reizes) ir zemāks par makrometeod.

Lai radītu reakciju mikroterī ar pipeti - pilinātāju katrā labi veikt izplatīšanās šķidrumu 50 μl tilpumā. Tad ar tērātiem ar galvu 50 μl, tiek ņemts testa serums, iegremdējot galvu tajā. Ir jāpārbauda, \u200b\u200bvai šķidrums piepildīja titratora galvu. Titrators ar serumu tiek nodota pirmajam labi un turot to vertikālā stāvoklī, abos virzienos veikt vairākas rotācijas kustības. Pēc tam titrators tiek pārcelts uz nākamo labi un atkārto manipulāciju. Titrēšanu var veikt vienlaicīgi vairākās rindās. Pēc visas rindas titrēšanas titrators tiek mazgāts ar destilētu ūdeni (ar izmaiņām 2 porcijās) ar rotācijas kustībām, noņemiet ūdeni no galvas, izmantojot tamponu un sadedziniet to uz degļa liesmas.

25 μl eritrocītu diagnosticum pievieno akām pēc titrēšanas. Diagnostikuma RPGA koncentrācijai mikro komponentos jābūt 0,5% (I.E., 2,5% no eritrocītu suspensijas papildus piecas reizes). Pēc eritrocītu pievienošanas plāksne ir nedaudz sakrata, līdz iegūst viendabīgu suspensiju. Rezultātu uzskaiti var ražot pēc 1-1,5 stundām, kas ir būtiska RPGA priekšrocība mikrotitrā. Turklāt šī metode prasa nelielu skaitu visu reakcijas un testa serumu sastāvdaļu.

Reakcijas uzskaite tiek veikta saskaņā ar šādu shēmu:

1) "+" - pilna hemaglutinācija, kurā sarkanās asins šūnas nokrīt uz urbumiem ar vienotu slāni "lietussargu" formā, kas aizņem vismaz 2/3 no apakšas;

2) "+ -" - daļēja hemaglutinācija, kurā sarkanās asins šūnas nokrīt apakšā kā neliela izmēra brīvs gredzens;

3) "-" - hemaggtinācijas trūkums, kad sarkanās asins šūnas nokrīt uz leju neliela muca vai gredzeni ar gludu malu.

RPGGā iegūtā pozitīvā rezultāta specifiku var pārbaudīt, izmantojot trīs komponentu reakciju - pasīvā asinsreces tvertnes (RTPGA) reakcija.

RTPGA tehnika. Šī reakcija tiek apstiprināta, lai apstiprinātu pozitīvā RPGGA rezultātu specifiku, kad tas rada šaubas vai ir īpašas epidemioloģiskas intereses. Reakcijas mehānisms sastāv no hemaggtinācijas specifiskajiem bremzēšanas, kad testa serumā tiek pievienota apturētā Tarulemia baktēriju apturēšana. Trīs komponenti mijiedarbojas reakcijā: testa serums, specifisks Tarulemia antigēns un antigēniskais erythrocytarian diagnostika RTPG parasti ievieto rindā 7-8 caurumi. Tas ir ieteicams paralēli RTPG uz RE-RPGA. Divās caurumu rindās ir iepildīti 0,25 ml izplatīšanās šķidruma, tad abu rindu pirmie akmeņi padara testa serumu 0,25 ml tilpumā, un titrēšana rada divas identiskas seruma atšķaidījumu sērijas. Visās Wells Otrajā rindā, 0,25 ml izplatīšanās šķidruma pievieno, un pirmajā rindā caurumi - 0,25 ml tular baktēriju suspensijas. Lietota Tararemia diagnoze (kas satur 25 miljardus Tarulēmijas baktērijas 1 ml), pirms šķīries 50 reizes. Šāda suspensija satur 500 miljonus baktēriju 1 ml vai 125 miljoniem 0,25 ml tilpumā. Pēc antigēna pievienošanas plāksne ir atstājta 1 stundu istabas temperatūrā, pēc kura abu rindu caurumi tiek pievienoti vienā pilienā (0,05 ml) no eritrocītu diagnosticuma, plāksne ir sakrata un atstāj uz plakanas virsmas tabula. Grāmatvedība tiek ražota 2-3 stundu laikā.

Grāmatvedība un novērtējums RTPGA. Ja testa serums satur īpašas tularēmijas antivielas, tos neitralizē ar pievienoto antigēnu, un pirmajā rindā hemaglutinācijas caurumi nenotiks, vai augstā seruma titrs, hemaggtination tiks atzīmēta ar mazāku (par 2-4) numuru akas nekā pēc kārtas ar RPGA. Šādā gadījumā rezultātu specifika ir apstiprināts. Ja hemaglutinācija ir atzīmēta abās rindās, t.i. Rezultāti RTPGA un RPGA sakrīt, tas norāda, ka testa serumā Tularēmijas antivielu nav. Šajā gadījumā RPGA galvenais rezultāts ir atzīts kā nespecifisks.

RTPGA tehnika mikro komponentos. RTPGA, kā arī RPGA var veikt mikro-sējumos, izmantojot Takachi tipa mikroteri. Lai to izdarītu, microplastic akās, 0,25 μl izkliedēšanas šķidruma divās rindās 7-8 caurumi katrā no tiem tiek ievestas divās rindās. Tad ar titratoru, 0,25 μl testa seruma ir aizsērējusi un titrējot to abās rindās. Pēc tam, 25 μl Tularemija antigēna (kuras koncentrācija ir 500 miljoni Tularemia baktēriju 1 ml), tiek ieviesta pirmajā rindā (kuru koncentrācija ir 500 miljoni Tularemia baktērijas) katrā labi, un otrajā - 25 μl izkliedēšanas šķidruma. Plāksnes tiek atstātas uz 1 stundu istabas temperatūrā, pēc kura 25 μl antigēnu citrinentālā diagnostika (0,5% koncentrācija) tiek pievienota visām abu rindu akām. Rezultātu grāmatvedība un novērtēšana rada līdzīgi kā reakcijas makroblosā.