Netiešās hemaglutinācijas reakcija, rinda
(Netiešais hemaglutinācijas tests)

Antigēnu un antivielu atklāšanas metode, kuru pamatā ir eritrocītu spēja, kuras antigēnu vai antivielu virsmā ir saistīta ar homolonētu serumu vai atbilstošu antigēnu klātbūtni.

Kad antigēni tiek konstatēti, reakcija ir apzīmēta ar atpakaļgaitas pasīvo asinsspluatāciju - ROPGA (apgrieztā pasīvā asinsķermenīšu tests), un, kad antivielas tiek konstatētas - pasīvā asinsspluatācijas tests. Gredzens ir plaši izmantots, lai identificētu infekcijas seroloģiskos marķierus ar B hepatīta vīrusu, jo īpaši HBsAg un antivielām.

Pašlaik dažādas ražošanas metodes eritrocītu diagnosticum, kas atšķiras ar metodēm eritrocītu (izmantojot tanīna, glutārā aldehīda, hroma hlorīda, rivochet, uc), to sugu piederība (cilvēka, RAM, vistas, tītara uc), iespējas reakcijai formulējums (mikrotē tabletēs, testa caurulēs, kapilāros, uc) un rezultātu uzskaite (vizuāli un instrumentāli). Eritrocītu diagnosticums HBSAG un anti-HBS atklāšanai izsniedz daudzi uzņēmumi un uzņēmumi, kas atrodas mūsu valstī un ārzemēs.

Biežāk RF tiek veikts mikrotekcijas tabletēs, kurās testa seruma un kontroles paraugu atšķaidījumi ir iepriekš noteikti. Pēc eritrocītu diagnostikas un inkubācijas veikšanas tiek ņemti vērā reakcijas rezultāti. Pozitīvs ir paraugi, kuros notiek sarkano asins šūnu aglutinācija, ņemot vērā apgriezto "lietussargu". Ar negatīvu reakciju - sarkano asins šūnu apmesties apakšā akas formā gredzenu vai disku.

Lai apstiprinātu iegūto rezultātu specifiku, reakcija tiek noteikta kā "eksperimentāls" eritrocītu diagnosticums (I.E., eritrocīti, ko sensitizē antigēnu vai antivielas) un ar "kontroli" diagnostikums (I.E., eritrocīti nav jutīgi pret antigēnu vai antivielām). Pozitīvas reakcijas klātbūtne ar "kontroles" diagnostikas preparātu norāda uz viltus pozīcijas reakciju. Lai novērstu nespecifiskas reakcijas, testa serumu apstrādā ar ne-densitimized eritrocīti. Gredzena priekšnoteikums ir neitralizācijas reakcija, I.E. Apstiprinājuma tests.

Salīdzinot ar tādām metodēm kā RPG, VEF un RSK, netiešās hemaglutinācijas reakcija ir augstāka jutība (200 līdz 400 reizes). Tātad, HBsag RPGA var noteikt koncentrācijā 6-10 ng / ml. Reakcijas un izteiktu vienkāršība (20 - 30 minūtes) ir noteikusi šīs metodes plašu izmantošanu asins pārliešanas pakalpojumā, lai atklātu HBsAg.

Papildus eritrocītu diagnostikām ir izstrādāti diagnostikas preparāti HBSAG un anti-HBS noteikšanai, IgM klases (cietā fāzes versijas), HBEAG, hepatīta vīrusa antigēna un antivielu anti-NVS, tomēr visiem no tiem nav atrast pieteikumus praktiskā veselības aprūpē.

Aglutinācijas reakcija - ra (no latiem. Aglutmi- natio. - Līmēšana) - vienkārša reakcija, kurā korporatīvo antigēnu antivielas (baktērijas, eritrocīti vai citas šūnas, nešķīstošas \u200b\u200bdaļiņas ar antigēniem, kas adsorbē uz tiem, kā arī makromolekulārie agregāti). Tas notiek, piemēram, elektrolītu klātbūtnē, pievienojot izotonisku nātrija hlorīda šķīdumu.

Tiek izmantoti dažādi aglutinācijas reakcijas varianti: izvietoti, indikatīvie, netiešie utt. Aglutinācijas reakcija izpaužas kā pārslu vai nogulumu veidošanās

RA tika izmantots:

antivielu definīcijas pacientu asinīs serumā, piemēram, brucelozes laikā (Reakcija no Wright, Heddelsson), vēdera titulu un parathiphones (balss reakcija) un citas infekcijas slimības;

no pacienta piešķirtā cēloņsakarības definīcijas;

asins grupu definīcijas, izmantojot monoklonālās antivielas pret eritrocītu spirtiem.

Noteikt pacienta antivielas liktatbloķēta aglutinācijas reakcija: Pacients pievieno atšķaidīšanas atšķaidīšanu Diagnosticums (Nogalināto mikrobu klusums) un pēc dažām stundām tiek atzīmēts lielākais seruma atšķaidījums (seruma titrs), kurā noticis aglutinācija, t.I. Ādija tika izveidota.

Aglutinācijas raksturs un ātrums ir atkarīgs no antigēna un antivielu veida. Piemērs ir diagnostikas (O- un I-antigēnu) mijiedarbības funkcijas ar īpašām antivielām. Aglutinācijas S. reakcija O-diagnosticums (Baktērijas, kas nogalinātas ar apkuri, konservēts termostabils O-antigēns) Ir smalkgraudaina aglutinācijas veidā. Aglutinācijas reakcija ar H-Diagnosticum (baktērijas, kas nogalinātas formalīnā, kas saglabāja termoļūdens siksnas H-antigēnu) ir lielas un plūst ātrāk.

Ja tas ir nepieciešams, lai noteiktu patogēnu veltīta no pacienta, likt aptuvena aglutinācijas reakcija, Izmantojot diagnostikas antivielas (aglutinācijas serums), i.e., patogēna serotipi. Aptuvenā reakcija tiek veikta uz stikla slaida. Lai samazinātu diagnostikas aglutinācijas serumu atšķaidīšanā 1:10 vai 1:20, pievieno tīru kultūru patogēna veltīta no pacienta. Tālāk ir kontrole: seruma vietā tiek piemērots nātrija hlorīda šķīduma piliens. Kad sējmašīna ar serumu un mikrobiem no pārslains nogulsnes Atklāta reakcijas aglutinācija Testa mēģenēs ar pieaugošiem atšķaidījumiem aglutinācijas serumā, uz kuriem pievieno 2-3 pilienus apturēšanas līdzekļa. Aglutinācija tiek ņemta vērā no nogulsnes un šķidruma apgaismības pakāpe. Reakcija tiek uzskatīta par pozitīvu, ja aglutinācija tiek novērota vaislā, netālu no diagnostikas titra seruma titrs. Tajā pašā laikā vadības ierīces: serums, kas atšķaidīts ar izotonisku nātrija hlorīda šķīdumu, jābūt caurspīdīgam, mikrobu suspensijai tādā pašā šķīdumā - vienmērīgi duļķains, bez nokrišņiem.

Dažādas saistītās baktērijas var aglutinētas ar to pašu diagnostikas aglutinācijas serumu, kas apgrūtina tos identificēšanu. Tāpēc izmantojiet adsorbed aglutinācijas serumi, No kuriem savstarpējās reakcijas antivielas tiek noņemtas ar adsorbciju ar saistītajām baktērijām. Šādos serumos antivielas tiek saglabātas tikai šai baktērijai. Iegūstot šādu a: ^ īpašu monoreģionu diagnostikas aglutmi ierosināto SERA ierosināto A. Castelli (1902).

Netiešās (pasīvās) hemaglutinācijas reakcija (RNG, RPGA) ir balstīta uz eritrocītu lietošanu ar antigēnu adsorbētu virsmu ar antigēniem vai antivielām, kura mijiedarbība ar atbilstošām antivielām vai asins seruma antigēniem izraisa eritrocītu savienošanu un zudumu testa caurules vai šūnas apakšā iebildums Festral nogulumu forma (13.2. Att.). Ar negatīvu reakciju, eritrocīti nokārtojas ■ "pogas". Parasti antivielas tiek konstatētas RF, izmantojot antigēnu eritrocītu diagnostiku, kas ir eritrocīts ar adsorbētu uz Tie ir antigēni. Dažreiz anti-eritrocītu diagnostika tiek izmantoti, uz kurām tiek adsorbētas antivielas. Piemēram, botulinum toksīnu var noteikt, pievienojot eritrocijam anticitātes botulīna diagnostikai uz to (šāda reakcija tiek saukta reakcija pretējā netiešā hemaglutinācija - Ronga). Gredzenu izmanto, lai diagnosticētu infekcijas slimības, nosakot gonadotropo hormonu iebildums Urīns, veicot grūtniecību, noteikt lielāku jutību pret zālēm, hormoniem un dažos citos gadījumos.

Cumbsis reakcija

(Coombs tests) - metode Rēzus antivielu noteikšanai uz eritrocītu virsmas, kas izraisa globulīna nogulsnēšanu serumā. Šo testu izmanto, lai diagnosticētu hemolītisko anēmiju zīdaiņiem ar Rheus nesaderību, kas ir sarkano asins šūnu iznīcināšana.

Coaggglutination reakcija. Cēlonis ir noteikts, izmantojot Staphylococci iepriekš apstrādātu ar imūnās diagnostikas serumu. Staphylococcis satur olbaltumvielas Bet, Ņemot afinitāte pret imūnglobulīnu FC fragmentu, nespeculiski adsorb antimikrobiālās antivielas, kas pēc tam mijiedarbojas ar aktīviem centriem ar atbilstošām mikrobiem, kas izolēti no pacientiem. Coaggglutination, pārslas, kas sastāv no stafilokokiem, diagnostikas seruma antivielas un mikrobs, ko nosaka mikrobs.

Gemaglutinācijas bremzēšanas reakcija(RTHA) ir balstīta uz blokādi, nomācot vīrusu antigēnu antivielas imūns seruma antivielas, kā rezultātā vīrusi zaudē īpašumu aglutinizēt sarkanās asins šūnas (13.3. Att.). RTHA tiek izmantota daudzu vīrusu slimību diagnosticēšanai, kuru patogēni (gripas vīrusi, masalas, masaliņas, ērču encefalīts, uc) var aglutinēt dažādu dzīvnieku sarkanās asins šūnas.

1. Ārstu grupa gar PVO Ārsti ieradās Indijā, lai identificētu pacientus ar poliomielītu un palīdzētu veikt poliomielīta vakcināciju. Vienā no aptaujātajiem ciemiem ārstiem, kas celta no lielas ģimenes zēns 6 gadus, kas bija pirms 5 dienām. Pēkšņi pieauga temperatūra, galvu bija ļoti slims, tur bija atkārtota vemšana, sāpes rokās un kājās. Inspekcijas gadījumā: augsta temperatūra, asa vājums, meningal simptomi, muskuļu tonis tiek samazināts uz labās kājas, tendences refleksi ir dramatiski novājināti, pārtraukt karājas. Kad tiek sadalīts mugurkaula kanālu, cerebrudospinālais šķidrums plūda pastiprinātā spiedienā, palielinājās limfocītu skaits, baktērijas netika izcelti. Tika piegādāta sākotnējā diagnoze "paralītiska poliomielīta". Kā zēns varētu būt inficēts? Kā ir īpaša aktīva polyomyomyelīta profilakse? Vai pastāv draudi citu šīs ģimenes bērnu inficēšanās, kas ir jāveic?

Atbilde: Zēns varētu būt inficēts ar fekāliju-perorāli caur pārtiku, ūdeni, kā arī gaisa pilienu. Polistelīta novēršanas pamatmērķis ir dzīva kultūras vakcīnas imunizācija 3 Sabin celmu serotipi Krievijā transplantāts no polio Poliomielīta institūta un vīrusa encefalīta ievadīšanas iekšķīgai lietošanai. Mp Chumakovs. Vakcinācija ir tralizējošā narkotika no novājinātajiem celmiem polomelīta polomelīta 1, 2, 3, kas iegūts primārajā kultūrā nieru šūnu Āfrikas zaļo mocekļu. . Bērni vecumā no 3 mēnešiem līdz 6 gadiem ir pakļauti plānotām vakcīnām no poliomielīta. Orālā poliomielīta vakcīna vakcinācija tiek veikta 2 vai 4 pilienos vakcīnas trīs reizes 3, 4, 5 un 6 mēnešu laikā ar trīs reizes revakcināciju 18, 20 mēnešos un 14 gados. Pacienta zēns ir jānovieto slimnīcā, un visiem citiem šīs ģimenes bērniem ir nepieciešams vakcinēt dzīvo poliomielīta vakcīnu.

1. Gripas vakcīnas trīsvērtīgā polimēra apakšvienības (gripas) sastāvs un izmantošana

Tā ir molekulmasa vakcīna. Sastāvdaļas: gripas vīrusa virsma ir trīs apakštipi (A / H1N1, A / H3N2, B). Pieteikums: gripas profilaksei

Eksāmena biļetes numurs 22.

Tēmas saturs "Imūnmodulatori. Immunodiagnostics infekcijas slimībām.":

Paplašināta reakcijas aglutinācija (R.). Lai noteiktu pacienta serumā izvietots aglutinācijas reakcija (RA). Lai to izdarītu, virknei seruma atšķaidījumu diagnosticum pievieno nogalināto mikroorganismu vai daļiņu apturēšanai ar sorbed hipertensiju. Maksimālā vaislas piešķiršana aglutinācija AG, ko sauc par asins seruma titru.

Reakcijas aglutinācijas šķirnes (R.) Lai identificētu - asins pilienu paraugu uz TarLEVIA (ar asins pilienu diagnozi un redzamo balto aglutinātu izskatu) un Haddlson reakciju uz brucelozes (ar kritumu seruma diagnostikam krāsots ar genciāna violetu).

Aptuvenā aglutinācijas reakcija (RA)

Lai identificētu atlasītos mikroorganismus, aptuveno ra uzlikts par materiāliem logiem. Lai to izdarītu, tiek pievienota patogēna kultūra standarta diagnostikas antiseruma pilienam (atšķaidījumā 1:10, 1:20). Ar pozitīvu rezultātu viņi izraisa atklājošu reakciju ar pieaugošo antiseruma audzēšanu.

Reakcija Viņi uzskata pozitīvi, ja aglutinācija tiek novērota atšķaidījumos tuvu diagnostikas seruma titru.

Oāze. Somatisks o-ag Termostabils un izturēt vārīšanos 2 stundas. Ja veidojas mijiedarbība ar smalkgraudainām vienībām.

N-ag. N-AG (Flogy) Termolabils un ātri iznīcināts 100 ° C temperatūrā, kā arī etanola iedarbībā. Reakcijās ar H-anti-seeor pēc 2 stundām, inkubācijas veido vaļīgas lielas pārslas (veido baktēriju savieno aromātu).

CAUR. Vēdera baktērijas attiecībā pret termostabilu (iztur temperatūru 60-62 ° C 2 stundas); Kad tiek veidota inkubācija ar vi-antiserum, smalks graudainu aglutīnu.

Reakcijas tiešā hemaglutinācija

Vienkāršākais no līdzīgiem reakcijas - aglutinācija Eritrocīti vai hemaglutinācija, ko izmanto, lai noteiktu asins grupas AB0 sistēmā. Lai noteiktu aglutinācija (Vai tā trūkums) Izmantojiet standarta antisamam ar anti-in-in-aglutinīnu. Reakcija tiek saukta taisna, jo Apmeklēja eritrocītu dabiskās sastāvdaļas.

Ģenerāldirektors S. tieša hemaglutinācija Mehānismiem ir vīrusu hemaglutinācija. Daudzi vīrusi spēj spontāni aglutinēt putnu un zīdītāju sarkanās asins šūnas, to papildinājums eritrocītu suspensijai izraisa to agregātu veidošanos.

Mikrobu (RA) tiešas aglutinācijas reakcija. Šajā reakcijā antiviela (aglutinīns), kas tieši aglutinē korpusu antigēni (agluthanogēns). Tos parasti pārstāv inaktivētu mikroorganismu apturēšana (mikroblutinācijas reakcija). Saskaņā ar radīto aglutinācijas raksturu, graudu un pārslu aglutinācija atšķiras. Granulēta aglutinācija notiek, glūmējot mikrobus, kas satur O-antigēnu. Baktērijas ar karodziņiem (H-antigēna) ir aglutintiinēti ar lielu pārslu veidošanos.

Lai noteiktu mikroorganismu veidu, standarta diagnostikas aglutinācijas serumu izmantošanu. Tos iegūst ar laboratorijas dzīvnieku hiperimimunizāciju, apturot baktērijas. Šāda seruma titrs ir lielākais atšķaidījums, kurā ir novērota atšķirīgā attiecīgās antigēna aglutinācija. Tomēr sakarā ar sarežģītību antigēnu struktūru baktērijas, aglutinācijas serumi satur antivielas ne tikai uz sugām specifiskām, bet arī grupu antigēniem un var radīt grupu aglutināciju ar saistītiem baktēriju veidiem. Antivielu titri VISCific antigēnas serumā vienmēr ir augstāki nekā grupai. Lai novērstu grupas un narkotiku specifiskus antivielumus serumā, tiek secīgi pievienoti mikroorganismi, kas ietver grupu antigēnus (Castellani metodi). Šāda metode tiek iegūta ar adsorbētām serumiem, kas satur antivielas uz noteikta veida mikrobu.

Aglutinācijas reakcijas metodes. Visbiežāk sastopamā plate (aptuvena) un izvietoto ra.

Stādīts ra uz stikla. Šajā reakcijā var izmantot serumus ar zemu atšķaidījumu vai neatšķaidītu. Izmantojiet to kā paātrinātu metodi, lai noteiktu antivielas vai identifikācijas mikroorganismu. Stikls tiek piemērots seruma kritums, kurā cilpa tiek ieviesta ar nezināmu baktēriju kultūru, sajauc un 2-3 minūtēs, ir izskats smalkgraudainu vai pārslu aglutinācijas. Lai kontrolētu, tiek izmantots fizioloģiskā šķīduma kritums, kurā pēc baktēriju novērošanas. Lietojot ne-seruma sūkalu, stikla reakcijai ir tikai aptuvena vērtība.

Izvietotais RA tiek veikts testa caurulēs vai urbumos. Šādā gadījumā diagnostikas serums tiek audzēts titrs un tiek ieviesti tādi paši antigēna daudzumi. Ar pozitīvu rezultātu, vaļēju nogulsnes veidojas apakšā testa caurules formā "lietussargu", ar negatīvu - nogulsnes formā "pogas". Tā kā seruma grupu un narkotiku antivielu nosaukumi ir ievērojami zemāki par CYPHIC titru tipu, grupas reakcijas tiek novērotas tikai nelielos seruma atšķaidījumos. Ja aglutinācija notiek ar titru vai līdz pusei no seruma titrs, tā ir seacity.

Lai noteiktu sākotnējās seruma antivielas (seroloģisko diagnozi), tiek izmantoti standarta mikrobu diagnostika, kas satur zināmo mikrobu vai to antigēnu apturēšanu. Šādā gadījumā jūs varat arī ievietot plāksni un izvietot ra.

Tiešās šūnu aglutinācijas reakcija. Lai noteiktu asins grupas, standarta donoru serumi satur zināmus anti-A vai antivielas antivielas. Reakcijas uz stikla vai plāksnēm. Jo klātbūtnē sarkano asins šūnu a (2. asins tips), (3. asins grupu) vai abus antigēnus (4. asins tips), atbilstošais serums aglutinēt sarkanās asins šūnas. To izmanto arī, lai kompakts saderību asinīs, kad asins pilieni no donora un saņēmēja ir jaukta un novērtēta aglutinācija.

Klīnikas izmanto leikocītu, trombocītu un citu šūnu aglutinācijas reakciju, lai atklātu autoantivielas, kā arī noteikt antigēnus uz šīm šūnām.

Hemaglutinācijas reakcija ir balstīta uz eritrocītu fenomenu, kuru izcelsme ir dažādu faktoru ietekmē. Atšķirt tiešo un netiešu hemaglutināciju.
Ar tiešu hemaglutinācijas reakciju, sarkanās asins šūnas tiek pielīmētas, adsorbējot dažus antigēnus uz tiem, piemēram, vīrusiem.

Netiešās (pasīvās) hemaglutinācijas (rind, RPGA) reakcijapamatojoties uz lietošanu eritrocītu (vai lateksa) ar antigēnu vai antivielu adsorbēt uz to virsmas, mijiedarbību pacientiem ar atbilstošām antivielām vai antigēniem pacientiem ar atbilstošām antivielām vai eritrocītu zudumu uz apakšā testa caurules vai šūnas formā a Diploka nogulsnes.

Sastāvdaļas.Gredzējumam var izmantot eritrocītos, zirgus, trušus, cāļus, peles, cilvēkus un citus, kas novāc, pārstrādes formalīnu vai glutaraldehīdu. Eritrocītu adsorbcijas jauda palielinās, kad tiek apstrādāts tanīns vai hroma hlorīds.

Pling antigēni var kalpot kā polisaharīda agroorganismi, baktēriju vakcīnu, AG vīrusu un Rickettsis ekstrakti, kā arī citas vielas.

Eritrocīti, sensitizizēts AG, sauc par eritrocītu diagnostiku. Eritrocītu diagnosticuma sagatavošanai visbiežāk tiek izmantotas RAMS eritrocīti ar augstu adsorbēšanas darbību.

Pielietojums. Gredzenu izmanto, lai diagnosticētu infekcijas slimības, nosakot gonadotropo hormonu urīnā, nosakot grūtniecību, lai noteiktu lielāku jutību pret zālēm, hormoniem un dažos citos gadījumos.

Seroloģiskajos pētījumos tiek izmantota tiešās hemaglutinācijas bremzēšanas reakcija, kad pacients izolēts vīruss tiek neitralizēts ar konkrētu imūnsorumu, un pēc tam apvienojumā ar eritrocītiem. Hemaglutinācijas trūkums norāda, ka tiek izmantots vīrusa un imūnā seruma atbilstību.

Netiešās hemaglutinācijas reakcija (pasīvā asinsspluatācija) tiek novērota gadījumos, kad eritrocīti, iepriekš apstrādāti (jutīgi) dažādi antigēni, pievieno imūns serumu vai pacienta serumu ar atbilstošām antivielām. Ir īpaša sarkano asins šūnu saikne, to pasīvā hemaglutinācija.

Netiešās vai pasīvās, hemaglutinācijas reakcija jutīgumam un specifiskumam pārsniedz citas seroloģiskās metodes, un to izmanto baktēriju izraisīto infekciju diagnostikā, vienkāršās.

Netiešās hemaglutinācijas reakcijas veicināšanas metode sastāv no vairākiem posmiem.

· Pirmkārt, sarkanās asins šūnas tiek mazgāti ar izotonisku nātrija hlorīda šķīdumu, tad, ja nepieciešams (izmantojot olbaltumvielu antigēnus), tos apstrādā ar šķīdumu Tanina 1: 20000 un jutīgi ar šķīstošiem antigēniem.

· Pēc mazgāšanas bufera izotonisks šķīdums nātrija hlorīda, eritrocītu antigēns ir gatavs lietošanai.

· Testa serumu audzē izotonisks šķīdums nātrija hlorīda testa caurulēs vai īpašos plastmasas plāksnes ar akām, tad eritrocītu diagnosticum pievieno katram seruma atšķaidīšanai.

· Netiešās hemaglutinācijas reakcijas rezultātus ņem vērā, ņemot vērā eritrocītu nogulsnes, kas veidojas testa caurules apakšā.

· Pozitīvs apsvērt rezultātu reakcijas, kurā sarkanās asins šūnas vienmērīgi aptver visu apakšā testa caurules. Ar negatīvu eritrocītu reakciju veidā nelielu disku vai "pogas" atrodas centrā apakšas testa caurules.

· Pēc 2 stundām inkubācijas 37 ° C temperatūrā ņem vērā rezultātus, novērtējot eritrocītu nogulumu izskatu (bez kratot): ar negatīvu reakciju, kas parādās kompaktā diska vai gredzena formā akas ar pozitīvu reakciju - raksturīgo mežģīņu nogulsnes no eritrocītiem, plāna plēve ar nelīdzenām malām

Coaggglutination reakcija.

Šīs reakcijas pamatā ir unikāls zelta staphylococcus īpašums, kam ir proteīns, kas sastāv no tās šūnu sienas, saistīties ar IgG un IgM FC fragmentiem.

Tajā pašā laikā aktīvi antivielu centri paliek brīvi un var mijiedarboties ar konkrētiem antigēnu faktoriem. Slīpju stiklam tiek pielietota 2% stafilokoku apturēšanas piliens, un tiek pievienota pētīto baktēriju apturēšana. Saskaņojot antivielas, antivielas pēc 30-60 ° C notiek skaidru stafilokoku antivielu aglutināciju.

Prasības imūnās serumā, ko izmanto, lai sensitizētu stafilokoku šūnas un veicot sensibilizācijas procesu. Lai iegūtu koagilutinošu reaģentu, stafilokoku apturēšana jāārstē ar imūnās serumu pret vēlamo antigēnu. Serums ir jāņem no dzīvnieka, kura IgG ir afinitāte pret proteīnu A. Lielākā afinitāte pret to ir cilvēka, cūku, suņu un jūrascūciņu imūnglobulīni, mazāk - ēzelis un trusis, IgG aitas, zirgi, Žurkas un peles mijiedarbojas ar to ļoti vāja.

Papildus stingrai specifiskumam ar vēlamo antigēnu, RKOA izmantotajam serumam nedrīkst saturēt antivielas stafilokokroccus, lai izvairītos no stafilokoku reaģenta aglutinācijas, ņemot vērā antigēna un antivielu īpašo ietekmi, kas IGG sistēmā - proteīns A būtu jāizslēdz. Kontrole tiek veikta, sajaucot uz stikla vienu pilienu seruma un 10% suspensija stafilokoku reaģenta. Ja pēc 3 ... 5 minūtes aglutinācijas pārslas netiek veidotas, tad serums tiek uzskatīts piemērots reakcijai.

Ja pieejamie seruma paraugi uz šo antigēnu aglutinētajiem stafilokokiem, tad tie var būt adsorbcija ar stafilokoku šūnu apturēšanu, kurām nav proteīna A (piemēram, koka 46 celmi). Šādā veidā antivielas reaģē ar stafilokoku, kas izriet no fab fragmentiem.

Tādējādi serumam, ko izmanto, lai sagatavotu koagilutinošu reaģentu, jāatbilst šādām prasībām:

• iegūti no dzīvnieku ražotāja, kura IgG ir afinitāte pret olbaltumvielu A;
• jābūt specifiskumam attiecībā pret vēlamo antigēnu;
• esiet brīvi no anti-stilokoku antivielām.

· Diagnosticuma sagatavošana. Sagatavotais 10% stafilokoku reaģents ir saistīts ar vienādu imūnās seruma tilpumu noteiktā iepriekš optimālā darba atšķaidīšanā. Maisījums tiek sakrata 60 minūtes pie 40 ... 42 ° C pašvaldības aparātā 90 svārstībās 1 min. Tad pēc 15 minūtēm FBI mazgāja divas reizes, resuspends līdz 2% no suspensijas un var tikt saglabāti ar nātriju (1: 10 000).

Gandrīz visu infekcijas slimību laboratorijas diagnoze ir balstīta uz pacientu ar antivielām, kas tiek ražotas uz patogēna antigēniem, seroloģisko reakciju metodēm. Viņi ienāca medicīnas praksi no deviņpadsmitā gada beigām - divdesmitā gadsimta sākumā.

Zinātnes attīstība palīdzēja noteikt mikrobu antigēno struktūru un to toksīnu ķīmiskos formulas. Tas ļāva izveidot ne tikai terapeitisku, bet arī diagnostikas serumus. Tos iegūst, ieviešot vājinātus patogēnus ar laboratorijas dzīvniekiem. Pēc vairāku dienu fragmentu no trušiem vai pelēm sagatavo preparātus, ko izmanto, lai identificētu mikrobus vai to toksīnus, izmantojot seroloģiskās reakcijas.

Šādas reakcijas ārējā izpausme ir atkarīga no tā formulējuma nosacījumiem un antigēnu stāvoklim pacienta asinīs. Ja mikrobu daļiņas nešķīst, tad tās tiek noguldītas, lized, saistās vai imobilizētā serumā. Ja antigēns ir šķīstošs, tad parādība neitralizācijas vai nokrišņu izpaužas.

Aglutinācijas reakcija (RA)

Seroloģiskā reakcija aglutinācija ir ļoti specifiska. Ir viegli veikt un diezgan vizuāli, lai ātri noteiktu antigēnu klātbūtni pacienta serumā. To izmanto, lai ražotu vidāla reakciju (vēdera tīfas un paratifikācijas diagnozi) un zīle (neapstrādāta zīle).

Tā ir balstīta uz konkrētu mijiedarbību starp cilvēka antivielām (vai aglutīnu) un mikrobu šūnu (aglututenogenogēnu). Pēc to mijiedarbības veidojas daļiņas, kas ietilpst sedimentos. Tā ir pozitīva zīme. Var izmantot reakcijas formulējumu, dzīvu vai nogalinātu mikrobu aģentiem, sēnēm, vienkāršākajām un somatiskajām šūnām.

Ķīmiski reakcija ir sadalīta divos posmos:

1. Īpašs antivielu savienojums (AT) ar antigēniem (AG).
2. Nespecifisks - ag-pie konglomerātu, tas ir, aglutinācijas veidošanās.

Netiešās aglutinācijas reakcija (RPGA)

Attiecībā uz tās ražošanu, attīrītiem eritrocītiem un sarkano asins pasakas, kas iepriekš tika ārstēti ar antivielām vai antigēniem (tas ir atkarīgs no tā, kas ir kā laboratorija vēlas atrast). Dažos gadījumos cilvēka eritrocīti tiek ārstēti ar imūnglobulīniem. Eritrocītu seroloģiskās reakcijas tiek uzskatītas par to, ja notika to nogulsnēšanās testa caurules apakšā. Jūs varat runāt par pozitīvu reakciju, kad šūnas atrodas apgrieztā lietussargu veidā, kas aizņem visu apakšējo daļu. Negatīvā reakcija tiek skaitīta, ja eritrocīti nomira ar kolonnu vai mijiedarboties ar mijiedarbību apakšējā daļā.

Novēršanas reakcija (RP)

Šāda veida seroloģiskie reakcijas kalpo, lai identificētu ļoti mazas antigēnu daļiņas. Tas var būt, piemēram, olbaltumvielas (vai to daļas), proteīnu savienojumi ar lipīdiem vai ogļhidrātiem, baktēriju daļām, to toksīniem.

Reakcijas serumu iegūst mākslīgi inficēti ar dzīvniekiem, parasti truši. Šajā metodē var iegūt absolūti jebkuru nogulsnējošu serumu. Sērijas seroloģisko reakciju formulēšana ir līdzīga ar aglutinācijas reakcijas mehānismu. Serumā ietvertās antivielas ir savienotas ar antigēniem, veidojot lielas olbaltumvielu molekulas, kas tiek noguldītas testa caurules vai substrāta (gēla) apakšā. Šī metode tiek uzskatīta par ļoti specifisku un pat nenozīmīgi nelielu vielu daudzumu var atklāt.

Izmanto, lai diagnosticētu mēris, tarulēmiju, sibīrijas čūlas, meningītu un citas slimības. Turklāt, iesaistot tiesu medicīnisko pārbaudi.

želejā

Seroloģiskās reakcijas var veikt ne tikai šķidrā vidē, bet arī agara želejā. To sauc par difūzās nokrišņu metodi. Ar to tas tiek pētīts sarežģītu antigēnu maisījumu sastāvs. Šī metode ir balstīta uz hemotaksis antigēniem līdz antivielām un otrādi. Gelā viņi virzās uz otru ar dažādiem ātrumiem un, tikšanās, veido nokrišņu līniju. Katra līnija ir viens kopums AG-AT.

Antitoksīna eksotoksīna (pH) neitralizācijas reakcija

Antitoksiskie serumi spēj neitralizēt eksotoksīna iedarbību, kas ražo mikroorganismus. Šīs seroloģiskās reakcijas pamatojas uz to. Mikrobioloģija izmanto šo metodi seruma titrēšanai, toksīniem un anatoksīniem, kā arī to terapeitiskās aktivitātes noteikšanu. Toksīna neitralizācijas spēku nosaka parastās vienības - AE.

Turklāt, ņemot vērā šo reakciju, ir iespējams noteikt eksotoksīna sugu vai tipisko piederību. To lieto difterijā, botulisms. Pētījumu var veikt gan "uz stikla", gan želeju.

Līzes reakcija (RL)

Imūnās serums, kas nonāk pacienta ķermenī, papildus tās galvenajai pasīvā imunitātes funkcijai, kā arī gulēja īpašības. Tas var izšķīdināt mikrobu aģentus, šūnu svešzemju elementus un vīrusus, kas ienāk pacienta ķermenī. Atkarībā no antivielu, baktēriju, citoņu, spirohetolysīnu, hemolysīnu un citu specifikas specifiku ir atdalītas serumā.

Šīs īpašās antivielas sauc par "pilnīgu". Tas ir iekļauts gandrīz visos cilvēka ķermeņa šķidrumos, ir sarežģīta proteīna struktūra un ir ļoti jutīga pret pieaugošo temperatūru, kratīšanu, skābju iedarbību un tiešu saules gaismu. Bet žāvētā stāvoklī, tas spēj saglabāt savu lizes īpašības līdz sešiem mēnešiem.

Šāda veida seroloģisko reakciju veidi:

Bakteriolīze;

Hemolīze.

Bakteriolisms tiek veikts, izmantojot pacienta asins serumu un īpašu imūnsistēmu ar dzīvām mikrobiem. Ja asinīs ir pietiekams papildinājums, pētnieks redzēs līzes baktērijas, un reakcija tiks uzskatīta par pozitīvu.

Otrā seroloģiskā asins reakcija ir tā, ka pacienta eritrocītu apturēšana tiek ārstēta ar serumu, kas satur hemolysīnus, kas tiek aktivizēti tikai konkrēta komplimenta klātbūtnē. Ja ir kāds, tad laboratorija izpaužas izšķīdināšanu sarkano asins šūnu. Šī reakcija tiek plaši izmantota mūsdienu medicīnā, lai noteiktu papildinājuma titru (I.E. tās mazākais eritrocītu līzes) daudzums serumā un, lai noteiktu papildinājumu saistošu analīzi. Šī metode tiek veikta seroloģiskā reakcija uz sifilisu -

Papildina saistošu reakciju (RSK)

Šī reakcija tiek izmantota, lai noteiktu pacienta antivielu asins serumā infekcijas aģents, kā arī identificēt patogēnu ar tās antigēnu struktūru.

Līdz šim brīdim mēs aprakstījām vienkāršas seroloģiskās reakcijas. RSK tiek uzskatīts par sarežģītu reakciju, jo tas mijiedarbojas ne divus, bet trīs elementus: antivielu, antigēnu un papildinājumu. Tās būtība ir tā, ka antivielu un antigēna mijiedarbība notiek tikai komplimentu proteīnu klātbūtnē, kas adsorbē uz AG-Pie sarežģītā virsmas.

Antigēni paši, pēc papildinājuma piesaistīšanas, ir pakļauti būtiskām izmaiņām, kas parāda reakcijas kvalitāti. Tas var būt līze, hemolīze, imobilizācija, baktericīda vai bakteriostatiska darbība.

Pati reakcija notiek divos posmos:

1. Kompleksa antigēna antivielu veidošanās, kas vizuāli nav pamanāma pētniekam.
2. Mainīt antigēnu saskaņā ar papildinājuma darbību. Šo fāzi visbiežāk izseko neapbruņotu aci. Ja vizuālā reakcija nav redzama, izmantojiet papildu indikatora sistēmu, kas ļauj noteikt izmaiņas.

Indikatoru sistēma

Šī reakcija ir balstīta uz saistīšanos papildinājumu. Testa mēģenē stundā pēc Rskas ir iestatīts, lai pievienotu attīrītas filiāles un hemolītisko serumu, kas nesatur papildinājumu. Ja nesaistītā papildinājums saglabājās testa caurulē, tas pievienosies AG-pie komplekss veidojas starp filiāles šūnām un hemololiem, un izraisa viņiem likvidāciju. Tas nozīmēs, ka RSK ir negatīvs. Ja eritrocīti palika veseli skaitli, tad, attiecīgi, reakcija ir pozitīva.

Hemaglutinācijas reakcija (RGA)

Ir divas būtiskas atšķirīgas hemaglutinācijas reakcijas. Viens no tiem ir seroloģiski, to izmanto, lai noteiktu asins grupas. Šādā gadījumā sarkanās asins šūnas mijiedarbojas ar antivielām.

Un otrā reakcija neattiecas uz seroloģisko, jo sarkanās asins pasakas reaģē ar hemaglutinīniem, ko ražo vīrusi. Tā kā katrs patogēns darbojas tikai uz konkrētiem eritrocītiem (vistas, jēra gaļa, pērtiķiem), tad šī reakcija ir šauri specializēta.

Izprast pozitīvo reakciju vai negatīvu, tas ir iespējams ar atrašanās vietu asins šūnu apakšā testa caurules. Ja viņu zīmējums atgādina apgrieztu lietussargu, tad vēlamais vīruss ir klāt pacienta asinīs. Un, ja visi eritrocīti ir patika kolintu kolonnā, tad nav vēlamo patogēnu.

Gemaglutinācijas bremzēšanas reakcija (RTHA)

Tā ir ļoti specifiska reakcija, kas ļauj izveidot vīrusu tipa veidu vai konkrētu antivielu klātbūtni pacienta asinīs serumā.

Tās būtība ir tāda, ka antivielas, kas pievienotas testa caurulei ar pētījuma materiālu, novērš antigēnu nogulsnēšanu uz sarkano asins šūnām, tādējādi apturot hemaglutināciju. Tā ir kvalitatīva pazīme par konkrētu antigēnu klātbūtni asinīs uz konkrētu vēlamo vīrusu.

Imunofluorescences reakcija (rifs)

Reakcija ir balstīta uz spēju identificēt ag-pie ar to ārstēšanu ar fluorhromiskām krāsvielām. Šī metode ir viegli pārsūdzama, neprasa atbrīvot tīra kultūru un aizņem maz laika. Tas ir nepieciešams, lai ātri diagnosticētu infekcijas slimības.

Praksē šīs seroloģiskās reakcijas ir sadalītas divos veidos: taisni un netieši.

Tiešais rifs tiek ražots ar antigēnu, kas ir iepriekš apstrādāts ar dienasgaismas serumu. Un netiešā ir tā, ka pirmajā narkotiku apstrādā ar parasto diagnostiku, kas satur antigēnus līdz vēlamajām antivielām, un pēc tam tiek atkārtoti izmantota fluorescējošā serums, kas ir specifisks ag-pie kompleksa proteīniem, un mikrobu šūnas kļūst redzamas laikā mikroskopija.