माइक्रोस्कोपी के प्रकार। सूक्ष्म अनुसंधान के आधुनिक तरीके

माइक्रोस्कोपी - सूक्ष्मदर्शी का उपयोग करके वस्तुओं का अध्ययन करने के लिए तरीकों का एक सेट। माइक्रोस्कोपी में सबसे महत्वपूर्ण बात स्पष्ट रूप से वस्तुओं की रूपरेखा को देखना है, जो आपको उन्हें सही ढंग से पहचानने की अनुमति देता है। माइक्रोकैपिंग के कई तरीके अलग-अलग हैं।

चलो मुख्य पर रहते हैं।

ब्राइटफील्ड विधि - माइक्रोस्कोपी में सबसे आम। प्रकाश का एक बीम, दवा के गैर-अवशोषित क्षेत्रों से गुजर रहा है, एक समान रूप से प्रबुद्ध क्षेत्र देता है। स्पेक्ट्रम के दृश्य भाग में एक वस्तु प्रकाश को अवशोषित करती है, जिससे इस वस्तु की विपरीत छवि प्राप्त होती है। माइक्रोस्कोपी अक्सर कुछ वस्तुओं को अलग करने के लिए विभिन्न रंगों का उपयोग करता है।

डार्कफील्ड विधि - एक डार्क फील्ड माइक्रोस्कोप में, सैंपल स्कैटर लाइट की अमानवीयता, और यह बिखरी हुई लाइट अध्ययन के लिए सैंपल की एक छवि बनाती है। ज्यादातर अपारदर्शी वस्तुओं के अध्ययन के लिए अध्ययन में उपयोग किया जाता है। प्रकाश प्रसार के कारण वस्तु चमकती है। इस विधि के साथ माइक्रोस्कोपी के लिए, एक डार्क फील्ड कंडेनसर होना आवश्यक है।

चरण विपरीत माइक्रोस्कोपी चरण विपरीत विधि कंडेनसर में रखे गए एक विशेष कुंडलाकार डायाफ्राम और उद्देश्य में स्थित तथाकथित चरण प्लेट के कारण अध्ययन के तहत अनियंत्रित संरचनाओं के विपरीत प्रदान करती है। माइक्रोस्कोप प्रकाशिकी का यह डिज़ाइन एक अस्थिर तैयारी के माध्यम से प्रेषित प्रकाश के चरण परिवर्तनों को बदलना संभव बनाता है, जो आंख से नहीं माना जाता है, इसके आयाम में परिवर्तन में, अर्थात्। परिणामी छवि की चमक।

हस्तक्षेप माइक्रोस्कोपी चरण विपरीत माइक्रोस्कोप की किस्में एक हस्तक्षेप माइक्रोस्कोप हैं, जो ऊतक द्रव्यमान को मापने के लिए डिज़ाइन की गई है, और एक अंतर हस्तक्षेप माइक्रोस्कोप (नोमार्स्की ऑप्टिक्स के साथ), जो विशेष रूप से कोशिकाओं और अन्य जैविक वस्तुओं की सतह राहत का अध्ययन करने के लिए उपयोग किया जाता है।

ध्रुवीकरण माइक्रोस्कोपी। एक ध्रुवीकरण माइक्रोस्कोप एक प्रकाश माइक्रोस्कोप का एक संशोधन है जिसमें दो ध्रुवीकरण फिल्टर स्थापित होते हैं - प्रकाश किरण और वस्तु के बीच पहला (ध्रुवीय), और उद्देश्य लेंस और आंख के बीच दूसरा (विश्लेषक)। प्रकाश केवल एक दिशा में पहले फिल्टर से गुजरता है, दूसरे फिल्टर में एक मुख्य अक्ष होता है जो पहले फिल्टर के लंबवत होता है, और यह प्रकाश संचारित नहीं करता है। परिणाम एक अंधेरे क्षेत्र प्रभाव है। दोनों बीमों को प्रकाश किरण की दिशा बदलने के लिए घुमाया जा सकता है।

इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी। माइक्रोस्कोपी तकनीक के विकास में एक बड़ा कदम एक इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप का निर्माण और उपयोग था (देखें चित्र 1, बी)। एक इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप प्रकाश माइक्रोस्कोप की तुलना में कम तरंग दैर्ध्य के साथ इलेक्ट्रॉनों की एक धारा का उपयोग करता है। 50,000 V के वोल्टेज पर, एक निर्वात में इलेक्ट्रॉन प्रवाह की गति से उत्पन्न होने वाले विद्युत चुम्बकीय दोलनों की तरंग दैर्ध्य 0.0056 एनएम है। यह सैद्धांतिक रूप से गणना की जाती है कि इन स्थितियों के तहत हल की गई दूरी लगभग 0.002 एनएम, या 0.000002 माइक्रोन, अर्थात् हो सकती है। प्रकाश सूक्ष्मदर्शी की तुलना में 100,000 गुना कम है। व्यावहारिक रूप से आधुनिक इलेक्ट्रॉन सूक्ष्मदर्शी में, निर्धारित दूरी लगभग 0.1-0.7 एनएम है।

एक्स-रे माइक्रोस्कोपी - परमाणु स्तर पर मैक्रोमोलेक्यूल्स की संरचना का अध्ययन करने के लिए, एक्स-रे का उपयोग करके लगभग 0.1 एनएम (एक हाइड्रोजन परमाणु का व्यास) की तरंग दैर्ध्य का उपयोग करके विधियों का उपयोग किया जाता है। क्रिस्टल जाली बनाने वाले अणुओं का विवर्तन पैटर्न का उपयोग करके अध्ययन किया जाता है, जो विभिन्न तीव्रता के कई स्थानों के रूप में एक फोटोग्राफिक प्लेट पर दर्ज होते हैं। धब्बों की तीव्रता विकिरण को तितर बितर करने के लिए सरणी में विभिन्न वस्तुओं की क्षमता पर निर्भर करती है। विवर्तन पैटर्न में स्पॉट की स्थिति सिस्टम में ऑब्जेक्ट की स्थिति पर निर्भर करती है, और उनकी तीव्रता इसकी आंतरिक परमाणु संरचना को इंगित करती है।

सूक्ष्मजीवों का उपयोग सूक्ष्मजीवों का पता लगाने और उनका अध्ययन करने के लिए किया जाता है। प्रकाश सूक्ष्मदर्शी सूक्ष्मजीवों का अध्ययन करने के लिए डिज़ाइन किए गए हैं जिनका आकार कम से कम 0.2 माइक्रोन (बैक्टीरिया, प्रोटोजोआ, आदि) और इलेक्ट्रॉनिक सूक्ष्मदर्शी हैं जो छोटे सूक्ष्मजीवों (वायरस) और बैक्टीरिया की सबसे छोटी संरचनाओं का अध्ययन करते हैं।
आधुनिक प्रकाश सूक्ष्मदर्शी जटिल ऑप्टिकल उपकरण हैं, जिनसे निपटने के लिए कुछ निश्चित ज्ञान, कौशल और महान देखभाल की आवश्यकता होती है।
प्रकाश सूक्ष्मदर्शी को छात्र, काम, प्रयोगशाला और अनुसंधान सूक्ष्मदर्शी में विभाजित किया जाता है, डिजाइन और प्रकाशिकी में भिन्न होता है। घरेलू माइक्रोस्कोप (बायोलम, बिमम, मिकमेड) में पदनाम हैं जो दर्शाता है कि वे किस समूह (सी - छात्र, आर - कार्यकर्ता, एल - प्रयोगशाला, I - अनुसंधान) से संबंधित हैं, पूरा सेट एक संख्या द्वारा इंगित किया गया है।

एक माइक्रोस्कोप यांत्रिक और ऑप्टिकल भागों के बीच अंतर करता है।
सेवा यांत्रिक भागशामिल हैं: एक तिपाई (एक आधार और एक ट्यूब धारक से युक्त) और एक ट्यूब जिसके साथ रिवाल्वर लगा होता है, जो कि उद्देश्यों को जोड़ने और बदलने के लिए लगाया जाता है, एक तैयारी के लिए एक मंच, एक कंडेनसर और हल्के फिल्टर को जोड़ने के लिए संलग्नक, साथ ही मोटे (मैक्रो-मैकेनिज्म, मैक्रोक्रूज़) और ललित के लिए तिपाई में निर्मित तंत्र।
(micromechanism, माइक्रोस्कोप) चरण या ट्यूब धारक को स्थानांतरित करने के लिए।
ऑप्टिकल हिस्सा माइक्रोस्कोप का प्रतिनिधित्व उद्देश्यों, आंखों की पुतलियों और एक रोशनी प्रणाली द्वारा किया जाता है, जो बदले में मंच के नीचे स्थित एब्बे कंडेनसर से युक्त होता है, एक सपाट और अवतल पक्ष के साथ एक दर्पण, साथ ही साथ एक अलग या अंतर्निहित रोशनी में। रिवॉल्वर में उद्देश्य खराब कर दिए जाते हैं, और संबंधित आइपाइप जिसके माध्यम से छवि देखी जाती है, ट्यूब के विपरीत तरफ स्थापित होता है। एककोशिकीय (एक पलक होने वाली) और दूरबीन (दो समान भौहें वाले) ट्यूबों के बीच भेद।

माइक्रोस्कोप और प्रकाश व्यवस्था के योजनाबद्ध आरेख

1. प्रकाश स्रोत;
2. कलेक्टर;
3. आईरिस क्षेत्र डायाफ्राम;
4. दर्पण;
5. आइरिस एपर्चर डायाफ्राम;
6. संघनक;
7. दवा;
7. "तैयारी की वास्तविक मध्यवर्ती छवि, लेंस द्वारा गठित;
7 "" है। ऐपिस के माध्यम से देखे जाने वाले नमूने की एक विस्तारित भूत अंतिम छवि;
8. लेंस;
9. लेंस निकास आइकन;
10. भौं के क्षेत्र डायाफ्राम;
11. भौं;
12. आँख।

छवि अधिग्रहण में मुख्य भूमिका द्वारा निभाई जाती है लेंस... यह ऑब्जेक्ट की एक विस्तृत, वास्तविक और उलटी छवि बनाता है। तब इस छवि को और बढ़ाया जाता है जब ऐपिस के माध्यम से देखा जाता है, जो एक पारंपरिक आवर्धक कांच की तरह, एक बढ़े हुए आभासी छवि देता है।
बढ़ाई माइक्रोस्कोप को मोटे तौर पर ऐपिस के आवर्धन से गुणा करके निर्धारित किया जा सकता है। हालांकि, आवर्धन छवि गुणवत्ता का निर्धारण नहीं करता है। छवि की गुणवत्ता, इसकी स्पष्टता निर्धारित की जाती है माइक्रोस्कोप संकल्प, अर्थात्, दो अलग-अलग दूरी बिंदुओं को अलग-अलग भेद करने की क्षमता। संकल्प की सीमा - न्यूनतम दूरी जिस पर ये बिंदु अभी भी अलग-अलग दिखाई दे रहे हैं - प्रकाश की तरंग दैर्ध्य पर निर्भर करता है जो वस्तु और लेंस के संख्यात्मक छिद्र को रोशन करता है। संख्यात्मक एपर्चर, बदले में, उद्देश्य के कोणीय एपर्चर और ललाट उद्देश्य लेंस और नमूने के बीच स्थित माध्यम के अपवर्तक सूचकांक पर निर्भर करता है। कोणीय एपर्चर अधिकतम कोण है जिस पर किसी वस्तु से गुजरने वाली किरणें लेंस में प्रवेश कर सकती हैं। बड़ा एपर्चर और उद्देश्य और नमूना के बीच माध्यम के अपवर्तक सूचकांक के करीब, ग्लास के अपवर्तक सूचकांक के लिए, उच्च उद्देश्य का संकल्प। यदि हम मानते हैं कि संघनित्र एपर्चर लेंस एपर्चर के बराबर है, तो संकल्प सूत्र निम्नानुसार है:

जहां R संकल्प सीमा है; - तरंग दैर्ध्य; NA संख्यात्मक एपर्चर है।

अंतर करना उपयोगी तथा निकम्मा बढ़ना। प्रभावी आवर्धन आमतौर पर लेंस के संख्यात्मक एपर्चर के बराबर होता है, 500 से 1000 बार बढ़ाया जाता है। उच्च ऐपिस बढ़ाना नए विस्तार को प्रकट नहीं करता है और बेकार है।
उद्देश्य और तैयारी के बीच के माध्यम के आधार पर, निम्न और मध्यम आवर्धन (40 x तक) के "शुष्क" उद्देश्य हैं और अधिकतम एपर्चर और आवर्धन (90-100 x) वाले विसर्जन हैं। एक "ड्राई" लेंस एक लेंस होता है, जिसके फ्रंट लेंस और तैयारी के बीच हवा होती है।

विसर्जन के उद्देश्यों की एक विशेषता यह है कि इस तरह के उद्देश्य और तैयारी के ललाट लेंस के बीच एक विसर्जन तरल रखा जाता है, जिसमें एक अपवर्तक सूचकांक ग्लास (या इसके करीब) के समान होता है, जो उद्देश्य के संख्यात्मक एपर्चर और संकल्प में वृद्धि प्रदान करता है। आसुत जल का उपयोग जल विसर्जन लेंस के लिए विसर्जन तरल, और तेल विसर्जन लेंस के लिए देवदार तेल या विशेष सिंथेटिक विसर्जन तेल के रूप में किया जाता है। सिंथेटिक विसर्जन तेल का उपयोग बेहतर है, क्योंकि इसके मापदंडों को अधिक सटीक रूप से सामान्यीकृत किया जाता है, और देवदार के तेल के विपरीत, यह उद्देश्य के सामने के लेंस की सतह पर सूख नहीं जाता है। स्पेक्ट्रम के पराबैंगनी क्षेत्र में काम करने वाले लेंस के लिए, ग्लिसरीन का विसर्जन तरल के रूप में किया जाता है। किसी भी मामले में आपको विसर्जन तेल सरोगेट और विशेष रूप से, वैसलीन तेल का उपयोग नहीं करना चाहिए।
** लेंस के साथ प्राप्त एक छवि में कई कमियां हैं: गोलाकार और रंगीन विपथन, छवि क्षेत्र की वक्रता, आदि। कई लेंसों वाले लेंस में, ये कमियां कुछ हद तक सही हो जाती हैं। इन कमियों के सुधार की डिग्री के आधार पर, achromats और अधिक जटिल apochromats प्रतिष्ठित हैं। तदनुसार, जिन लेंसों में छवि क्षेत्र की वक्रता को ठीक किया जाता है, उन्हें प्लैनाक्रोमैट और प्लैनापोक्रोमैट कहा जाता है। इन लेंसों के उपयोग से पूरे क्षेत्र में एक तेज छवि का निर्माण होता है, जबकि पारंपरिक लेंस के साथ प्राप्त छवि केंद्र में और देखने के क्षेत्र के किनारों पर समान तेज नहीं होती है। एक लेंस की सभी विशेषताओं को आमतौर पर इसके बैरल पर उकेरा जाता है: इसका अपना आवर्धन, छिद्र, लेंस प्रकार (एपीओ - \u200b\u200bएपोक्रोमैट, आदि); पानी के विसर्जन लेंस में छठे पदनाम और निचले हिस्से में फ्रेम के चारों ओर एक सफेद अंगूठी है, तेल विसर्जन लेंस में एमआई पदनाम और एक काला अंगूठी है।
सभी उद्देश्यों को 0.17 मिमी कवर स्लिप के साथ काम करने के लिए डिज़ाइन किया गया है।
विशेष रूप से सूखे सिस्टम (40x) के साथ काम करते समय, छवि की गुणवत्ता के लिए coverslip की मोटाई विशेष रूप से महत्वपूर्ण है। जब विसर्जन के उद्देश्यों के साथ काम करते हैं, तो कवर ग्लास का उपयोग 0.17 मिमी से अधिक मोटा न करें, क्योंकि कवर ग्लास की मोटाई उद्देश्य की कार्य दूरी से अधिक हो सकती है, और इस मामले में, यदि आप नमूने पर उद्देश्य पर ध्यान केंद्रित करने की कोशिश करते हैं, तो सामने वाले उद्देश्य लेंस क्षतिग्रस्त हो सकते हैं।
ऐपिस में दो लेंस होते हैं और यह भी कई प्रकार के होते हैं, जिनमें से प्रत्येक का उपयोग एक विशिष्ट प्रकार के लेंस के साथ किया जाता है, साथ ही छवि की खामियों को दूर करता है। ऐपिस प्रकार और बढ़ाई फ्रेम पर संकेत दिया गया है।
कंडेनसर को माइक्रोस्कोप या रोशनी के दर्पण (एक ओवरहेड या अंतर्निहित इल्यूमिनेटर का उपयोग करने के मामले में) द्वारा निर्देशित रोशनी से प्रकाश की तैयारी पर ध्यान केंद्रित करने के लिए डिज़ाइन किया गया है। कंडेनसर का हिस्सा एपर्चर डायाफ्राम है, जो तैयारी की उचित रोशनी के लिए आवश्यक है।
इल्लुमिनेटर में उद्घाटन के आधार पर एक मोटी रेशा, एक ट्रांसफार्मर, एक कलेक्टर लेंस और एक क्षेत्र डायाफ्राम के साथ एक कम-वोल्टेज तापदीप्त दीपक होता है, जो तैयारी पर प्रबुद्ध क्षेत्र के व्यास को निर्धारित करता है। दर्पण रोशनी को संघनित्र से प्रकाश में निर्देशित करता है। प्रबुद्ध से कंडेनसर तक बीम के समानांतरता बनाए रखने के लिए, केवल दर्पण के सपाट पक्ष का उपयोग किया जाना चाहिए।

प्रकाश व्यवस्था को समायोजित करना और माइक्रोस्कोप पर ध्यान केंद्रित करना

छवि गुणवत्ता भी उचित प्रकाश व्यवस्था पर अत्यधिक निर्भर है। माइक्रोस्कोपी के तहत एक नमूने को रोशन करने के कई अलग-अलग तरीके हैं। सबसे आम तरीका है koehler के अनुसार प्रकाश की स्थापनाजो इस प्रकार है:
1) माइक्रोस्कोप दर्पण के खिलाफ इल्लुमिनेटर स्थापित करें;
2) प्रदीप्त दीपक को चालू करें और एक फ्लैट (!) माइक्रोस्कोप दर्पण पर प्रकाश को निर्देशित करें;
3) माइक्रोस्कोप चरण पर तैयारी रखें;
4) माइक्रोस्कोप दर्पण को श्वेत पत्र की एक शीट से ढकें और उस पर दीपक फिलामेंट की छवि को रोशन करें, जो कि प्रकाश धारक को रोशनी में घुमा रहा है;
5) दर्पण से कागज की शीट को हटा दें;
6) कंडेनसर एपर्चर डायाफ्राम को बंद करें। दर्पण को स्थानांतरित करने और दीपक धारक को थोड़ा हिलाने से, फिलामेंट की छवि एपर्चर डायाफ्राम पर केंद्रित होती है। माइक्रोस्कोप से इल्यूमिनेटर की दूरी ऐसी होनी चाहिए कि लैंप फिलामेंट की छवि कंडेनसर एपर्चर डायाफ्राम के व्यास के बराबर थी (आप माइक्रोस्कोप बेस के दाईं ओर स्थित एक फ्लैट दर्पण का उपयोग करके एपर्चर डायाफ्राम का निरीक्षण कर सकते हैं)।
7) कंडेनसर के एपर्चर डायाफ्राम को खोलें, रोशनी के क्षेत्र डायाफ्राम के छिद्र को कम करें और दीपक की असंगति को काफी कम करें;
8) कम आवर्धन (10x) पर, ऐपिस के माध्यम से देखते हुए, तैयारी की एक तेज छवि प्राप्त की जाती है;
9) दर्पण को थोड़ा मोड़कर, क्षेत्र डायाफ्राम की छवि को स्थानांतरित करें, जो एक उज्ज्वल स्थान की तरह दिखता है, देखने के क्षेत्र के केंद्र में। कंडेनसर को कम करने और ऊपर उठाने से, वे तैयारी के विमान में क्षेत्र डायाफ्राम के किनारों की एक तेज छवि प्राप्त करते हैं (उनके चारों ओर एक रंगीन सीमा देखी जा सकती है);
10) रोशनी के क्षेत्र के किनारों को रोशनी के क्षेत्र डायाफ्राम को खोलें, दीपक तंतु की असंगति को बढ़ाएं और थोड़ा (1/3 द्वारा) कंडेनसर एपर्चर डायाफ्राम के उद्घाटन को कम करें;
11) लेंस बदलते समय, प्रकाश सेटिंग की जांच करें।
Koehler के अनुसार प्रकाश समायोजन को समाप्त करने के बाद, क्षेत्र के कंडेनसर खोलने और एपर्चर डायाफ्राम की स्थिति को बदलना असंभव है। तैयारी की रोशनी को केवल तटस्थ प्रकाश फिल्टर के साथ या एक रिओस्टेट का उपयोग करके दीपक की असंगतता को बदलकर नियंत्रित किया जा सकता है। कंडेनसर एपर्चर डायाफ्राम के अत्यधिक उद्घाटन से छवि के विपरीत महत्वपूर्ण कमी हो सकती है, और अपर्याप्त उद्घाटन - छवि गुणवत्ता (विवर्तन के छल्ले की उपस्थिति) में एक महत्वपूर्ण गिरावट हो सकती है। एपर्चर डायाफ्राम के सही उद्घाटन की जांच करने के लिए, ऐपिस को हटा दें और, ट्यूब में देखते हुए, इसे खोलें ताकि यह एक तिहाई से चमकदार क्षेत्र को कवर करे। कम आवर्धन (10x तक) के लेंस के साथ काम करते समय तैयारी की सही रोशनी के लिए, कंडेनसर के ऊपरी लेंस को हटाना और हटाना आवश्यक है।
ध्यान! जब लेंस के साथ काम करते हैं जो उच्च आवर्धन देते हैं - मजबूत सूखी (40x) और विसर्जन (90x) सिस्टम के साथ, ताकि सामने वाले लेंस को नुकसान न पहुंचे, ध्यान केंद्रित करते समय निम्नलिखित तकनीक का उपयोग करें: पक्ष से देखते हुए, लेंस को एक मैक्रोस्कोप के साथ कम करें लगभग तैयारी के साथ संपर्क करने के लिए, फिर, देख में ऐपिस, जब तक छवि दिखाई देती है तब तक माइक्रोस्कोप बहुत धीरे से उद्देश्य को बढ़ाता है और माइक्रोस्कोप की मदद से माइक्रोस्कोप का अंतिम ध्यान केंद्रित किया जाता है।

माइक्रोस्कोप की देखभाल

माइक्रोस्कोप के साथ काम करते समय, महान बल का उपयोग न करें। अपनी उंगलियों से लेंस, दर्पण और हल्के फिल्टर की सतह को न छुएं।
लेंस की आंतरिक सतहों और बैरल प्रिज्म को धूल से बचाने के लिए, बैरल में हमेशा ऐपिस छोड़ दें। लेंस की बाहरी सतहों की सफाई करते समय, ईथर में धोए गए नरम ब्रश के साथ उनसे धूल हटा दें। यदि आवश्यक हो, धीरे से अच्छी तरह से धोया, साबुन से मुक्त, लिनन या कैम्ब्रिक कपड़े के साथ लेंस सतहों को साफ करें, शुद्ध गैसोलीन, ईथर या सफाई प्रकाशिकी के लिए एक विशेष मिश्रण के साथ सिक्त। यह xylene के साथ लेंस के प्रकाशिकी को पोंछने के लिए अनुशंसित नहीं है, क्योंकि इससे उनके चिपके हुए हो सकते हैं।
बाहरी सिल्वरिंग वाले शीशों से, आप केवल रबड़ के बल्ब से इसे उड़ाकर धूल हटा सकते हैं। आप उन्हें मिटा नहीं सकते। लेंस को स्वयं को अनसुना करना और अलग करना भी असंभव है - इससे उनकी क्षति होगी। माइक्रोस्कोप पर काम के अंत में, ऊपर वर्णित के रूप में उद्देश्य के सामने के लेंस से विसर्जन तेल के अवशेष को सावधानीपूर्वक निकालना आवश्यक है। फिर चरण (या एक निश्चित चरण के साथ माइक्रोस्कोप में कंडेनसर) को कम करें और माइक्रोस्कोप को कवर के साथ कवर करें।
माइक्रोस्कोप की उपस्थिति को संरक्षित करने के लिए, समय-समय पर इसे नरम कपड़े से हल्के से पोंछना आवश्यक है, एसिड-मुक्त पेट्रोलियम जेली के साथ और फिर एक सूखे नरम साफ कपड़े के साथ।

पारंपरिक प्रकाश माइक्रोस्कोपी के अलावा, माइक्रोस्कोपी तरीके हैं जो आपको अस्थिर सूक्ष्मजीवों का अध्ययन करने की अनुमति देते हैं: फेस कोणट्रास्ट , काला क्षेत्र तथा luminescent माइक्रोस्कोपी। सूक्ष्मजीवों और उनकी संरचनाओं का अध्ययन करने के लिए, जिनमें से आकार एक प्रकाश माइक्रोस्कोप के संकल्प से कम है, उपयोग करें

प्रकाश-ऑप्टिकल माइक्रोस्कोपी के अलावा, माइक्रोस्कोपी विधियों में शामिल हैं: डार्क-फील्ड, चरण-कंट्रास्ट, ल्यूमिनेसेंस और इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी।

4.3.4.1 डार्क फील्ड माइक्रोस्कोपी

ऑस्ट्रियाई वैज्ञानिक सिगांडी द्वारा विकसित एक अंधेरे क्षेत्र में अवलोकन की विधि, माइक्रोस्कोप के संकल्प को 10 गुना बढ़ाना संभव बनाती है। विधि टाइन्डल की घटना पर आधारित है - प्रकाश की तिरछी किरणों के साथ किसी वस्तु की रोशनी। लेंस से टकराने के बिना ये किरणें, आंख के लिए अदृश्य रहती हैं, इसलिए देखने का क्षेत्र अंधेरा दिखता है। उसी समय, दृश्य के क्षेत्र में स्थित वैकल्पिक रूप से अशुभ कोशिकाएं और किरणों के पारित होने के क्षेत्र में गिरने से उन्हें इस हद तक विक्षेपित किया जाता है कि किरणें लेंस में गिर जाती हैं। तब प्रेक्षक अंधेरे क्षेत्र में तीव्रता से चमकदार वस्तुओं को देखता है, क्योंकि प्रकाश की किरणें उनसे आती हैं।

एक पारंपरिक कंडेनसर को एक अंधेरे क्षेत्र के साथ बदलकर और रोशनी के लिए एक मजबूत प्रकाश स्रोत का उपयोग करके एक प्रकाश-ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप में एक दृश्य क्षेत्र बनाया जा सकता है। हालांकि, डार्क फील्ड इफ़ेक्ट तभी प्राप्त किया जा सकता है, जब कंडेनसर अपर्चर ऑब्जेक्टिव एपर्चर को 0.2 ... 0.4 यूनिट से अधिक कर दे। अंधेरे क्षेत्र के अध्ययन के लिए, लगभग 1.2 के एपर्चर के साथ एक कंडेनसर और 0.65 से 0.85 के एपर्चर वाले उद्देश्यों की सिफारिश की जाती है।

इस विधि का उपयोग सूक्ष्मजीवों की जीवित कोशिकाओं का अध्ययन करने के लिए किया जाता है। यह खमीर जैसी बड़ी वस्तुओं के कार्यात्मक और रूपात्मक अध्ययन के लिए विशेष रूप से मूल्यवान है। खमीर जीवों का साइटोप्लाज्म (एक उज्ज्वल प्रकाश स्रोत और एक अच्छा एपोक्रोमेटिक विसर्जन लेंस प्रदान करता है) कमजोर और समान रूप से नवजात शिशु। इसकी पृष्ठभूमि के खिलाफ, काले ऑप्टिकली रिक्त रिक्तिकाएं स्पष्ट रूप से प्रतिष्ठित हैं। वसा की बूंदें अत्यधिक चमकदार कणिकाओं के रूप में बाहर निकलती हैं। मरने वाली कोशिकाओं का प्रोटोप्लास्ट दूधिया सफेद रंग के साथ अफीम होता है।

4.3.4.2 चरण विपरीत माइक्रोस्कोपी

मानव आंख प्रकाश तरंग की लंबाई (रंग) और आयाम (तीव्रता, इसके विपरीत) में केवल अंतर का पता लगाती है, लेकिन चरण के अंतर को नहीं चुनती है।

लगभग सभी जीवित कोशिकाएं पारदर्शी होती हैं, क्योंकि एक जीवित कोशिका से गुजरने वाली प्रकाश किरणें अपने आयाम को नहीं बदलती हैं, हालांकि वे चरण में बदल जाती हैं।

चरण (गैर-विपरीत) की तैयारी को एक "आयाम" (विपरीत) में बदलना संभव है, जो वस्तु को रंगने से एक है (यह तकनीक जीवित कोशिकाओं के लिए बहुत कम उपयोग है), या डायाफ्राम को कवर करके कंडेनसर एपर्चर को कम करके (तकनीक भी अवांछनीय है, क्योंकि माइक्रोस्कोप का रिज़ॉल्यूशन कम हो जाता है)।

पारदर्शी भौतिक वस्तुओं का अवलोकन करने के लिए डच भौतिक विज्ञानी ज़र्निकी द्वारा प्रस्तावित चरण कंट्रास्ट माइक्रोस्कोपी की विधि, एक विशेष प्रकाशीय उपकरण का उपयोग करके दृश्य आयाम परिवर्तनों में किसी वस्तु से गुजरते हुए एक प्रकाश तरंग द्वारा चरण परिवर्तन के परिवर्तन पर आधारित है। यदि आप एक साधारण माइक्रोस्कोप के उद्देश्य में एक विशेष डिस्क माउंट करते हैं - एक रिंग के साथ एक चरण प्लेट, और कंडेनसर में - एक कुंडलाकार डायाफ्राम (प्रकाश किरणों के लिए अभेद्य एक प्लेट, जिसमें एक अंगूठी के रूप में एक पारदर्शी भट्ठा होता है), ताकि केवल कंडेनसर और लेंस के माध्यम से प्रकाश की एक अंगूठी गुजरती है, जो तब लेंस चरण प्लेट की अंगूठी के साथ गठबंधन किया जाता है, फिर प्रेषित प्रकाश किरण के चरणों को स्थानांतरित किया जाता है और चरण विपरीत प्रभाव देखा जा सकता है।

अनुसंधान के लिए, यह आवश्यक है कि प्रकाश माइक्रोस्कोप के अलावा, एक चरण-विपरीत डिवाइस (वर्तमान में सबसे व्यापक रूप से उपयोग किए जाने वाले मॉडल KF-1 या KF-4 हैं), जिसमें चरण उद्देश्य शामिल होते हैं, कुंडलाकार कुंडलाकार डायथ्राम्स का एक सेट और एक सहायक माइक्रोस्कोप (एक ऑप्टिकल डिवाइस रखा गया है) चरण विपरीत स्थापित करते समय ऐपिस के बजाय ट्यूब में)।

इस विधि का उपयोग सूक्ष्मजीवों की जीवित कोशिकाओं का अध्ययन करने के लिए किया जाता है, जिसका विपरीत अध्ययन की गई वस्तुओं की शारीरिक प्रक्रियाओं में हस्तक्षेप किए बिना वैकल्पिक रूप से प्राप्त किया जाता है।

4.3.4.3 Luminescence माइक्रोस्कोपी

फोटोलुमिनेसेंस की घटना के आधार पर। Luminescence (लुमेन से - प्रकाश) पदार्थों की चमक है जो ऊर्जा के किसी भी स्रोत के संपर्क में आने के बाद होती है: प्रकाश, इलेक्ट्रॉन बीम, आयनीकरण विकिरण। प्रकाश के प्रभाव के तहत फोटोल्यूमिनेसिसेंस किसी वस्तु का ल्यूमिनेंसेंस है। शॉर्ट-वेवलेंथ किरणों (नीली-बैंगनी, पराबैंगनी) और लंबी तरंगदैर्ध्य (पीले-हरे या नारंगी प्रकाश को चमकाने वाली किरणों) से उत्सर्जित होने पर कुछ जैविक वस्तुएँ उन्हें अवशोषित करने में सक्षम होती हैं। यह तथाकथित है अपना (प्राथमिक)ल्यूमिनेसेंस जो वस्तु के पूर्व रंग के बिना मनाया जाता है। माध्यमिक (मँडरा)ल्यूमिनेसिसेंस विशेष ल्यूमिनसेंट डाईज़ - फ्लूरोक्रोमेस (एक्रिडिन येलो, एरीडीन ऑरेंज, ऑरमाइन, प्रिमुलिन, कांगो रेड, टेट्रासाइक्लिन, क्विनिन) के साथ धुंधला हो जाने के बाद होता है। फ्लोरोक्रोमेस के साथ सना हुआ तैयारी मीडिया में अध्ययन किया जाता है जो शॉर्ट-वेवलेंथ किरणों की क्रिया के तहत लुमिनेसे नहीं करता है - पानी, ग्लिसरीन, तरल पैराफिन या खारा में।

पारंपरिक तरीकों पर प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी के लाभ हैं:

संयुक्त रंग और वस्तुओं के विपरीत;

पोषक तत्व मीडिया और जानवरों और पौधों के ऊतकों में सूक्ष्मजीवों के जीवित और मारे गए कोशिकाओं के आकारिकी का अध्ययन करने की संभावनाएं;

सेलुलर माइक्रोस्ट्रक्चर की जांच जो चुनिंदा विभिन्न फ्लोरोक्रोम को अवशोषित करती है, जो कि, जैसा कि विशिष्ट साइटोकैमिकल संकेतक थे;

कोशिकाओं में कार्यात्मक और रूपात्मक परिवर्तनों का अध्ययन;

प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं में फ्लूरोक्रोम का उपयोग करना और उनमें से कम सामग्री के साथ नमूनों में बैक्टीरिया की गिनती करना।

ल्यूमिनेसिसेंस माइक्रोस्कोपी के लिए, ग्लास स्लाइड पर स्मीयर तैयारी या देशी तैयारी तैयार की जाती है, जो विशेष फ्लोरोसेंट रंगों के साथ दागी जाती हैं। विसर्जन लेंस के साथ काम करते समय, एक गैर-फ्लोरोसेंट तेल का उपयोग करें।

4.3.4.4 इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी

आपको उन वस्तुओं का निरीक्षण करने की अनुमति देता है जिनके आयाम प्रकाश माइक्रोस्कोप (0.2 माइक्रोन) के संकल्प के बाहर हैं। इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप का उपयोग वायरस का अध्ययन करने के लिए किया जाता है, विभिन्न सूक्ष्मजीवों, मैक्रोलेक्यूलर संरचनाओं और अन्य सबमरोस्कोपिक वस्तुओं की ठीक संरचना। इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप का उच्च रिज़ॉल्यूशन, व्यावहारिक रूप से 0.1 से 0.2 एनएम तक, कुल 1,000,000 बार तक के कुल उपयोगी आवर्धन की अनुमति देता है।

इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप का उपकरण, सिद्धांत में, प्रकाश-प्रकाशीय माइक्रोस्कोप के समान है, लेकिन एक इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप में प्रकाश किरणों की भूमिका एक विशेष स्रोत द्वारा उत्सर्जित इलेक्ट्रॉनों की एक किरण द्वारा निभाई जाती है - एक इलेक्ट्रॉन बंदूक। इलेक्ट्रॉनों एक चुंबकीय कंडेनसर लेंस में आते हैं। आप इलेक्ट्रॉनों पर ध्यान केंद्रित करने के लिए ग्लास लेंस या दर्पण का उपयोग नहीं कर सकते, क्योंकि ग्लास इलेक्ट्रॉनों के लिए अभेद्य है। इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप में, एक परिपत्र चुंबकीय क्षेत्र एक लेंस के रूप में कार्य करता है, जिसके तहत इलेक्ट्रॉनों को विक्षेपित या केंद्रित किया जा सकता है। एक इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप के कंडेनसर लेंस का कार्य एक पारंपरिक माइक्रोस्कोप के कंडेनसर द्वारा किया जाता है - एक वस्तु पर एक बिंदु पर एक इलेक्ट्रॉन बीम का अभिसरण। ऑब्जेक्ट से गुजरने के बाद, इलेक्ट्रॉन ऑब्जेक्ट लेंस में प्रवेश करते हैं, जो फिर से डायवर्जिंग बीम को केंद्रित करता है और ऑब्जेक्ट की पहली मध्यवर्ती छवि देता है। एक चुंबकीय प्रोजेक्टर (एक ऐपिस लेंस के फ़ंक्शन के समान एक प्रक्षेपण लेंस) एक फ्लोरोसेंट स्क्रीन पर एक वस्तु की छवि का अंतिम आवर्धन देता है - जस्ता सल्फाइड या खनिज विलेमाइट की एक पतली परत के साथ कवर एक धातु की प्लेट। जब इलेक्ट्रॉन बीम स्क्रीन से टकराते हैं, तो इस परत का प्रत्येक कण चमकने लगता है; एक फोटोग्राफिक प्लेट के साथ स्क्रीन की जगह, ऑब्जेक्ट की छवि को फोटो खींचा जा सकता है।

आज तीन प्रकार के इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप हैं: ट्रांसमिशन (ट्रांसमिशन), स्कैनिंग और हाई वोल्टेज इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप। उत्तरार्द्ध में, इलेक्ट्रॉनों का उच्च त्वरण उन्हें अपेक्षाकृत मोटे वर्गों (1 ... 5 माइक्रोन) से गुजरने की अनुमति देता है, इस प्रकार संरचनाओं की त्रि-आयामी छवि प्राप्त करता है, जो ऑब्जेक्ट के अध्ययन की सुविधा प्रदान करता है। स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप एक वस्तु की सतह की राहत छवि प्रदान करते हैं। इन उपकरणों की रिज़ॉल्यूशन सतह "ट्रांसमिशन प्रकार" इलेक्ट्रॉन सूक्ष्मदर्शी की तुलना में बहुत कम है।

इलेक्ट्रॉन सूक्ष्म अध्ययन की तैयारी विशेष ग्रिड पर रखी जाती है, जिस पर सबसे पतला सेलूलोज़ या प्लास्टिक फिल्म लागू होती है - एक सब्सट्रेट। किसी वस्तु के विपरीत को बढ़ाने के लिए, इसे वाष्प के रूप में भारी धातुओं (क्रोमियम, सोना, पैलेडियम) के साथ छिड़का जाता है या विपरीत एजेंटों (फॉस्फोरिक-टंगस्टिक एसिड) के साथ इलाज किया जाता है।

परीक्षण प्रश्न

1. सूक्ष्मजीवविज्ञानी प्रयोगशाला में काम करते समय किन नियमों का पालन करना चाहिए?

2. माइक्रोबायोलॉजिकल प्रयोगशाला की व्यवस्था कैसे की जाती है?

3. माइक्रोबायोलॉजी प्रयोगशाला में इसका उपयोग किस मुख्य उपकरण के लिए और किस उद्देश्य से किया जाता है?

4. सूक्ष्मजीवविज्ञानी प्रयोगशाला में उपयोग किए जाने वाले मुख्य उपकरणों और बर्तनों की सूची बनाएं। उनका उद्देश्य क्या है?

5. आप किस प्रकार के प्रकाश सूक्ष्मदर्शी जानते हैं कि वे किस लिए हैं?

6. प्रकाश माइक्रोस्कोप में कौन से भाग होते हैं?

7. माइक्रोस्कोप का यांत्रिक भाग क्या है?

8. मैक्रो और माइक्रोमीटर स्क्रू का उद्देश्य क्या है? उनका उपयोग कैसे करें?

9. माइक्रोस्कोप के ऑप्टिकल सिस्टम की विशेषताएं क्या हैं, इसमें कौन से हिस्से शामिल हैं?

10. शुष्क और विसर्जन लेंस क्या हैं?

11. तैयारी की रोशनी की डिग्री को कैसे विनियमित करें?

12. दर्पण एक तरफ सपाट और दूसरे पर अवतल क्यों है? दर्पण कब और क्या उपयोग किया जाता है?

13. ऐपिस की संरचना क्या है, और इसका उद्देश्य क्या है?

14. "माइक्रोस्कोप आवर्धन" और "माइक्रोस्कोप रिज़ॉल्यूशन" शब्द का क्या अर्थ है, और उन्हें कैसे परिभाषित किया जा सकता है?

15. जैविक माइक्रोस्कोप के साथ काम करने के लिए बुनियादी नियमों की सूची बनाएं।

16. सूखे लेंस के साथ स्लाइड की माइक्रोस्कोपी के लिए क्या प्रक्रिया है?

17. विसर्जन के साथ काम करने के नियमों और प्रक्रियाओं को सूचीबद्ध करें
लेंस।

18. माइक्रोस्कोपी के कौन से तरीके हैं, आप जानते हैं कि उनकी विशेषताएं क्या हैं?

19. चरण विपरीत माइक्रोस्कोपी की विधि किस पर आधारित है?

20. एक चरण कंट्रास्ट डिवाइस में क्या होता है?

21. "ल्यूमिनोरेंस", "फ्लोरोक्रोमेस" शब्द का क्या अर्थ है? आप किस प्रकार के ल्यूमिनेंस को जानते हैं?

22. ल्यूमिनसेंट माइक्रोस्कोपी विधि के क्या फायदे हैं?

23. डार्क-फील्ड माइक्रोस्कोपी की विधि किस घटना से गुजरती है? इस विधि का उद्देश्य क्या है?

24. इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप के उपकरण की विशेषताएं क्या हैं और यह कैसे काम करता है?

साहित्य

1. असोनोव, एन.आर. सूक्ष्म जीव विज्ञान पर कार्यशाला / एन.आर. Assonov। - एम।: एग्रोप्रोमिज़दैट, 1988 ।-- 155 पी।

2. बोरिसोव, एलबी माइक्रोबायोलॉजी / एल.बी में प्रयोगशाला अध्ययन के लिए गाइड। बोरिसोव [और अन्य]। - एम ।: चिकित्सा, 1984 ।-- 256 पी।

3. ग्रेडोवा, एन.बी. सामान्य सूक्ष्म जीव विज्ञान पर प्रयोगशाला कार्यशाला / एन.बी. ग्रेडोवा [और अन्य]। - एम ।: डीली प्रिंट, 2001 ।-- 131 पी।

4. लेरीना, आई.वी. माइक्रोबायोलॉजी / आई.वी. में प्रयोगशाला का काम। लेरीना, ए.आई. Pedenko। - एम ।: अर्थशास्त्र, 1986 ।-- 158 पी।

5. मर्मुज़ोवा, एल.वी. खाद्य उद्योग में सूक्ष्म जीव विज्ञान, स्वच्छता और स्वच्छता के मूल तत्व। - एम।: प्रोऑब्रिज़डेट, 2001 ।-- 136 पी।

6. नेत्रुसोव ए.आई. सूक्ष्म जीव विज्ञान पर कार्यशाला / ए.आई. नेट्रसोव [और अन्य]। - एम ।: अकादमी, 2005 ।-- 608 पी।

7. प्रोज़ोर्किना, एन.वी. माइक्रोबायोलॉजी, वायरोलॉजी और इम्यूनोलॉजी / एन.वी. प्रोज़ोर्किना, एल.ए. Rubashkin। - रोस्तोव एन / ए ।: फीनिक्स, 2002 ।-- 416 पी।

8. टेपर, ई। ज़ेड। माइक्रोबायोलॉजी / ई.जेड पर कार्यशाला। टेपर, वी.के. शिलनिकोवा, जी.आई. Pereverzeva। - एम ।: बस्टर्ड, 2004 ।-- 256 पी।

9. त्रुशीना, टी.पी. व्यापार में सूक्ष्म जीव विज्ञान, स्वच्छता और स्वच्छता / टी.पी. Trushin। - रोस्तोव एन / ए ।: फीनिक्स, 2000 ।-- 320 पी।

10. श्लेगल, जी। जनरल माइक्रोबायोलॉजी / जी। श्लेगल। - एम ।: मीर, 1987 ।-- 567 पी।

माइक्रोबायोलॉजी में: सूक्ष्मजीव डिजाइन और जीवित सूक्ष्मजीवों की माइक्रोस्कोपी के लिए बुनियादी तकनीक

1 विभिन्न प्रकार के माइक्रोस्कोपी की विशेषताएं

2 एक उज्ज्वल क्षेत्र माइक्रोस्कोप का निर्माण

3 विसर्जन लेंस के साथ काम करने के लिए नियम

4 जीवित सूक्ष्मजीवों की माइक्रोस्कोपी के लिए तकनीक

1 विभिन्न प्रकार के माइक्रोस्कोपी की विशेषताएं

माइक्रोस्कोपी के मुख्य कार्य निम्नानुसार हैं:

विभिन्न सामग्रियों में सूक्ष्मजीवों की पहचान।

एक नमूने में सूक्ष्मजीवों की तम्बू संबंधी पहचान।

सूक्ष्मजीवों की कुछ रूपात्मक विशेषताओं और संरचनाओं का अध्ययन (उदाहरण के लिए, कैप्सूल, फ्लैगेला, आदि)।

उपनिवेशों और शुद्ध संस्कृतियों से सना हुआ स्मीयरों का अध्ययन।

आज, सबसे अधिक उपयोग प्रकाश माइक्रोस्कोपी है।

हल्की माइक्रोस्कोपी 2-3 हजार गुना तक एक आवर्धन, एक जीवित वस्तु का एक रंग और चलती छवि, एक ही वस्तु के माइक्रोसिनेम और दीर्घकालिक अवलोकन की संभावना, इसकी गतिशीलता और रसायन विज्ञान का आकलन। एक प्रकाश सूक्ष्मदर्शी में एक छवि इस तथ्य के कारण बनती है कि एक वस्तु और इसकी विभिन्न संरचनाएं अलग-अलग तरंग दैर्ध्य (अवशोषण विपरीत) के साथ प्रकाश को अवशोषित करती हैं या प्रकाश तरंग के चरण में परिवर्तन के कारण जब प्रकाश एक वस्तु (चरण विपरीत) से गुजरता है।

किसी भी माइक्रोस्कोप की मुख्य विशेषताएं संकल्प और कंट्रास्ट हैं। संकल्प न्यूनतम दूरी है जिस पर माइक्रोस्कोप द्वारा दो बिंदुओं को अलग-अलग दिखाया गया है। सबसे अच्छी दृष्टि के लिए मानव आंख में 0.2 मिमी का एक संकल्प है। छवि विपरीतछवि और पृष्ठभूमि की चमक के बीच अंतर है। यदि यह अंतर 3-4% से कम है, तो इसे आंख के साथ या फोटोग्राफिक प्लेट के साथ कैप्चर नहीं किया जा सकता है; तब छवि अदृश्य रहेगी, भले ही माइक्रोस्कोप उसके विवरण को हल करता हो। कंट्रास्ट वस्तु के गुणों से प्रभावित होता है, जो पृष्ठभूमि की तुलना में चमकदार प्रवाह को बदलता है, और प्रकाशिकी की क्षमता से बीम के गुणों में परिणामी अंतर को पकड़ता है। प्रकाश सूक्ष्मदर्शी की क्षमताएं प्रकाश की तरंग प्रकृति द्वारा सीमित होती हैं। प्रकाश के भौतिक गुणों - रंग (तरंग दैर्ध्य), चमक (तरंग आयाम), चरण, घनत्व और तरंग प्रसार की दिशा वस्तु के गुणों के आधार पर बदलती है। इन अंतरों का उपयोग इसके विपरीत बनाने के लिए आधुनिक सूक्ष्मदर्शी में किया जाता है।

सूक्ष्मदर्शी आवर्धन पलक बढ़ाई उद्देश्य बार के आवर्धन के उत्पाद के रूप में परिभाषित किया गया है। विशिष्ट अनुसंधान सूक्ष्मदर्शी में 10 की एक भौंह का आवर्धन होता है, और 10, 40 और 100 के वस्तुनिष्ठ आवर्धन होते हैं। तदनुसार, ऐसे सूक्ष्मदर्शी का आवर्धन 100 से 1000 तक होता है। कुछ सूक्ष्मदर्शी में 2000 तक का आवर्धन होता है। इससे भी उच्चतर विकिरण का कोई मतलब नहीं है, क्योंकि संकल्प में सुधार नहीं होता है। इसके विपरीत, छवि गुणवत्ता बिगड़ती है।

संख्यात्मक छिद्र एक ऑप्टिकल प्रणाली के संकल्प को व्यक्त करने के लिए उपयोग किया जाता है। संख्यात्मक एपर्चर लेंस का ऑप्टिकल "कवरेज" है और लेंस में प्रकाश की मात्रा को मापने का एक उपाय है। बैरल पर लेंस के संख्यात्मक एपर्चर को इंगित किया जाता है। कंडेनसर एपर्चर उद्देश्य के संख्यात्मक एपर्चर से मेल खाना चाहिए। हवा से सटे किसी भी लेंस का संख्यात्मक एपर्चर (यानी, "ड्राई सिस्टम") 1 से अधिक नहीं हो सकता है, क्योंकि वायु का अपवर्तनांक 1. है। फ्रंटल ऑब्जेक्टिव लेंस और स्लाइड के बीच माध्यम के अपवर्तक सूचकांक को बढ़ाकर संख्यात्मक एपर्चर को बढ़ाया जा सकता है। इसे कांच के अपवर्तक सूचकांक (1.5) के करीब लाना। इसके लिए, हवा के अपवर्तक सूचकांक की तुलना में एक अपवर्तक सूचकांक के साथ तरल की एक बूंद, उदाहरण के लिए, पानी की एक बूंद (n \u003d 1.3), ग्लिसरीन (n \u003d 1.4), या देवदार (विसर्जन) तेल (एन), उद्देश्य के ललाट लेंस और अध्ययन के तहत वस्तु के बीच रखा गया है। \u003d 1.5)। उपरोक्त प्रत्येक तरल पदार्थ के लिए, विशेष लेंस का उत्पादन किया जाता है, जिसे विसर्जन लेंस कहा जाता है।

हल्की माइक्रोस्कोपीसामान्य शामिल हैं ट्रांसमिशन माइक्रोस्कोपी (प्रकाश, अंधेरे क्षेत्र), चरण विपरीत, ल्यूमिनेन्सेंट। हाल ही में, माइक्रोस्कोपी और माइक्रोस्कोप के अन्य तरीकों को विकसित किया गया है - उलट देना तथा confocal लेजर स्कैनिंग माइक्रोस्कोपी।

ब्राइटफील्ड माइक्रोस्कोपी आपको चमकीले क्षेत्र में संचारित प्रकाश में वस्तुओं का पता लगाने की अनुमति देता है। इस प्रकार की माइक्रोस्कोपी को आकृति विज्ञान, कोशिकाओं के आकार, उनकी सापेक्ष स्थिति, कोशिकाओं के संरचनात्मक संगठन और अन्य विशेषताओं का अध्ययन करने के लिए डिज़ाइन किया गया है। प्रकाश सूक्ष्मदर्शी में अधिकतम 0.2 माइक्रोन का रिज़ॉल्यूशन होता है, जो 1500x तक उच्च-परिशुद्धता माइक्रोस्कोप आवर्धन प्रदान करता है।

चरण विपरीत माइक्रोस्कोपी आपको अधिक स्पष्ट रूप से जीवित पारदर्शी वस्तुओं का निरीक्षण करने की अनुमति देता है जो अपवर्तक सूचक माध्यम के अपवर्तक सूचकांकों के करीब हैं। एक चरण-विपरीत माइक्रोस्कोप की कार्रवाई चरण शिफ्ट (जब एपर्चर डायाफ्राम में एक चरण अंगूठी का उपयोग करके) के कारण छवि विमान में प्रकाश के हस्तक्षेप पर आधारित होती है। चरण विपरीत माइक्रोस्कोपी में, रिवर्स ऑप्टिक्स के साथ जैविक सूक्ष्मदर्शी - उल्टे माइक्रोस्कोप - अक्सर उपयोग किए जाते हैं। इन माइक्रोस्कोप में सबसे नीचे लेंस और सबसे ऊपर कंडेंसर होता है।

चरण विपरीत माइक्रोस्कोपी का उपयोग कोशिकाओं के आकार, आकार, सापेक्ष स्थिति, उनकी गतिशीलता, प्रजनन, सूक्ष्मजीवों के बीजाणु के अंकुरण आदि का अध्ययन करने के लिए किया जाता है। इस माइक्रोस्कोपी विधि के उपयोग के लिए धन्यवाद, जीवित अस्थिर सूक्ष्मजीवों के विपरीत तेजी से होते हैं और वे एक प्रकाश पृष्ठभूमि (सकारात्मक चरण विपरीत) के खिलाफ अंधेरे दिखते हैं ) या एक अंधेरे पृष्ठभूमि पर प्रकाश (नकारात्मक चरण विपरीत)।

डार्क फील्ड माइक्रोस्कोपी प्रकाश की तिरछी किरणों के साथ किसी वस्तु की रोशनी के आधार पर। इस प्रकाश में, किरणें लेंस से नहीं टकराती हैं, इसलिए देखने का क्षेत्र अंधेरा दिखता है। तैयारी की ऐसी रोशनी एक विशेष अंधेरे-क्षेत्र कंडेनसर का उपयोग करके प्राप्त की जाती है। डार्क फील्ड माइक्रोस्कोपी एक बहुत ही सरल लेकिन प्रभावी तकनीक है और अच्छी तरह से इमेजिंग लाइव और अनस्टॉल किए गए जैविक नमूनों के लिए अनुकूल है। स्थापना में आसानी को देखते हुए, छवि गुणवत्ता बहुत अच्छी है।

एक अंधेरे क्षेत्र में माइक्रोस्कोपी के साथ, आप वस्तुओं को देख सकते हैं, जिसकी परिमाण को एक माइक्रोमीटर के सौवें हिस्से में मापा जाता है, जो एक पारंपरिक उज्ज्वल क्षेत्र माइक्रोस्कोप के संकल्प से परे है। हालांकि, एक अंधेरे क्षेत्र में वस्तुओं का अवलोकन किसी को केवल कोशिकाओं की रूपरेखा का अध्ययन करने की अनुमति देता है और उनकी आंतरिक संरचना की जांच करने का अवसर प्रदान नहीं करता है।

Luminescence (प्रतिदीप्ति) माइक्रोस्कोपी अदृश्य पराबैंगनी या नीली रोशनी से रोशन होने पर चमकाने के लिए कई जैविक पदार्थों या कुछ रंगों की क्षमता के आधार पर। पराबैंगनी प्रकाश का उपयोग करते समय, माइक्रोस्कोप का संकल्प 0.1 माइक्रोन तक पहुंच सकता है।

सूक्ष्मजीवों की कोशिकाओं को विशेष रंजक - फ्लूरोक्रोमेस (एक्रिडिन ऑरेंज, प्रिमुलिन, रोडामाइन, आदि) के साथ अत्यधिक पतला जलीय घोल: 1: 500-1: 100,000 के रूप में व्यवहार किया जाता है। इस तरह के समाधान थोड़े से विषैले होते हैं, जिससे एक अक्षुण्ण कोशिका का अध्ययन करना संभव हो जाता है। रासायनिक संरचना के आधार पर, कोशिका संरचना अलग-अलग तरीकों से अलग-अलग डिग्री और ल्यूमिनस को रंगों को अवशोषित करती है। इसके अलावा, फ्लुओरोक्रोम जीवित और मृत कोशिकाओं द्वारा समान रूप से adsorbed नहीं हैं। यह साइटोलॉजिकल और इम्यूनोलॉजिकल अध्ययनों के लिए इस प्रकार की माइक्रोस्कोपी के उपयोग की अनुमति देता है, सेल व्यवहार्यता का निर्धारण आदि।

इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी आपको उन वस्तुओं का पता लगाने की अनुमति देता है जो प्रकाश या पराबैंगनी किरणों का उपयोग करके हल नहीं की जाती हैं। सिद्धांत रूप में संकल्प इलेक्ट्रान सम्प्रेषित दूरदर्शी 0.002 एनएम है; आधुनिक का वास्तविक संकल्प इलेक्ट्रॉन सूक्ष्मदर्शी आ रहा है 0.1 एनएम। व्यवहार में, जैविक वस्तुओं के लिए संकल्प 2 एनएम तक पहुंच जाता है।

इलेक्ट्रॉनों की लघु तरंग दैर्ध्य वस्तुओं को आकार में 0.5-1.0 एनएम तक भेद करना संभव बनाता है। आधुनिक इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप में, 5000-200000 का आवर्धन स्क्रीन पर प्राप्त किया जाता है। इस तरह के एक उच्च संकल्प के लिए, जीवाणु संरचनाओं के विवरण को प्रकट करना संभव हो जाता है। उदाहरण के लिए, भारी धातु के लवणों को स्प्रे करके, जो जीवाणु को घेरते हैं और सतह की अनियमितताओं में घुस जाते हैं, इलेक्ट्रॉनों के अंतर में देरी के कारण इसके विपरीत प्राप्त होता है। इस प्रभाव को कहा जाता है नकारात्मक विपरीत .

एक इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप, जिसमें नमूने के माध्यम से इलेक्ट्रॉनों के पारित होने (संचरण) द्वारा एक छवि बनाई जाती है, कहा जाता है पारभासी (या संचरण) ).

में स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप (स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (SEM) एक इलेक्ट्रॉन बीम जल्दी से नमूने की सतह को स्कैन करता है, जिससे विकिरण चमकदार स्क्रीन पर एक छवि बनाता है। SEM को एक उच्च रिज़ॉल्यूशन, एक विस्तृत श्रेणी के परिमाण (100,000 और अधिक तक), एक बड़ी ध्यान केंद्रित गहराई (~ 100 माइक्रोन), और विभिन्न प्रकार के ऑपरेटिंग मोड की विशेषता है। एक स्कैनिंग माइक्रोस्कोप सतहों की एक तस्वीर प्रदान करता है और तीन आयामी छवि प्राप्त करने की अनुमति देता है।

लेजर confocal माइक्रोस्कोपी एक स्पष्ट छवि प्राप्त करना और पूरे क्षेत्र में ध्यान केंद्रित करने वाली वस्तुओं का निरीक्षण करना संभव बनाता है। यह विधि केवल स्व-चमकदार (फ्लोरोसेंट) वस्तुओं का अध्ययन करने के लिए उपयुक्त है। जब कंप्यूटर प्रौद्योगिकी के साथ संयुक्त, अध्ययन के तहत वस्तु का स्थानिक पुनर्निर्माण संभव है। एक कन्फोकल लेजर स्कैनिंग माइक्रोस्कोप में, अलग-अलग (405, 488, 532, 635 एनएम) लेजर के विकिरण और स्थानिक निस्पंदन से एक केंद्रित लेजर बीम के साथ स्कैन करके आंतरिक वर्गों की छवियां बनाई जाती हैं। निकट-क्षेत्र स्कैनिंग माइक्रोस्कोपी (एमबीएमएस) के उपयोग के साथ, उच्च रिज़ॉल्यूशन प्राप्त किया जाता है। एसएमबीपी के साथ प्राप्त सबसे छोटा तत्व आकार 0.4 एनएम के हल्के तरंग दैर्ध्य पर 20 एनएम है। नियंत्रित तत्व की छवि में कोई विवर्तन या हस्तक्षेप प्रभाव नहीं होते हैं, जो इसकी सीमाओं को निर्धारित करना मुश्किल बनाते हैं। एक परमाणु बल माइक्रोस्कोप की तुलना में एसएमबीपी की एक विशिष्ट विशेषता नियंत्रित नमूने की सतह की ऑप्टिकल विशेषताओं, प्रकाश की तरंग दैर्ध्य, लुमिनेन्सेंस, आदि के प्रति संवेदनशीलता है।

कंप्यूटर हस्तक्षेप माइक्रोस्कोपी जब आप उपकुलर संरचनाओं को देखते हुए एक उच्च-विपरीत छवि प्राप्त करने की अनुमति देता है; कई मामलों में इसका उपयोग जीवित कोशिकाओं का अध्ययन करने के लिए किया जाता है। एक स्वचालित हस्तक्षेप माइक्रोस्कोप के संचालन का सिद्धांत एक संदर्भ दर्पण से प्रतिबिंबित लेजर विकिरण के प्रकाश बीम के हस्तक्षेप पर आधारित है और एक दर्पण है जिस पर मापा चरण वस्तु रखी गई है। सैद्धांतिक रूप से, अधिकतम प्राप्य संकल्प औसत 0.2 एनएम पर हो सकता है, व्यवहार में यह 0.4 माइक्रोन है।

एक्स-रे कंप्यूटेड टोमोग्राफी (आरसीटी), पॉज़िट्रॉन एमिशन टोमोग्राफी (PAT) आपको सामान्य परिस्थितियों में वस्तुओं का निरीक्षण करने की अनुमति देता है।

सूक्ष्म शोध विधियाँ विशेष उपकरणों का उपयोग करके वस्तुओं की एक किस्म का अध्ययन करने के तरीके हैं। यह हमें पदार्थों और जीवों की संरचना पर विचार करने की अनुमति देता है, जिसकी परिमाण मानव भूलभुलैया की संकल्प शक्ति की सीमाओं से परे है। लेख में, हम सूक्ष्म अनुसंधान विधियों का एक संक्षिप्त विश्लेषण करेंगे।

सामान्य जानकारी

सूक्ष्म परीक्षा के आधुनिक तरीके विभिन्न विशेषज्ञों द्वारा उनके अभ्यास में उपयोग किया जाता है। उनमें वायरोलॉजिस्ट, साइटोलॉजिस्ट, हेमटोलॉजिस्ट, मॉर्फोलॉजिस्ट और अन्य शामिल हैं। मुख्य विधियां लंबे समय से ज्ञात हैं। सबसे पहले, यह वस्तुओं को देखने का एक हल्का तरीका है। हाल के वर्षों में, अन्य तकनीकों को भी सक्रिय रूप से व्यवहार में लाया गया है। इस प्रकार, चरण-विपरीत, ल्यूमिनसेंट, हस्तक्षेप, ध्रुवीकरण, अवरक्त, पराबैंगनी, त्रिविम शोध विधि... वे सभी प्रकाश के विभिन्न गुणों पर आधारित हैं। इसके अलावा, व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है इलेक्ट्रॉन सूक्ष्म अनुसंधान के तरीके... ये विधियाँ आवेशित कणों के निर्देशित प्रवाह का उपयोग करके वस्तुओं को प्रदर्शित करने की अनुमति देती हैं। यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि इस तरह के अध्ययन तकनीकों का उपयोग न केवल जीव विज्ञान और चिकित्सा में किया जाता है। उद्योग में काफी लोकप्रिय है। यह अध्ययन जोड़ों के व्यवहार का मूल्यांकन करने, फ्रैक्चर की संभावना को कम करने और ताकत बढ़ाने के लिए प्रौद्योगिकियों का विकास करना संभव बनाता है।

प्रकाश के तरीके: विशेषता

ऐसा सूक्ष्मजीवों के अध्ययन के लिए सूक्ष्म विधियां और अन्य सुविधाएं विभिन्न उपकरणों पर आधारित हैं। इसमें एक महत्वपूर्ण कारक बीम की दिशा, वस्तु की विशेषताएं हैं। उत्तरार्द्ध, विशेष रूप से, पारदर्शी या अपारदर्शी हो सकता है। ऑब्जेक्ट के गुणों के अनुसार, प्रकाश प्रवाह के भौतिक गुण - चमक और रंग, आयाम और तरंग दैर्ध्य, विमान, चरण और लहर प्रसार की दिशा के कारण। इन विशेषताओं के उपयोग पर विभिन्न लोगों का निर्माण किया जाता है।

विशेषता

प्रकाश के माध्यम से अध्ययन के लिए, आमतौर पर वस्तुएं रंगीन होती हैं। यह आपको इन या उनके गुणों की पहचान करने और उनका वर्णन करने की अनुमति देता है। इस मामले में, यह आवश्यक है कि ऊतक तय किए गए थे, क्योंकि धुंधला हो जाना निश्चित रूप से मारे गए कोशिकाओं में कुछ संरचनाओं को प्रकट करेगा। जीवित तत्वों में, डाई को साइटोप्लाज्म में एक रिक्तिका के रूप में पृथक किया जाता है। यह संरचनाओं पर पेंट नहीं करता है। लेकिन जीवित सूक्ष्मदर्शी से भी सूक्ष्म वस्तुओं की जांच की जा सकती है। इसके लिए सीखने का एक महत्वपूर्ण तरीका उपयोग किया जाता है। ऐसे मामलों में, एक अंधेरे क्षेत्र कंडेनसर का उपयोग किया जाता है। यह एक प्रकाश सूक्ष्मदर्शी में बनाया गया है।

अप्राप्त वस्तुओं की जांच करना

यह चरण विपरीत माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके किया जाता है। यह विधि वस्तु की विशेषताओं के अनुसार बीम विवर्तन पर आधारित है। एक्सपोज़र की प्रक्रिया में, चरण और तरंग दैर्ध्य में परिवर्तन नोट किया जाता है। माइक्रोस्कोप उद्देश्य में एक अर्धचालक प्लेट है। जीवित या निश्चित, लेकिन रंगीन वस्तुएं नहीं, उनकी पारदर्शिता के कारण, किरण के रंग और आयाम को शायद ही कभी बदलते हैं, जिससे वे तरंग चरण में केवल एक बदलाव को भड़काते हैं। लेकिन एक ही समय में, वस्तु से गुजरते हुए, प्रकाश प्रवाह प्लेट से विक्षेपित होता है। नतीजतन, वस्तु के माध्यम से प्रेषित किरणों और प्रकाश की पृष्ठभूमि में प्रवेश करने वालों के बीच तरंग दैर्ध्य में अंतर प्रकट होता है। एक निश्चित मूल्य पर, एक दृश्य प्रभाव उत्पन्न होता है - एक प्रकाश पृष्ठभूमि के खिलाफ एक अंधेरे वस्तु स्पष्ट रूप से दिखाई देगी, या इसके विपरीत (चरण प्लेट की विशेषताओं के अनुसार)। इसे प्राप्त करने के लिए, अंतर कम से कम 1/4 तरंग दैर्ध्य का होना चाहिए।

गोद लेने का तरीका

हस्तक्षेप तकनीक

ये आमतौर पर चरण विपरीत के समान समस्याओं को हल करते हैं। हालांकि, बाद के मामले में, विशेषज्ञ केवल वस्तुओं के आकृति का निरीक्षण कर सकते हैं। हस्तक्षेप का सूक्ष्म अनुसंधान की विधियां आप तत्वों को निर्धारित करने के लिए, उनके भागों का अध्ययन करने की अनुमति देते हैं। यह प्रकाश किरण के द्विभाजन के कारण संभव है। एक धारा वस्तु के कण से होकर गुजरती है, और दूसरी - अतीत से। माइक्रोस्कोप की भौं में, वे अभिसरण और हस्तक्षेप करते हैं। परिणामी चरण अंतर को विभिन्न सेलुलर संरचनाओं के द्रव्यमान द्वारा निर्धारित किया जा सकता है। दिए गए के साथ अपने अनुक्रमिक माप के साथ, अधूरा ऊतकों और जीवित वस्तुओं की मोटाई, उनमें प्रोटीन की सामग्री, शुष्क पदार्थ और पानी की एकाग्रता आदि को स्थापित करना संभव है। प्राप्त आंकड़ों के अनुसार, विशेषज्ञ झिल्ली पारगम्यता, एंजाइम गतिविधि, और सेलुलर चयापचय का अप्रत्यक्ष रूप से मूल्यांकन करने में सक्षम हैं।

ध्रुवीकरण

इसे निकोलस प्रिज्म या फिल्मी पोलेरॉइड का उपयोग करके किया जाता है। उन्हें तैयारी और प्रकाश स्रोत के बीच रखा गया है। ध्रुवीकरण सूक्ष्म जीव विज्ञान में सूक्ष्म अनुसंधान विधिआपको विषम गुणों वाली वस्तुओं का अध्ययन करने की अनुमति देता है। आइसोट्रोपिक संरचनाओं में, प्रकाश प्रसार की गति चुने हुए विमान पर निर्भर नहीं करती है। इस मामले में, अनिसोट्रोपिक प्रणालियों में, वस्तु की अनुप्रस्थ या अनुदैर्ध्य धुरी के साथ प्रकाश की दिशा के अनुसार गति में परिवर्तन होता है। यदि संरचना के साथ अपवर्तन का मूल्य अनुप्रस्थ एक के साथ अधिक से अधिक होता है, तो एक सकारात्मक द्विभाजन बनाया जाता है। यह कई जैविक वस्तुओं के लिए विशिष्ट है जो एक सख्त आणविक अभिविन्यास प्रदर्शित करते हैं। वे सभी अनिसोट्रोपिक हैं। इस श्रेणी में, विशेष रूप से, मायोफिब्रिल्स, न्यूरोफिब्रिल्स, सिलिया युक्त एपिथेलियम, कोलेजन फाइबर और अन्य शामिल हैं।

ध्रुवीकरण मूल्य

किरण अपवर्तन की प्रकृति की तुलना और वस्तु का अनिसोट्रॉपी सूचकांक संरचना के आणविक संगठन का मूल्यांकन करना संभव बनाता है। ध्रुवीकरण विधि विश्लेषण के हिस्टोलॉजिकल तरीकों में से एक के रूप में कार्य करती है, इसका उपयोग साइटोलॉजी आदि में किया जाता है। प्रकाश में, आप रंगीन वस्तुओं का अध्ययन नहीं कर सकते हैं। ध्रुवीकरण विधि से ऊतक वर्गों की तैयारी - बिना रुके और अधूरे - देशी - अध्ययन करना संभव हो जाता है।

Luminescent तकनीक

वे स्पेक्ट्रम के नीले-वायलेट भाग में या यूवी किरणों में चमक देने के लिए कुछ वस्तुओं के गुणों पर आधारित हैं। कई पदार्थ, उदाहरण के लिए प्रोटीन, कुछ विटामिन, कोएंजाइम, ड्रग्स, प्राथमिक (आंतरिक) ल्यूमिनेंस से संपन्न होते हैं। फ़्लोरोक्रोमेस, विशेष रंजक को जोड़ने पर अन्य वस्तुएं चमकने लगती हैं। ये योजक चुनिंदा या अलग-अलग सेलुलर संरचनाओं या रासायनिक यौगिकों में वितरित किए जाते हैं। इस संपत्ति ने हिस्टोकेमिकल के लिए ल्यूमिनेसेंस माइक्रोस्कोपी के उपयोग के लिए आधार बनाया और

उपयोग के क्षेत्र

इम्यूनोफ्लोरेसेंस का उपयोग करते हुए, विशेषज्ञ वायरल एंटीजन का पता लगाते हैं और अपनी एकाग्रता स्थापित करते हैं, वायरस, एंटीबॉडी और एंटीजन, हार्मोन, विभिन्न चयापचय उत्पादों की पहचान करते हैं, और इसी तरह। इस संबंध में, दाद, कण्ठमाला, वायरल हेपेटाइटिस, इन्फ्लूएंजा और अन्य संक्रमणों के निदान में, फ्लोरोसेंट सामग्री अनुसंधान के तरीके। सूक्ष्म इम्यूनोफ्लोरेसेंट विधि आपको घातक ट्यूमर को पहचानने की अनुमति देती है, जिससे दिल के दौरे के शुरुआती चरणों में दिल में इस्केमिक क्षेत्रों का निर्धारण किया जा सके।

पराबैंगनी प्रकाश का उपयोग करना

यह जीवित कोशिकाओं, सूक्ष्मजीवों या स्थिर लेकिन अनियंत्रित ऊतकों में शामिल कई पदार्थों की क्षमता पर आधारित है जो एक निश्चित तरंग दैर्ध्य की यूवी किरणों को अवशोषित करने के लिए दृश्य प्रकाश में पारदर्शी होते हैं। यह विशिष्ट है, विशेष रूप से, उच्च आणविक भार यौगिकों के लिए। इनमें प्रोटीन, एरोमैटिक एसिड (मिथाइलैलेनिन, ट्रिप्टोफैन, टायरोसिन, आदि), न्यूक्लिक एसिड, पिरामिड और प्यूरीन बेस शामिल हैं। पराबैंगनी माइक्रोस्कोपी इन यौगिकों के स्थान और मात्रा को स्पष्ट करना संभव बनाता है। जीवित वस्तुओं का अध्ययन करते समय, विशेषज्ञ अपनी महत्वपूर्ण गतिविधि की प्रक्रियाओं में परिवर्तन का निरीक्षण कर सकते हैं।

इसके अतिरिक्त

इन्फ्रारेड माइक्रोस्कोपी का उपयोग उन वस्तुओं का अध्ययन करने के लिए किया जाता है जो प्रकाश और यूवी किरणों से अपारदर्शी होती हैं, जो उनकी संरचनाओं द्वारा 750-1200 एनएम की तरंग दैर्ध्य के साथ एक धारा को अवशोषित करती हैं। इस पद्धति का उपयोग करने के लिए, रासायनिक उपचार के लिए दवाओं को पूर्व-उजागर करने की आवश्यकता नहीं है। आमतौर पर, इन्फ्रारेड पद्धति का उपयोग नृविज्ञान, प्राणी विज्ञान और अन्य जैविक उद्योगों में किया जाता है। दवा के रूप में, इस पद्धति का उपयोग मुख्य रूप से नेत्र विज्ञान और तंत्रिका विज्ञान में किया जाता है। स्टीरियोस्कोपिक माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके वॉल्यूमेट्रिक ऑब्जेक्ट का अध्ययन किया जाता है। उपकरण का डिज़ाइन विभिन्न कोणों से बाईं और दाईं आंखों के अवलोकन की अनुमति देता है। अपारदर्शी वस्तुओं की अपेक्षाकृत कम आवर्धन (120 बार से अधिक नहीं) पर जांच की जाती है। स्टीरियोस्कोपिक विधियों का उपयोग माइक्रोसर्जरी, पैथोमोर्फोलॉजी और फोरेंसिक चिकित्सा में किया जाता है।

इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी

इसका उपयोग मैक्रोमोलेक्यूलर और सबसकुलर स्तरों पर कोशिकाओं और ऊतकों की संरचना का अध्ययन करने के लिए किया जाता है। अनुसंधान के क्षेत्र में गुणात्मक छलांग लगाने की अनुमति दी। इस पद्धति का व्यापक रूप से जैव रसायन, ऑन्कोलॉजी, वायरोलॉजी, आकृति विज्ञान, प्रतिरक्षा विज्ञान, आनुवंशिकी और अन्य उद्योगों में उपयोग किया जाता है। उपकरणों के संकल्प में एक महत्वपूर्ण वृद्धि इलेक्ट्रॉनों के प्रवाह द्वारा प्रदान की जाती है जो एक निर्वात में विद्युत चुम्बकीय क्षेत्रों से गुजरती हैं। बाद में, विशेष लेंस के साथ बनाया जाता है। इलेक्ट्रॉनों में एक वस्तु की संरचनाओं से गुजरने की क्षमता होती है या विभिन्न कोणों पर विचलन के साथ उनसे परिलक्षित होता है। नतीजतन, डिवाइस के luminescent स्क्रीन पर एक डिस्प्ले बनाया जाता है। ट्रांसमिशन माइक्रोस्कोपी के साथ, एक प्लैनर छवि प्राप्त की जाती है, जिसमें स्कैनिंग होती है, क्रमशः, एक वॉल्यूमेट्रिक।

आवश्यक शर्तें

यह ध्यान देने योग्य है कि ऑब्जेक्ट इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपिक परीक्षा से गुजरने से पहले विशेष तैयारी से गुजरता है। विशेष रूप से, ऊतकों और जीवों के भौतिक या रासायनिक निर्धारण का उपयोग किया जाता है। अनुभागीय और बायोप्सी सामग्री, इसके अलावा, निर्जलित है, एपॉक्सी रेजिन में एम्बेडेड है, हीरे या कांच के चाकू से अल्ट्रा-पतली वर्गों में काटा जाता है। फिर उनके विपरीत और अध्ययन किया जाता है। एक स्कैनिंग माइक्रोस्कोप में वस्तुओं की सतहों की जांच की जाती है। ऐसा करने के लिए, उन्हें एक निर्वात कक्ष में विशेष पदार्थों के साथ छिड़का जाता है।