Tiešā Kumbsa testa metode. Antiglobulīna tests

- pētījums, kas palīdz noteikt nepilnīgu antieritrocītu antivielu saturu asinīs. Šis antiglobulīna tests var noteikt antivielas pret grūtniecēm.

Turklāt tas sākotnējos posmos ļauj diagnosticēt hemolītisko anēmiju jaundzimušajiem ar Rh konfliktu. Tas palīdz novērst sarkano asins šūnu iznīcināšanu, kas nepieciešamas normālai asins veidošanai. Šo testu 1945. gadā izveidoja Roberts Kombs, tāpēc tas ieguva savu nosaukumu.

Kumbsa tests ir daudzpusīgs pētījums, kas ļauj savlaicīgi diagnosticēt hematopoēzes traucējumus gan pieaugušajiem, gan bērniem.

Pastāv šāda veida testi:

1. Tiešais Kumbsa tests- ļauj noteikt antivielas, kas atrodas uz eritrocītu virsmas. Parasti šāds pētījums tiek nozīmēts aizdomām par hemolīzi, autoimūno hemolītisko anēmiju un citām autoimūnām slimībām. Turklāt to veic pēc zāļu terapijas ar zālēm, kuru pamatā ir hinīns, penicilīns vai metildopa, vai pēc asins pārliešanas. Lai iegūtu precīzākus rezultātus, pirms pētījuma jums pilnībā jāpārtrauc zāļu lietošana vismaz 1 nedēļu iepriekš.
2. Netiešais Kumbsa tests - tests, ar kuru plazmā var noteikt anti-eritrocītu antivielas. Parasti to veic grūtniecības laikā un pirms asins pārliešanas. Pret eritrocītu antivielas cilvēka asinīs parādās imūnsistēmas reaktīvā darba laikā vai kā reakcija uz dažām zālēm. Lai iegūtu precīzāku pētījumu, vienlaikus tiek veikti vairāki žogi ar 2 stundu intervālu.

Indikācijas

Kumbsa tests tiek veikts tikai tad, ja ir nopietnas norādes. Šis ir dārgs un laikietilpīgs pētījums, un tas ir īpašs tests.

Parasti norādes par tā ieviešanu tiek uzskatītas par šādām situācijām:

1. Ar asins pārliešanu... Pārbaude ļauj noteikt, vai saņēmēja asinis iesakņosies cilvēka ķermenī, kā arī to, vai ir iespējama ziedošana. Šajā gadījumā ir jāpārbauda gan donora, gan saņēmēja materiāls. Ir svarīgi noteikt antivielu raksturu, jo to nesaderības gadījumā organismā uz Rh konflikta fona tiek iznīcināta imūnsistēma. Tas noved pie nopietnu slimību un retos gadījumos pat nāves attīstības.
2. Pirms operācijas, kad pastāv asins zuduma risks... Tas tiek darīts, lai ārsts varētu uzreiz injicēt piemērotas asinis ķermeņa atjaunošanai.
3. Lai identificētu Rh sensibilizāciju. Rēzus ir specifisks antigēns, kas grūtniecības laikā rodas katras sievietes ķermenī. Ja mātei ir pozitīvs Rh, un tēvs ir negatīvs, vai otrādi, bērnam nav atkarības, viņš var mantot ikvienu. Ja bērns saņem pretēju mātes rēzu, sensibilizācijas risks ir augsts. Šo fenomenu raksturo mātes un bērna asiņu sajaukšana. Tas var notikt gan grūtniecības laikā, gan dzimšanas laikā.

Ja grūtnieces ķermenī rodas Rh konflikts, tad mātes imunitāte sāk uztvert augli kā svešķermeni. Tāpēc pastāv liels risks, ka viņš sāks viņam uzbrukt.

Šādu darbību rezultātā zīdainim var rasties nopietnas patoloģijas. Visbiežāk notiek eritroblastoze - parādība, kurā bērna ķermenis nespēj radīt pietiekamu skaitu sarkano asins šūnu.

Turklāt Rh konflikta dēļ augļa nāve var notikt dzemdē vai tūlīt pēc piedzimšanas. Izmantojot pareizu pieeju ārstēšanai, no šādām nopietnām sekām var viegli izvairīties.

Atkāpes no normas

Ja rezultāts ir pozitīvs Kumbsa reakcijai, ārsts secina, ka asins serumā ir antivielas pret sarkanajām asins šūnām. Tas liek domāt, ka donora asinis nevar būt savietojamas ar pacienta asinīm.

Ja grūtnieces organismā ar Rh negatīvām asinīm tiek diagnosticēts pozitīvs rezultāts, tad viņas ķermenī ir antivielas pret augļa asinīm.

Tas runā par Rh konfliktu, kas prasa ārkārtīgi rūpīgu pieeju grūtniecības pārvaldībai no ārsta puses, kā arī visu sievietes norādījumu un ieteikumu īstenošanu.

Ja bērna asinīs ir antivielas, tiek diagnosticēta jaundzimušā hemolītiskā slimība. Šajā gadījumā tiek veikts otrais pētījums, lai noteiktu, vai topošās mātes asinīs palielinās antivielu citrāts vai nē.

Iespējamās Kumbsa testa komplikācijas

Kumbsa tests ir diezgan drošs tests, kas sākotnējos posmos ļauj diagnosticēt vairākas autoimūnas slimības. Tas reti rada komplikācijas, parasti negatīvas sekas ir saistītas ar asins paraugu ņemšanu.

Tie sastāv no:

• Asiņošana vai asiņošana zem ādas
• Reibonis un ģībonis
• Infekciozs piesārņojums

7 295

Antiglobulīna testu, kas paredzēts nepilnīgu anti-eritrocītu antivielu noteikšanai, 1945. gadā ierosināja Kumbs, Morants un Reiss, un vēlāk saņēma nosaukumu Kumbsa tests. Šīs metodes būtība ir tāda, ka antiglobulīna serums, kas satur antivielas pret cilvēka imūnglobulīniem, reaģējot ar eritrocītiem, kas sensibilizēti ar nepilnīgām antivielām, noved pie to aglutinācijas.

Atkarībā no tā, vai antivielas ir nostiprinātas uz eritrocītu virsmas, vai asins plazmā atrodas brīvā stāvoklī, tiek izmantots tiešs vai netiešs Kumbsa tests.

Tiešs Kumbsa tests tiek veikts gadījumos, kad ir pamats domāt, ka pētāmās sarkanās asins šūnas jau ir in vivo ir sensibilizēti ar piemērotām antivielām, t.i. pirmā reakcijas fāze - antivielu fiksācija uz eritrocītu virsmas - notika organismā, un pēc tam antiglobulīna seruma pievienošana izraisa sensibilizētu šūnu aglutināciju.

Izmantojot netiešu Kumbsa testu, tiek konstatētas nepilnīgas antivielas, kas atrodas testa serumā. Šajā gadījumā reakcija norit divos posmos. Pirmais posms ir testa eritrocītu inkubācija ar testa serumu, kura laikā antivielas, kas atrodas testa seruma paraugā, tiek fiksētas uz eritrocītu virsmas. Otrais posms ir antiglobulīna seruma pievienošana.

Līdz šim Kombsa tests laboratorijas praksē tiek plaši izmantots imunopatoloģisko stāvokļu diagnosticēšanai, īpaši autoimūno hemolītisko anēmiju gadījumā, kam raksturīga eritrocītu iznīcināšana šūnu membrānas saistīšanās dēļ ar antivielām un (vai) komplementa komponentiem sistēmā. Ar tā palīdzību tiek atklāta Ig G (parasti Ig G1 un Ig G3) klātbūtne uz eritrocītu membrānas, kas var aktivizēt komplementu un dažreiz papildināt (C3d). Tomēr akūtā slimības periodā eritrocītu iznīcināšanas dēļ, uz kuriem tika fiksēts liels skaits antivielu, ar hemolītisko krīzi, kā arī ar nepietiekamu antivielu daudzumu hroniskā slimības gaitā. var novērot tiešu Kumbsa testu.

Jāuzsver, ka netiešais Kumbsa tests joprojām ir labākā metode pārliešanas barotņu individuālai izvēlei, jo tā ļauj visprecīzāk noteikt donora un saņēmēja individuālo saderību eritrocītu antigēnu izteiksmē.

Pārbaudot visus orgānu un audu saņēmējus pirms transplantācijas periodā un hematopoētisko cilmes šūnu saņēmējus arī pēc transplantācijas, ieteicams veikt tiešu antiglobulīna testu autoantivielu klātbūtnei.

Papildus imūnhematoloģijai un transfuzoloģijai antiglobulīna testi tiek plaši izmantoti daudzu patoloģisku stāvokļu diagnostikā: hematoloģisko slimību, tai skaitā limfoproliferatīvo slimību, saistaudu sistēmisko slimību, Sjogrena slimības, hroniska aktīvā hepatīta utt.

Kumbsa testi tiek aktīvi izmantoti medicīniskajā ģenētikā un tiesu medicīnā, lai noteiktu virsmas eritrocītu antigēnus.

Kumbsa tests attiecas uz diezgan darbietilpīgu pētījumu metodi, kuras īstenošanai nepieciešama īpaša piesardzība. Lietojot to, ir dažas grūtības, jo īpaši saistītas ar vāji pozitīvu reakciju interpretāciju. Ir zināms, ka viltus vāji pozitīvas vai negatīvas reakcijas, veicot Kumbsa testus, var būt nepietiekami efektīva eritrocītu mazgāšana, antiglobulīna reaģenta neitralizēšana ar seruma pēdām, kā arī saskare ar taukainu virsmu, uz kuras antiglobulīns var tādējādi tiek zaudēta aktivitāte. Vēl viens Kumbsa testa trūkums ir antiglobulīna reaģenta nestabilitāte, kura ražošanai un uzglabāšanai ir noteiktas pazīmes, kas arī apgrūtina hemaglutinācijas reakcijas kvantitatīvu noteikšanu ar antiglobulīna serumu.

Turklāt pētījumi, ko veica A. Holburns, D. Voaks u.c. parādīja, ka kļūdaini negatīvu rezultātu cēlonis var būt pārmērīga kratīšana eritrocītu suspensijas atkārtotas suspensijas laikā. Kļūdainus rezultātus, veicot antiglobulīna testus, var izraisīt arī anti-komplementāru antivielu piejaukums antiglobulīna reaģentā, jo īpaši C3d, C3c, C4c un C4d komplementa komponentos, kas adsorbēti uz testa eritrocītu virsmas inkubācijas laikā un radīt pozitīva rezultāta izskatu.

Šos trūkumus var viegli novērst, rūpīgi mazgājot testa paraugus un kontrolējot reakcijas apstākļus.

Pēdējās desmitgades laikā tiek izmantots zemas jonu stiprības izotoniskais šķīdums (LISS), lai saīsinātu netiešā Kumbsa testa laiku un palielinātu tā jutīgumu.

Neapstrīdama antiglobulīna testu priekšrocība, pēc vairāku autoru domām, ir to augsta jutība, kas ievērojami pārsniedz alternatīvo pētījumu metožu izšķirtspēju, kuras tiek izmantotas, lai atklātu neuglutinējošas antivielas.

Mēs esam salīdzinājuši asins seruma testa metožu izšķirtspēju nepilnīgu antivielu klātbūtnei, izmantojot poliglucīna, želatīna un antiglobulīna serumu. Pētījuma laikā nepilnīgu anti-D-antivielu titri tika kontrolēti 140 asins seruma paraugos no izoimūnu donoru puses, izmantojot želatīna, poliglucīna un netiešos antiglobulīna testus. Šo metožu formulēšana tika veikta saskaņā ar vispārpieņemtajām metodēm.

Tika konstatēts, ka to izšķirtspējas ziņā eritrocītu sensibilizācijas noteikšanas metodes ar anti-D-antivielām ir sakārtotas šādi: visjutīgākais ir netiešais Kumbsa tests, pēc tam želatīna tests un vismazāk informatīvais ir poliglucīna tests. Šajā eksperimentu sērijā iegūtie rezultāti pilnībā atbilst literatūras datiem, kas ļauj secināt, ka Kumbsa testu jutīgums ir pietiekami augsts, kas ļauj ar augstu ticamības pakāpi identificēt anti-eritrocītu klātbūtni. antivielas organismā, kas neizraisa sarkano asins šūnu aglutināciju.

Neskatoties uz to, praktiski izveidojot Kumbsa testus, ir gadījumi, kad nepilnīgas antivielas netiek atklātas, lai gan slimības klīniskā aina vai iepriekšējā imunizācija norāda uz to iespējamo klātbūtni. Šādos gadījumos var pieņemt, ka antivielu daudzums ir nepietiekams, lai tos varētu izgulsnēt antiglobulīna seruma antivielas.

Šo secinājumu apstiprināja mūsu pašu eksperiments, kurā, izmantojot šūnu analītiskās mikroelektroforēzes metodi, tika konstatēta anti-D-antivielu klātbūtne testa eritrocītos, kas netika konstatēti netiešā Kumbsa testā. Šajā eksperimentu sērijā eritrocītiem pievienoja antiglobulīna serumu, kas iepriekš tika inkubēts ar serumiem, kas iegūti no imunizēto donoru asinīm lietošanas antitelogēzes periodā, t.i. periodā, kad antivielas tajās netika atklātas ar zināmām metodēm, ieskaitot Kumbsa testu.

Veiktajos pētījumos pierādījumi par nepilnīgu antivielu klātbūtni eritrocītu virsmā bija statistiski nozīmīgas izmaiņas sensibilizēto sarkano asins šūnu elektroforētiskajā mobilitātē pēc antiglobulīna seruma pievienošanas. Jāatzīmē, ka pēc tam visu imunizēto donoru asins serumā anti-D antivielas tika noteiktas netiešā Kumbsa testā.

Gillerand et al. arī parādīja, ka antiglobulīna testus raksturo noteikts jutīguma slieksnis: pozitīvs rezultāts tiek atzīmēts tikai tad, ja vismaz 500 Ig G molekulas ir nostiprinātas uz viena eritrocīta virsmas.

Turklāt literatūrā ir sniegti pierādījumi, ka Kumbsa testa iespējamais negatīvais rezultāts var būt saistīts ar zemu antivielu afinitāti, kas sensibilizē eritrocītus, kā rezultātā mazgāšanas procesā tās viegli eluē no sarkano asins šūnu virsmas.

Ņemot vērā iepriekš minēto, mēs varam secināt, ka dažos gadījumos negatīvs Kumbsa testa rezultāts vēl nav pierādījums antivielu trūkumam, kas piestiprinātas uz eritrocītu virsmas.

Ir zināms, ka Kumbsa reakcijas ir ļoti specifiskas un var atklāt lielāko daļu nepilnīgu antivielu veidu. Tomēr, kā liecina daži eksperimentālie dati, antiglobulīna testi var būt pozitīvi neimunoloģiskos apstākļos. E. Muirhead et al. Otrajā dienā pēc fenilhidrazīna ievadīšanas suņiem tika novērots pozitīvs Kumbsa tests. Tik ātra pozitīvas reakcijas parādīšanās liecina par tās imunoloģisko raksturu un drīzāk ir saistīta ar olbaltumvielu nespecifisko adsorbciju uz eritrocītu virsmas.

M. Viljamss u.c. atklāja, ka klavulānskābe var izraisīt arī pozitīvu reakciju, kas, pēc autoru domām, ir saistīta ar nespecifisku plazmas olbaltumvielu adsorbciju uz eritrocītu virsmas. Līdzīgs efekts tika novērots, lietojot cefalosporīnu grupas antibiotikas.

Iepriekš minēto pētījumu autori uzsver Kumbsa testos iegūto pozitīvo rezultātu neimunoloģisko raksturu un uzstāj, ka šīs vielas spēj izraisīt sarkano asins šūnu membrānu modifikāciju, kā rezultātā eritrocīti var adsorbēt olbaltumvielas ( īpaši albumīns), kas parasti atrodas asins plazmā un kam nav antivielu īpašību. Turklāt ir iespējams, ka tieši ksenobiotika, kas adsorbēta uz šūnas virsmas, kalpo kā saikne starp šūnu membrānu un plazmas olbaltumvielām.

Lai pareizi interpretētu antiglobulīna testu noteikšanas rezultātus, jāņem vērā arī kvantitatīvā attiecība starp jauniem un nobriedušiem eritrocītiem perifērajās asinīs. Tika konstatēts, ka retikulocītus, kas no organisma izdalās pastiprinātas eritrona reģenerācijas periodā, var aglutināt ar antiglobulīna serumu.

Pozitīvs tiešais antiglobulīna tests, el. to novēro arī dažādos patoloģiskos apstākļos, ko papildina imūnsistēmas traucējumi, iekaisuma procesi, kas izraisa dažādas specifikas antivielu nespecifisku adsorbciju uz eritrocītu membrānām. Tas liek domāt, ka Ig G molekulas nesadarbojas ar specifiskiem eritrocītu antigēniem, bet ir fiksētas tikai uz pētāmo šūnu virsmas.

Jāpatur prātā, ka, izveidojot Kumbsa testu slimību gadījumos, kam raksturīga disproteinēmijas attīstība vai paraproteīnu parādīšanās, pozitīvs rezultāts ir saistīts ar olbaltumvielu klātbūtni eritrocītu virsmā, kurām nav īpašību. antivielu, kas arī norāda uz antiglobulīna paraugu nepietiekamo specifiskumu attiecībā uz ar to palīdzību atklātā proteīna dabu.

Tādējādi, kā liecina daudzi pētījumi, tiešu un netiešu antiglobulīna testu pozitīvi rezultāti nav absolūts pierādījums antivielu klātbūtnei, jo pozitīvas reakcijas var novērot dažādos patoloģiskos apstākļos, kas nav saistīti ar ķermeņa izosensitizāciju vai autosensitizāciju. Tāpēc tikai vairāku imūnseroloģisko metožu rezultātu salīdzinājums ar slimības klīnisko ainu ļauj pilnībā spriest par attīstošo patoloģisko procesu.

Pozitīvs netiešs antiglobulīna tests ar negatīvu tiešo testu parasti norāda uz brīvo aloantivielu klātbūtni pētītajā serumā, kas saistīts ar iepriekšējām asins pārliešanām vai grūtniecībām.

Kumbsa tests bieži ir pozitīvs ar paroksizmālas nakts hemoglobinūrijas saasināšanos; pozitīvs Kumbsa tests ar anti-C3 un anti-C3dg ir aukstās aglutinīna slimības marķieris.

Gadījumos, kad jaundzimušo hemolītiskās slimības attīstības risks ir augsts, tiešu un netiešu antiglobulīna testu rezultāti ir ļoti svarīgi diagnozes noteikšanai (visbiežāk grūtniecības laikā) un, ja nepieciešams, dinamiskai antivielu izskata un izmaiņu uzraudzībai. titrs. Visbiežāk jaundzimušo hemolītiskā slimība ir saistīta ar mātes un augļa nesaderību ar antigēnu D, retāk AB0 sistēmas antigēniem un vēl retāk citiem antigēniem (C, C, K utt.). Iegūtais pretstats la, kas parasti ir nepilnīgas Ig G klases antivielas, ir skaidri noteiktas netiešā antiglobulīna testā. Šajā slimībā liela nozīme ir pareizajam identificēto antivielu titram un specifiskumam, jo \u200b\u200bpastāv zināma korelācija starp antieritrocītu antivielu līmeni grūtnieces asinīs un iespējamo hemolītiskās slimības smaguma prognozi.

Netiešā Kumbsa tests ir nepieciešams arī klīniskajā praksē, lai nodrošinātu drošu pārliešanas terapiju. Tās ieviešana ir obligāta donoru un dažādu saņēmēju kategoriju imūnhematoloģisko pētījumu sastāvdaļa, kā arī visu medicīnas iestāžu pacientu, kuriem var būt nepieciešama asiņu un to sastāvdaļu pārliešana, ikdienas izmeklējumi.

Netiešo antiglobulīna testu izmanto šādos gadījumos:

Lai precīzāk noteiktu Rh piederību (D antigēns) ar neskaidriem Rh faktora noteikšanas rezultātiem ar citām metodēm (poliglucīnu, želatīnu utt.);

Lai atklātu vājus eritrocītu antigēnus (Kell, Duffy, Kidd, Lewis sistēmas utt.) Un antivielas pret šiem antigēniem;

Aloimūno anti-eritrocītu antivielu noteikšanai un identificēšanai, ieskaitot antivielas, kas izraisa hemolītiskas pēcpārdošanas reakcijas;

Noteikt AB0 sistēmas imūno antivielu klātbūtni pārliešanas hemolītiskajās komplikācijās;

Kā saderības tests pārlietu asiņu un to sastāvdaļu individuālā izvēlē.

Tādējādi Kumbsa tests ir svarīgs diagnostikas tests, ko izmanto dažādās medicīnas jomās (hematoloģijā, dzemdniecībā, reimatoloģijā, transfuzioloģijā, klīniskajā un laboratorijas diagnostikā utt.). Zināšanas par Kumbsa testa specifiku palīdzēs palielināt iegūto rezultātu ticamību un veicinās pareizu laboratorijas datu interpretāciju.

Literatūra

1. Antivielas. Metodes / ed. D. Katija. - M.: Mir, 1991. gads.

2. Bayramalibeyli I.E., Ragimov A.A., Gadzhiev A.B.... // Anēmijas transfūzijas terapija: mācību grāmata. rokasgrāmata ārstiem. - M.: Prakse. medicīna, 2005. - S. 105-106.

3. Volkova O.Ya., Fregatova L.M., Levchenko L.B. // Transfuzioloģija. - 2006. - 2. nr. - S. 39-62.

4. Donskova S.I. // Rēzus sistēmas asins grupas: teorija un prakse. - M.: VINITI RAN, 2005. - S. 180-186, 195.

5. Imunoseroloģija (normatīvie dokumenti) / sast. A.G. Bašlajs, S.I. Donskovs. - M.: VINITI RAN, 1998. gads.

6. Asins sistēmas izpēte klīniskajā praksē / red. G.I. Kozinets, V.A. Makarovs. - M.: Triada-X, 1997. gads.

7. Levins V.I... Uz eritrodierēzes un eritropoēzes mehānismu akūtas postemorāģiskas anēmijas periodā: autors. dis. ... Cand. mīļā. zinātnes. - Minska, 1968. gads.

8. Rahimovs A.A., Bayramalibeyli I.E.... // Anēmijas diagnostikas, profilakses un ārstēšanas pamati. - M.: GOU VUNMTs MZ RF, 2002. - S. 204-209.

9. Čumakova E.D.... // Aktuālās hematoloģijas un transfuzioloģijas problēmas: Baltkrievijas Republikas VI hematologu un transfusiologu kongresa materiāli, Minskā, 2007. gada 24. – 25. Maijs / red. A.I. Svirnovskis, M.P. Potapņevs. - Minska: Republikāniskais hematoloģijas un transfuzioloģijas zinātniskais un praktiskais centrs, 2007. - 50. lpp.

10. Kumbs R., Mourants A., Sacensības R... // Lancet. - 1945. - Sēj. 2. - 15. lpp.

11. Brīvnieks Dž... // J. Clin. Patol. - 1979. - Sēj. 32. - P. 1014-1018.

12. Holburn A.M... Kvalitātes kontrole. Metodes hematoloģijā / ed.I. Kavils. - Edinburga: Čērčils Livingstons, 1982. - Sēj. 4. - P. 34-50.

13. Khan S. // CMAJ. - 2006. - Sēj. 175, Nr. 8. - Lpp. 919.

14. Komatsu F. // Nippon Rinsho. - 2005. - Sēj. 63 (7. papildinājums). - P. 719-721.

15. Komatsu F.// Nippon Rinsho. - 2005. - Sēj. 63 (7. papildinājums). - P. 716-718.

16. Molthan L., Reidenberg M.M., Eihman M.F. // New Engl. J. Med. —1976. - Vol. 277. - 123.-125. Lpp.

17. Muirhead E.E., Birzis M., Braiens S... // J. Lab. Clin. Med. —1954. - Vol. 44. - Lpp. 902-903.

18. Rosse W.F. // Hosp. Prac. - 1995. - N 105.

19. Voaks D., Dovijs D., Mūrs B. un citi. // Biotestu bullis. - 1986. - Sēj. 1. - 41.-52. Lpp.

20. Voak D., Haigh T., Downie D. un citi. Šūnu veļas mašīnas antiglobulīna testiem. Atkārtota pārbaude - jauna metode, kas parāda vienas plaši izmantotas mašīnas - Sorvall CW1-AF2 - neefektivitāti: ziņojums DHSS tehniskajai nodaļai, 1991. gada februāris.

21. Viljamss M. E., Tomass D., Harmans C. P... un citi. // Pretmikrobu līdzekļi un ķīmijterapija. —1985. - P. 125-127.

22. Zarandona J.M., Yazer M.H... // CMAJ. - 2006. - Sēj. 174, Nr. 3. - Lpp. 305-307.

Medicīnas ziņas. - 2008. - Nr. 3. - S. 33-36.

Uzmanību! Raksts ir adresēts medicīnas speciālistiem. Šī raksta vai tā daļu atkārtota izdrukāšana internetā bez hipersaites uz avotu tiek uzskatīta par autortiesību pārkāpumu.

Antiglobulīna tests vai Kumbsa reakcija Tas tiek darīts, lai noteiktu noteiktas antivielas, kas uzbrūk sarkanajām asins šūnām (eritrocītiem).

Antivielas ir olbaltumvielas, ko ražo imūnsistēma. Parasti antivielas saistās ar svešām vielām, piemēram, baktērijām un vīrusiem, un tās iznīcina.

2. Kāpēc jums nepieciešams antivielu tests?

Antivielu testu var veikt šādos gadījumos:

Pirms asins pārliešanas

Jūs droši vien zināt, ka cilvēkam var būt viena no četrām asins grupām. Un, lai noteiktu, vai ir iespējama asins pārliešana, var veikt antiglobulīna testu. Ja saņemat pārliešanu, donora asinīm jāatbilst jūsu tipam (tiem pašiem antigēniem). Ja pārliešanas laikā antigēni atšķiras, imūnsistēma iznīcinās pārlietās šūnas. Tas var izraisīt nopietnas slimības un pat nāvi. Tāpēc pareizās asins grupas atrašana ir tik svarīgs faktors.

Lai identificētu Rh sensibilizācijas risku

Rēzus ir antigēns. Tās pilns nosaukums ir Rh faktors. Kumbsa testu izmanto, lai noteiktu Rh antivielas grūtnieču asinīs. Ja sieviete ar Rh negatīvām asinīm ir stāvoklī ar Rh pozitīvu bērnu (to var nodot no tēva), pastāv Rh sensibilizācijas risks. Rh sensibilizācija notiek, kad bērna asinis grūtniecības vai dzemdību laikā sajaucas ar mātes asinīm. Ja mātes asins grupa nav saderīga ar bērna asins grupu, tad viņas imūnsistēma var uzbrukt auglim, uztverot to kā svešķermeni. Šajā gadījumā var attīstīties nopietna slimība, ko sauc par augļa eritroblastozi. Retos gadījumos, ja slimība netiek ārstēta, auglis vai jaundzimušais var nomirt.

Rh negatīvajai sievietei var ievadīt anti-Rh-gammaglobulīna (piemēram, RhoGAM) injekciju, ko lieto, lai novērstu Rh-hemolītiskās slimības attīstību.

Autoimūnas hemolītiskās anēmijas diagnostikai

Autoimūna hemolītiskā anēmija ir reta slimība, kas saistīta ar antivielu veidošanos pret eritrocītu pašantigēniem.

3. Antiglobulīna testa veidi

Ir divu veidu antiglobulīna tests jeb Kumbsa reakcija: tieša un netieša.

Tiešais Kumbsa tests vai tiešais antiglobulīna tests atklāj antivielas, kas saistītas ar sarkanajām asins šūnām. To lieto anēmijas identificēšanai. Šajā slimībā sarkanās asins šūnas tiek iznīcinātas ātrāk, nekā tās rodas.

Netiešais Kumbsa tests vai netiešais antiglobulīna tests tiek veikts, lai meklētu antivielas, kas nav saistītas ar sarkanajām asins šūnām. Paraugam tiek izmantots asins serums, kas satur antivielas. Šī procedūra notiek diezgan reti: to galvenokārt veic, lai noteiktu asins pārliešanas iespējamību vai kā grūtnieču pārbaudes posmu.

4. Kumbsa reakcijas rezultāti

Norm:

Negatīvs testa rezultāts - antivielas nav atklātas.

• Tiešais Kumbsa tests... Negatīvs tiešais antiglobulīna tests nozīmē, ka jūsu asinīs nav antivielu, kas saistītas ar sarkanajām asins šūnām.
• Netiešais Kumbsa tests... Negatīvs netiešs antiglobulīna tests nozīmē, ka jūsu asinis ir saderīgas ar donora asinīm. Grūtniecei šāds rezultāts nozīmē, ka viņas ķermenī nav izveidojušās antivielas pret bērna Rh pozitīvo asinsgrupu (Rh sensibilizācija nav notikusi).

Atkāpe no normas:

• Tiešais Kumbsa tests... Pozitīvs tiešais antiglobulīna tests nozīmē, ka jūsu asinīs ir antivielas, kas cīnās pret sarkanajiem asinsķermenīšiem. To var izraisīt nesaderīgu asins pārliešana vai tādas slimības kā hemolītiskā anēmija vai jaundzimušā hemolītiskā slimība (HDN).
• Netiešais Kumbsa tests... Pozitīvs netiešs antiglobulīna testa rezultāts nozīmē, ka jūsu asinis nav saderīgas ar donora asinīm. Grūtniecei šie rezultāti norāda uz antivielu klātbūtni pret pozitīvo Rh faktoru bērna asinīs (Rh sensibilizācija). Ja bērnam ir Rh pozitīva parādība, visu grūtniecības laiku ārsts rūpīgi uzraudzīs māti.

Antiglobulīna princips... Anti-eritrocītu antivielas ar nepilnīgu tipu un komplementa molekulas (C), kas atrodas uz eritrocītu virsmas, var noteikt - tieši pārbaudot - ar aglutināciju saskarē ar dzīvnieku serumu, kas satur antivielas pret cilvēka antiglobulīnu (antiglobulīna serumu). Brīvās seruma nepilnīgās antivielas tiek atklātas - netiešs tests - fiksējot tās uz normālu 0 grupas eritrocītu maisījuma, kuru visi antigēni pieder zināmajai Rh sistēmai, pēc tam aglutinēti antiglobulīna seruma ietekmē.

Kumbsa antiglobulīna testa materiāli, reaģenti: 10/100 ml mēģenes; 1,2 ml graduētas pipetes; pasterētas pipetes; statīvi; neslīpēti slaidi; 8,5 ‰ NaCl šķīdums; eritrocīti. Pacienta eritrocīti, kā arī tie, kas pieder pie 0 grupas, tiks iegūti no svaigi savāktām asinīm uz antikoagulantu vielas (EDTA šķīduma).

Atlasiet 0. grupas eritrocītus tā, lai tie nāk no normāliem indivīdiem un saturētu visus rh antigēni... Tos var uzglabāt līdz 7 dienām autologā plazmā + 4 ° C temperatūrā. Ja nav 0. grupas sarkano asins šūnu, var izmantot zināmu antigēnu mozaīku, 0. grupas sarkano asins šūnu, Rh pozitīvu un Rh negatīvu sarkano asins šūnu maisījumu.

Serums pacientam jāņem svaigi paraugi.

Antiglobulīna serums ražo institūts. Dr. I. Cantacuzino, pieejams liofilizētā veidā ampulās, kas satur 1 ml. Pēc izšķīdināšanas serumu uzglabā -20 ° C temperatūrā.

Kumbsa antiglobulīna testa tehnika:
un) Tiešais Kumbsa tests: 3 reizes noskalojiet pacienta eritrocītus ar 8,5 ‰ NaCl šķīdumu.
Uzlieciet lielu pilienu no antiglobulīna seruma atšķaidījumiem uz vairākiem mikroskopa priekšmetstikliņiem un blakus tam - nelielu pilienu no pacienta eritrocītu nogulsnēm; samaisiet pilienus aiz stikla stūra. Sagatavoto materiālu atstāj uz galda 5 minūtes, pēc tam pārbauda, \u200b\u200bvai nav aglutinātu. Pozitīva rezultāta gadījumā nosakiet maksimālo aglutinējošo titru.

b) Netiešais Kumbsa tests: 0 grupas eritrocīti, rēzus pozitīvi un rēzus negatīvi, mazgājiet 3 reizes ar 8,5 ‰ NaCl šķīdumu un pakļaujiet pacienta serumam ar ātrumu 2 pilieni eritrocītu uz 8-10 pilieniem seruma, pēc tam 60 minūtes, inkubēt 37 ° NO. Pēc tam eritrocītus vēlreiz trīs reizes mazgā un iedarbojas uz tiem ar antiglobulīna serumu, saskaņā ar instrukcijām tiešajam Kumbsa testam.

Kad runa ir par par aukstām aktīvām antivielām 60 minūtes veikt 0 grupas eritrocītu sensibilizāciju. + 4 ° C temperatūrā.

Piezīme: 1) Neveiciet tiešu Kumbsa testu ar eritrocītiem, kas vienu vai vairākas dienas uzglabāti + 4 ° C vai istabas temperatūrā, jo nepilnīgu auksti aktīvo antivielu fiksācijas dēļ rezultāti var izrādīties kļūdaini pozitīvi. atrodas normālā serumā. 2) Smagas hiperproteinēmijas gadījumā eritrocītus nomazgājiet 4–5 reizes un, izmantojot sulfosalicilskābi, pārbaudiet, vai pēdējā mazgāšanas šķidrumā nav sūkalu olbaltumvielu.

Iespējamie 2 μg IgG / ml atlikumi eritrocītu nogulumu kannā neitralizēt antiglobulīna serumu... Kumbsa testu var veikt arī, izmantojot monospecifiskus anti-IgG, -IgM, -IgA-C3 un -C4 serumus, lai noskaidrotu dziļumu tipu uz eritrocītu virsmas, piemēram, tiem, kas cieš no autoimūnas hemolītiskās anēmijas.

Kumbsa reakcija ir efektīva metode eritrocītu antigēnu un anti-eritrocītu antivielu noteikšanai cilvēka asinīs netiešas aglutinācijas reakcijas laikā. Testa pamats ir īpašu monoklonālu reaģentu, kuru pamatā ir G klases imūnglobulīni (IgG), izmantošana eritrocītu antigēnu tipēšanā, kam seko Kumbsa antiglobulīna seruma (AGS) izmantošana reakcijas otrajā posmā.

AGS ražo, sajaucot serumu no laboratorijas dzīvnieku asinīm, kas imunizēti ar cilvēka G klases imūnglobulīniem un monoklonālām antivielām, pret vienu no komponentiem, cilvēka seruma C3D komplementu. AGS izraisa ar specifiskām antivielām sensibilizētu eritrocītu aglutināciju. Ja AGS ietekmē antivielu uz eritrocītiem nav, pozitīva reakcija nenotiek.

Netiešā Kumbsa reakcija ļauj noteikt:

• eritrocītu antigēni, kas noteikti ar IgG reaģentiem ("nepilnīgas" antivielas, piemēram, monoklonālie reaģenti anti-D, anti-F Ya, anti-F Y b);
• igG klases anti-eritrocītu antivielas.

Netiešais antiglobulīna tests: eritrocītu antigēnu noteikšana

Mēs iepazīstinām ar netiešās Kumbsa reakcijas metodi, izmantojot anti-D IgG tsoliclone piemēru.

1. Marķējiet tīru mēģeni: norādiet pārbaudāmās personas vārdu.
2. Pipetē mēģenē 2 pilienus (aptuveni 0,1 ml) anti-D IgG zoliclona.
3. Pievieno 2 pilienus 5% analizēto eritrocītu suspensijas, kas iepriekš mazgāta ar fizioloģisko šķīdumu. Sajauc testa paraugus ar zoliclon.
4. Maisījumu 30 minūtes inkubē ūdens vannā vai inkubatorā 37 ° C temperatūrā.
5. Ar Pasteur pipeti testa mēģenē pievieno 5-10 ml fizioloģiskā šķīduma.
6. Centrifugē mēģeni vienu minūti ar 1200 g centrbēdzes paātrinājumu 18 - 25 ° C temperatūrā.
7. Noņemiet fizioloģisko šķīdumu.
8. Atkārtojiet eritrocītu mazgāšanas procedūru, vēl 2 - 3 reizes centrifugējot.
9. Asins šūnu granulās pievieno 2 pilienus antiglobulīna seruma, samaisa.
10. Centrifugē mēģeni minūtes laikā ar 1200 g centrbēdzes paātrinājumu 18 - 25 ° C temperatūrā.
11. Pievienojiet 3 līdz 5 pilienus fizioloģiskā šķīduma, izmantojot pipeti vai Pasteur pipeti.
12. Atkārtoti suspendē granulu un vizuāli novērtē aglutināciju. Ekspresētie aglutināti testa mēģenes apakšā uz dzidra šķīduma fona norāda uz eritrocītu antigēna noteikšanu. Necaurspīdīga asins šūnu suspensija norāda uz antigēna neesamību.

Kumbsa reakcija: izoimūno anti-eritrocītu antivielu skrīnings

Pētījums tiek veikts kā daļa no donora un recipienta asinīs esošo visu eritrocītu antigēnu individuālās savietojamības testa. Secinājums par saņēmēja seruma pilnīgu saderību ar donora eritrocītiem tiek veikts, pamatojoties uz hemolīzes un / vai aglutinācijas neesamību visos analīzes posmos. Hemolīzes un / vai aglutinācijas pazīmes jebkurā testa stadijā norāda uz asins paraugu nesaderību.

Saderības novērtējums pēc AB0 sistēmas, "auksto" antivielu noteikšana

1. Sagatavojiet donora asins paraugu:
   • ar automātisko dozatoru mēģenē pievieno 0,2 ml asiņu;
   • Eritrocītus 3 reizes nomazgā 5,0 ml fizioloģiskā šķīduma;
   • atkārtoti suspendē granulu 3-4 ml LISS zema jonu stipruma šķīdumā.
2. Marķējiet otro tīro mēģeni ar saņēmēja vārdu un donora vārdu.
3. Pipetē 0,1 ml saņēmēja seruma marķētā mēģenē ar automātisku pipeti.
4. Pievieno 2 pilienus 5% eritrocītu suspensijas LISS šķīdumā.
5. Tūlīt centrifugē maisījumu ar 1200 g centrbēdzes paātrinājumu 18 - 25 ° C temperatūrā 15 - 20 sekundes.
6. Atdaliet nogulsnes no apakšas, viegli sakratot mēģeni. Novērtējiet aglutinātu klātbūtni. Hemolīzes un / vai aglutinātu klātbūtne nozīmē:
   • nesaderība AB0 sistēmā;
   • igM vai IgA klases "auksto" antivielu klātbūtne pacienta serumā, kas nav specifiski AB0 antigēniem.

"Silto" antivielu noteikšana

1. Ja nav hemolīzes un / vai aglutinātu, mēģeni inkubē 10 - 15 minūtes 37 ° C temperatūrā.
2. Centrifugē mēģeni ar 1200 g temperatūru 15 līdz 20 sekundes istabas temperatūrā.
3. Kratiet mēģeni un pārbaudiet, vai supernatantā ir hemolīze un / vai aglutināti. Pozitīvs rezultāts norāda uz "siltu" IgM antivielu noteikšanu pret donora eritrocītu antigēniem pacienta serumā.

IgG antivielu noteikšana Kumbsa testā

1. Ja pētījuma pēdējā posmā rezultāts ir negatīvs, mēģenē ar Pasteur pipeti pievieno 5 ml 0,9% NaCl šķīduma.
2. Centrifugē mēģeni ar 1200 g 15 - 20 sekundes ar gaisa temperatūru 18 - 25 ° C. Uzmanīgi iznīciniet supernatantu ar Pasteur pipeti.
3. Atkārtojiet eritrocītu mazgāšanu vēl 2 - 3 reizes.
4. Caurulē pievieno 1-2 pilienus antiglobulīna seruma. Rūpīgi samaisa.
5. Centrifugē mēģeni ar 1200 g 15 līdz 20 sekundes.
6. Viegli sadaliet eritrocītu nogulsnes un vizuāli novērtējiet reakcijas rezultātu. Aglutinācijas noteikšana nozīmē IgG antivielu klātbūtni pret donora eritrocītu antigēniem pacienta serumā.