Si basa sulla determinazione degli anticorpi antivirali nel sangue del paziente nelle reazioni sierologiche utilizzando antigeni virali specifici - diagnostici o sistemi di test speciali. Le reazioni sierologiche per le infezioni virali vengono eseguite in un mezzo liquido (RSK, RTGA, RNGA, RONGA, RTONGA, RIA), in un gel (RPG, RRG, RVIEF) o su un supporto in fase solida (ad esempio, sulle pareti di il pozzetto di una piastra di polistirene con fissazione di uno dei componenti della risposta immunitaria - antigene o anticorpo). Sono noti metodi in fase solida come ELISA, IEM, RGadsTO, RIF, RGads, RTGads.
Spesso, a causa della presenza di anticorpi antivirali naturali nel sangue della maggior parte delle persone sane, la diagnosi sierologica delle infezioni virali si basa sulla ricerca sieri abbinati, assunti all'inizio e nel mezzo della malattia o durante il periodo di convalescenza per determinare l'aumento del titolo anticorpale. Un aumento del titolo anticorpale di quattro volte o più è considerato significativo dal punto di vista diagnostico.
L'aumento della sensibilità dei metodi sierologici si ottiene mediante l'adsorbimento di antigeni o anticorpi sugli eritrociti (RNGA, RONGA, RTONGA, RGadsTO, RRG), marcatura con enzimi (ELISA), isotopi radioattivi (RIA, RPG) o fluorocromi (RIF), viene anche utilizzato il principio della lisi degli eritrociti ( sistemi) nell'interazione di antigeni e anticorpi in presenza di complemento (RSK, RRG).
Reazione di fissazione del complemento (CBC) come variante del legame del complemento al freddo (durante la notte a + 4 ° C) viene spesso utilizzato in virologia per la diagnosi retrospettiva di una serie di infezioni virali e per la determinazione di antigeni virus-specifici nei materiali dei pazienti.
Reazione di emolisi radiale (RHR) nel gel di agarosio si basa sul fenomeno dell'emolisi degli eritrociti sensibilizzati con un antigene, sotto l'influenza di anticorpi virus-specifici in presenza di complemento e viene utilizzato per la diagnosi sierologica di influenza, ARVI, rosolia, parotite, infezioni da togavirus.
Per formulare la reazione agli eritrociti di agnello (0,3 ml di sospensione al 10%) aggiungere 0,1 ml di antigene virale non diluito e la miscela viene tenuta per 10 minuti a temperatura ambiente. 0,3 ml di eritrociti sensibilizzati e 0,1 ml di complemento vengono aggiunti all'1,2% di agarosio a una temperatura di 42 ° C, la miscela viene versata su vetrini o nei pozzetti delle piastre di polistirene, vengono praticati dei fori nel gel di agarosio congelato usando un punzone e riempito con i sieri indagati e di controllo. I bicchieri oi pannelli vengono coperti con un coperchio e posti in una camera umida per 16-18 ore in un termostato. La reazione è presa in considerazione dal diametro della zona di emolisi attorno ai fori riempiti di siero. Non c'è emolisi nel controllo.
N. 1 Reazioni sierologiche utilizzate per la diagnosi infezione virale.
Le reazioni immunitarie sono utilizzate negli studi diagnostici e immunologici su persone malate e sane. A tal fine, applicare metodi sierologici, cioè metodi per studiare anticorpi e antigeni utilizzando reazioni antigene-anticorpo determinate nel siero del sangue e in altri fluidi, nonché nei tessuti corporei.
Il rilevamento di anticorpi contro gli antigeni del patogeno nel siero del sangue del paziente consente di diagnosticare la malattia. Gli studi sierologici vengono anche utilizzati per identificare antigeni di microbi, varie sostanze biologicamente attive, gruppi sanguigni, antigeni tissutali e tumorali, complessi immunitari, recettori cellulari, ecc.
Quando un microbo viene isolato da un paziente, l'agente patogeno viene identificato studiando le sue proprietà antigeniche utilizzando sieri di diagnostica immunitaria, cioè sieri di sangue di animali iperimmunizzati contenenti anticorpi specifici. Questa è la cosiddetta identificazione sierologica dei microrganismi.
In microbiologia e immunologia, sono ampiamente utilizzate agglutinazione, precipitazione, neutralizzazione, reazioni con la partecipazione del complemento, utilizzando anticorpi e antigeni marcati (radioimmunologico, test immunoenzimatico, metodi immunofluorescenti). Le reazioni elencate differiscono nell'effetto registrato e nella tecnica di stadiazione, tuttavia, sono tutte basate sulla reazione di interazione di un antigene con un anticorpo e vengono utilizzate per rilevare sia gli anticorpi che gli antigeni. Le reazioni immunitarie sono caratterizzate da elevata sensibilità e specificità.
Le peculiarità dell'interazione di un anticorpo con un antigene sono alla base delle reazioni diagnostiche nei laboratori. La reazione in vitro tra antigene e anticorpo consiste in una fase specifica e una aspecifica. In una fase specifica, c'è un rapido legame specifico del sito attivo dell'anticorpo al determinante dell'antigene. Quindi si verifica una fase non specifica, una più lenta, che si manifesta con fenomeni fisici visibili, ad esempio la formazione di scaglie (il fenomeno dell'agglutinazione) o un precipitato sotto forma di torbidità. Questa fase richiede la presenza di determinate condizioni (elettroliti, pH ottimale dell'ambiente).
Il legame del determinante dell'antigene (epitopo) al centro attivo del frammento Fab degli anticorpi è dovuto alle forze di van der Waals, ai legami idrogeno e all'interazione idrofobica. La forza e la quantità di antigene legato dagli anticorpi dipendono dall'affinità, dall'avidità degli anticorpi e dalla loro valenza.
№ 2 Agenti eziologici della leishmaniosi. Tassonomia. Caratteristica. Diagnostica microbiologica. Trattamento.
Tassonomia: tipo Sarcomastigophorae, sottotipo Mastigophora - flagellati, classe Zoomastigophora, ordine Kinetoplastida, genere Leishmania.
Coltivazione: Terreno di coltura NNN contenente agar sangue di coniglio defibrinato. Le leishmanie crescono anche sulla membrana corion-allantoica dell'embrione di pollo e nelle colture cellulari.
Epidemiologia: in paesi con climi caldi. Il meccanismo di trasmissione dei patogeni è trasmissibile, attraverso la puntura di vettori - zanzare. Le principali fonti di agenti patogeni: con leishmaniosi antroponosa cutanea - persone; con leishmaniosi zoonotica cutanea - roditori; con leishmaniosi viscerale - persone; con leishmaniosi mucocutanea - roditori, animali selvatici e domestici.
Patogenesi e clinica. Esistono due agenti eziologici della leishmaniosi cutanea: L. tropica - l'agente eziologico della leishmaniosi antroponosa e L. major - l'agente eziologico della leishmaniosi cutanea zoonotica.
La leishmaniosi cutanea antropologica è caratterizzata da un lungo periodo di incubazione di diversi mesi. Nel sito della puntura di zanzara appare un tubercolo, che aumenta e si ulcera dopo 3 mesi. Le ulcere si trovano più spesso sul viso e sugli arti superiori, lasciando cicatrici entro la fine dell'anno. La leishmaniosi cutanea zoonotica (leishmaniosi ulcerativa precoce, ulcera pendino, forma rurale) è più acuta. Il periodo di incubazione è di 2-4 settimane. Le ulcere piangenti sono spesso localizzate agli arti inferiori. La leishmaniosi mucocutanea causa il complesso della leishmania L. braziliensis; si sviluppano lesioni granulomatose e ulcerative della pelle del naso, delle mucose della bocca e della laringe. La leishmaniosi viscerale antropologica è causata da leishmaniosi complesse di L. donovani; nei pazienti sono interessati fegato, milza, linfonodi, midollo osseo e apparato digerente.
Immunità: vita persistente
Negli strisci (da tubercoli, contenuto di ulcere, punti da organi), colorati secondo Romanovsky-Giemsa, si trovano piccole leishmaniosi (amastigoti) di forma ovale intracellulare. Per isolare una coltura pura del patogeno, l'inoculazione viene effettuata su terreno NNN: incubazione per 3 settimane. I metodi sierologici non sono abbastanza specifici. L'uso di RIF, IFA è possibile.
Il test di allergia cutanea per la TOS alla leishmanina è utilizzato negli studi epidemiologici sulla leishmaniosi.
Trattamento: Per la leishmaniosi viscerale vengono utilizzati antimonio e diamidine (pentamidina). Con la leishmaniosi cutanea - akrikhin, anfotericina.
Prevenzione: distruggi gli animali malati, combatti contro roditori e zanzare. L'immunoprofilassi della leishmaniosi cutanea viene effettuata mediante inoculazione di una coltura viva di L. major.
BIGLIETTO # 28
№ 1 Immunoglobuline, struttura e funzione.
La natura delle immunoglobuline. In risposta all'introduzione di un antigene, il sistema immunitario produce anticorpi - proteine che possono legarsi specificamente all'antigene che ha causato la loro formazione e quindi partecipare alle reazioni immunologiche. Anticorpi contro le β-globuline, cioè la frazione meno mobile delle proteine del siero del sangue nel campo elettrico. Nel corpo, le -globuline sono prodotte da cellule speciali: le plasmacellule. Le -globuline, che svolgono le funzioni di anticorpi, sono chiamate immunoglobuline e sono indicate con il simbolo Ig. Pertanto, gli anticorpi sono immunoglobuline prodotte in risposta all'introduzione di un antigene e in grado di interagire in modo specifico con lo stesso antigene.
Funzioni. La funzione primaria è l'interazione dei loro centri attivi con i loro determinanti complementari di antigeni. Una funzione secondaria è la loro capacità di:
Legare l'antigene per neutralizzarlo ed eliminarlo dal corpo, cioè per prendere parte alla formazione della protezione contro l'antigene;
Partecipare al riconoscimento di un antigene "estraneo";
Fornire la cooperazione di cellule immunocompetenti (macrofagi, linfociti T e B);
Partecipa a varie forme della risposta immunitaria (fagocitosi, funzione killer, GNT, HRT, tolleranza immunologica, memoria immunologica).
Struttura dell'anticorpo. In termini di composizione chimica, le proteine delle immunoglobuline sono glicoproteine, poiché sono costituite da proteine e zuccheri; sono costituiti da 18 amminoacidi. Hanno differenze di specie, principalmente legate all'insieme degli amminoacidi. Le loro molecole sono cilindriche e sono visibili al microscopio elettronico. Fino all'80% delle immunoglobuline ha una costante di sedimentazione di 7S; resistente ad acidi deboli, alcali, riscaldamento fino a 60 ° C. È possibile isolare le immunoglobuline dal siero del sangue con metodi fisici e chimici (elettroforesi, precipitazione isoelettrica con alcol e acidi, salatura, cromatografia di affinità, ecc.). Questi metodi sono utilizzati nella produzione per la preparazione di preparati immunobiologici.
In termini di struttura, proprietà antigeniche e immunobiologiche, le immunoglobuline si dividono in cinque classi: IgM, IgG, IgA, IgE, IgD. Le immunoglobuline M, G, A hanno sottoclassi. Ad esempio, IgG ha quattro sottoclassi (IgG, IgG 2, IgG 3, IgG 4). Tutte le classi e sottoclassi differiscono nella sequenza degli amminoacidi.
Le molecole di immunoglobuline di tutte e cinque le classi sono costituite da catene polipeptidiche: due catene pesanti H identiche e due catene leggere identiche - L, collegate da ponti disolfuro. Di conseguenza, ogni classe di immunoglobuline, ad es. M, G, A, E, D, ci sono cinque tipi di catene pesanti:? (mu),? (gamma),? (alfa),? (epsilon) e? (delta), che differiscono per antigenicità. Le catene leggere di tutte e cinque le classi sono comuni e sono di due tipi: (kappa) e? (lambda); Le catene L di immunoglobuline di varie classi possono unirsi (ricombinare) con catene H sia omologhe che eterologhe. Tuttavia, la stessa molecola può contenere solo catene L identiche (? Oppure?). Sia nelle catene H che nelle catene L c'è una regione variabile - V, in cui la sequenza di amminoacidi non è costante, e una regione costante - C con un insieme costante di amminoacidi. Nelle catene leggere e pesanti si distinguono i gruppi NH 2 e COOH-terminali.
Durante l'elaborazione? -globulina da mercaptoetanolo rompe i legami disolfuro e la molecola di immunoglobulina si scompone in catene polipeptidiche separate. Quando esposta all'enzima proteolitico papaina, l'immunoglobulina viene scissa in tre frammenti: due frammenti non cristallizzanti contenenti gruppi determinanti per l'antigene e chiamati frammenti Fab I e II, e un frammento Fc cristallizzante. I frammenti FabI e FabII sono simili nelle proprietà e nella composizione amminoacidica e differiscono dal frammento Fc; I frammenti Fab e Fc sono formazioni compatte interconnesse da regioni flessibili della catena H, grazie alle quali le molecole di immunoglobuline hanno una struttura flessibile.
Sia le catene H che le catene L hanno regioni compatte separate e collegate linearmente chiamate domini; ce ne sono 4 nella catena H e 2 nella catena L.
I centri attivi, o determinanti, che si formano nelle regioni V, occupano circa il 2% della superficie della molecola di immunoglobulina. Ogni molecola ha due determinanti relativi alle regioni ipervariabili delle catene H e L, cioè ogni molecola di immunoglobulina può legare due molecole di antigene. Pertanto, gli anticorpi sono bivalenti.
La struttura tipica della molecola dell'immunoglobulina è l'IgG. Altre classi di immunoglobuline differiscono dalle IgG per elementi aggiuntivi della loro organizzazione molecolare.
In risposta all'introduzione di qualsiasi antigene, possono essere prodotti anticorpi di tutte e cinque le classi. Di solito vengono prodotte prima le IgM, poi le IgG, il resto - poco dopo.
№ 2 L'agente eziologico della clamidia. Tassonomia. Caratteristica. Diagnostica microbiologica. Trattamento.
Tassonomia: ordine Chlamydiales, famiglia Chlamydaceae, genere Chlamydia. Il genere è rappresentato dalle specie C.trachomatis, C.psittaci, C.pneumoniae.
Le malattie causate dalla clamidia sono chiamate clamidia... Le malattie causate da C. trachomatis e C. pneumoniae sono antroponosi. La psittacosi, il cui agente eziologico è C. psittaci, è un'infezione zooantropologica.
Morfologia della Clamidia: batteri piccoli, grammo "-", sferici. Non formano spore, non ci sono flagelli e capsule. Parete cellulare: membrana a 2 strati. Hanno glicolipidi. Secondo Gram, è rosso. Il metodo di colorazione principale è secondo Romanovsky - Giemsa.
2 forme di esistenza: corpi elementari (particelle infettive inattive, esterne alla cellula); corpi reticolari (cellule interne, forma vegetativa).
Coltivazione: Può essere propagato solo nelle cellule viventi. Nel sacco vitellino degli embrioni di pollo in via di sviluppo, nel corpo di animali sensibili e nelle colture cellulari
Attività enzimatica: piccolo. Fermentano l'acido piruvico, sintetizzano i lipidi. Non è in grado di sintetizzare composti ad alta energia.
Struttura antigenica: Antigeni di tre tipi: lipopolisaccaride termostabile genere-specifico (nella parete cellulare). Rivelato con l'aiuto di RSK; antigene specie-specifico di natura proteica (nella membrana esterna). Scoprilo usando il RIF; antigene variante-specifico di natura proteica.
Fattori patogeni. Le proteine della membrana esterna della clamidia sono associate alle loro proprietà adesive. Queste adesine si trovano solo nei corpi elementari. Le clamidie formano endotossine. Alcune clamidie hanno una proteina da shock termico che può indurre reazioni autoimmuni.
Resistenza... Alta a vari fattori ambientali. Resistente alle basse temperature, asciugante. Sensibile al calore.
C. trachomatis è un agente eziologico delle malattie del sistema genito-urinario, degli occhi e del tratto respiratorio umano.
Il tracoma è una malattia infettiva cronica caratterizzata da danni alla congiuntiva e alla cornea degli occhi. Antroponosi. Si trasmette per contatto in casa.
Patogenesi: colpisce la mucosa degli occhi. Penetra nell'epitelio della congiuntiva e della cornea, dove si moltiplica, distruggendo le cellule. Si sviluppa cheratocongiuntivite follicolare.
Diagnostica: esame del raschiamento dalla congiuntiva. Nelle cellule colpite, quando colorate secondo Romanovsky-Giemsa, si trovano inclusioni citoplasmatiche di colore viola, situate vicino al nucleo - il piccolo corpo di Provachek. Per rilevare uno specifico antigene della clamidia nelle cellule colpite, vengono utilizzati anche RIF ed ELISA. A volte ricorrono alla coltivazione del tracoma da clamidia in embrioni di pollo o colture cellulari.
Trattamento: antibiotici (tetraciclina) e immunostimolanti (interferone).
Prevenzione: Non specifico.
La clamidia urogenitale è una malattia a trasmissione sessuale. Questa è una malattia infettiva acuta / cronica, caratterizzata da una lesione predominante del tratto genito-urinario.
L'infezione umana avviene attraverso le mucose del tratto genitale. Il principale meccanismo di infezione è il contatto, la via di trasmissione è sessuale.
Immunità: cellulare, con siero di anticorpi infetti - specifici. Dopo una malattia, non si forma.
Diagnostica: Per le malattie degli occhi viene utilizzato un metodo batterioscopico: le inclusioni intracellulari vengono rilevate nei raschiati dall'epitelio della congiuntiva. RIF viene utilizzato per rilevare l'antigene della clamidia nelle cellule colpite. In caso di danno al tratto genito-urinario, può essere applicato un metodo biologico basato sull'infezione con il materiale di prova (raschiature dell'epitelio dall'uretra, dalla vagina) della coltura cellulare.
RIF, ELISA è in grado di rilevare gli antigeni della clamidia nel materiale di prova. Metodo sierologico - per la rilevazione di IgM contro C. trachomatis nella diagnosi di polmonite nei neonati.
Trattamento. antibiotici (azitromicina dal gruppo dei macrolidi), immunomodulatori, eubiotici.
Profilassi... Solo non specifico (trattamento dei pazienti), igiene personale.
Il linfogranuloma venereo è una malattia a trasmissione sessuale caratterizzata da danni ai genitali e ai linfonodi regionali. Il meccanismo dell'infezione è il contatto, la via di trasmissione è sessuale.
Immunità: immunità persistente, cellulare e umorale.
Diagnostica: Materiale per la ricerca: pus, biopsia dei linfonodi colpiti, siero sanguigno. Metodo batterioscopico, biologico (coltivazione nel sacco vitellino di un embrione di pollo), sierologico (RSK con sieri accoppiati è positivo) e allergologico (test intradermico con allergene della clamidia).
Trattamento... Gli antibiotici sono macrolidi e tetracicline.
Profilassi: Non specifico.
C. pneumoniae è l'agente eziologico della clamidia respiratoria, causa di bronchite e polmonite acute e croniche. Antroponosi. Infezione - da goccioline trasportate dall'aria. Entrano nei polmoni attraverso il tratto respiratorio superiore. Causano infiammazione.
Diagnostica: impostazione di RSK per la rilevazione di anticorpi specifici (metodo sierologico). Per l'infezione primaria, viene preso in considerazione il rilevamento delle IgM. Il RIF viene anche utilizzato per rilevare l'antigene della clamidia e la PCR.
Trattamento: Viene effettuato con l'aiuto di antibiotici (tetracicline e macrolidi).
Profilassi: Non specifico.
C. psittaci è l'agente eziologico della psittacosi, una malattia infettiva acuta caratterizzata da danni ai polmoni, al sistema nervoso e agli organi parenchimali (fegato, milza) e intossicazione.
Zooantroposi. Le fonti di infezione sono gli uccelli. Il meccanismo di infezione è aerogeno, la via di trasmissione è aerea. L'agente eziologico è attraverso il muco. membrane dyhata. vie, nell'epitelio dei bronchi, alveoli, moltiplica, infiammazione.
Diagnostica: Materiale per la ricerca: sangue, espettorato del paziente, siero di sangue per la ricerca sierologica.
Viene utilizzato un metodo biologico: la coltivazione della clamidia nel sacco vitellino di un embrione di pollo, in coltura cellulare. Metodo sierologico. Applicare RSK, RPGA, ELISA, utilizzando il siero di sangue accoppiato del paziente. Test allergologico intradermico con ornitina.
Trattamento: antibiotici (tetracicline, macrolidi).
BIGLIETTO #29
No. 1 L'agente eziologico della difterite. Tassonomia e caratteristiche. Corinebatteri condizionatamente patogeni. Diagnostica microbiologica. Rivelare l'immunità anatossica. Profilassi e trattamento specifici.
La difterite è una malattia infettiva acuta caratterizzata da infiammazione fibrinosa nella faringe, laringe, meno spesso in altri organi e sintomi di intossicazione. Il suo agente eziologico è il Corynebacterium diphtheriae.
Tassonomia. Corynebacterium appartiene alla divisione Firmicutes, genere Corynebacterium.
Proprietà morfologiche e tintoriali. L'agente eziologico della difterite è caratterizzato dal polimorfismo: si trovano bastoncini sottili, leggermente ricurvi (i più comuni), coccoidi e ramificati. I batteri si trovano spesso ad angolo l'uno rispetto all'altro. Non formano spore, non hanno flagelli e in molti ceppi viene rilevata una microcapsula. Una caratteristica è la presenza di grani di volutina alle estremità del bastone (determina la forma clavate). L'agente eziologico della difterite secondo Gram si colora positivamente.
Beni culturali. Anaerobico opzionale, ottimale. temperatura. Il microbo cresce su appositi terreni nutritivi, ad esempio su terreno di Clauberg (agar sangue-tellurite), su cui il bacillo difterico produce 3 tipi di colonie: a) grandi, grigie, con bordi irregolari, striature radiali, che ricordano le margherite; b) piccolo, nero, convesso, con bordi lisci; c) simile al primo e al secondo.
A seconda delle proprietà culturali ed enzimatiche, esistono 3 varianti biologiche di C. diphtheriae: gravis, mitis e intermedio intermedius.
Attività enzimatica. Alto. Fermentano glc e maltosio per formare acido, non decompongono saccarosio, lattosio e mannitolo. Non producono ureasi e non formano indolo. Produce l'enzima cistinasi, che scinde la cisteina in H 2 S. Forma catalasi, succinato deidrogenasi.
Proprietà antigeniche. Gli antigeni O sono antigeni polisaccaridici termostabili situati in profondità nella parete cellulare. Antigeni K: superficie, termolabile, grigio-specifico. Con l'aiuto dei sieri all'antigene K C.diph. sono divisi in sierotipi (58).
Fattori patogeni. Un'esotossina che interrompe la sintesi proteica e quindi danneggia le cellule del miocardio, le ghiandole surrenali, i reni e i gangli nervosi. La capacità di produrre esotossina è dovuta alla presenza nella cellula di un profago portatore del gene tox responsabile della formazione della tossina. Enzimi di aggressione - ialuronidasi, neuraminidasi. Anche la microcapsula appartiene ai fattori di patogenicità.
Resistenza. Resistente all'essiccamento, alle basse temperature, quindi può essere conservato su oggetti in acqua per diversi giorni.
Epidemiologia. La fonte della difterite - persone malate L'infezione si verifica più spesso attraverso le vie respiratorie. La principale via di trasmissione è aerea, è anche possibile una via di contatto - attraverso biancheria, stoviglie.
Patogenesi. La porta d'ingresso dell'infezione sono le mucose della faringe, del naso, delle vie respiratorie, degli occhi, dei genitali, della superficie della ferita. Nel sito del cancello d'ingresso si osserva un'infiammazione fibrinosa, si forma un film caratteristico, che è appena separato dai tessuti sottostanti. I batteri secernono l'esotossina che entra nel flusso sanguigno - si sviluppa la tossinamia. La tossina colpisce il miocardio, i reni, le ghiandole surrenali e il sistema nervoso.
Clinica. Esistono varie forme di difterite in localizzazione: difterite della faringe, che si osserva nell'85-90% dei casi, difterite del naso, della laringe, degli occhi, degli organi genitali esterni, della pelle, delle ferite. Il periodo di incubazione va da 2 a 10 giorni. La malattia inizia con un aumento della temperatura corporea, dolore durante la deglutizione, comparsa di un film sulle tonsille, aumento dei linfonodi. Si sviluppa edema della laringe, groppa difterica, che può portare all'asfissia e alla morte. Altre gravi complicazioni che possono anche causare la morte sono la miocardite tossica, la paralisi dei muscoli respiratori.
Immunità. Dopo la malattia - immunità antitossica persistente e intensa. Di particolare importanza è la formazione di anticorpi contro il frammento B. Neutralizzano l'istotossina difterica, impedendo a quest'ultima di attaccarsi alla cellula. Immunità antibatterica - non soppressa, specifica per il grigio
Diagnostica microbiologica... Con l'aiuto di un tampone, al paziente vengono prelevati un film e un muco dalla faringe e dal naso. Per una diagnosi preliminare, è possibile utilizzare un metodo batterioscopico. Il metodo diagnostico principale è batteriologico: inoculazione su terreno Clauber II (agar tellurito sanguigno), su terreno sierico denso per rilevare la produzione di cistinasi, su terreno Giss, su terreno per determinare la tossicità del patogeno. L'identificazione intraspecifica consiste nel determinare il bio e il sierotipo. Per la rilevazione accelerata della tossina difterica, vengono utilizzati i seguenti: RNGA (reazione di emoglutinazione indiretta) con anticorpo eritrociti diagnosticum, reazione di neutralizzazione anticorpale (la presenza di una tossina è giudicata dall'effetto di prevenzione dell'emoaggutinazione); RIA (saggio radioimmunologico) ed ELISA (saggio immunoassorbente legato all'enzima).
Trattamento. Il principale metodo di terapia è la somministrazione immediata di uno specifico siero liquido antidifterico antitossico per cavalli. Antidifterite immunoglobulinica umana per somministrazione endovenosa.
Vaccini associati: DTP (vaccino assorbito tetano-pertosse), ADS (tossoide assorbito difterite-tetano).
№ 2 Classi di immunoglobuline, loro caratteristiche.
In termini di struttura, proprietà antigeniche e immunobiologiche, le immunoglobuline si dividono in cinque classi: IgM, IgG, IgA, IgE, IgD.
Immunoglobuline di classe G. L'isotipo G costituisce la maggior parte delle Ig sieriche. Rappresenta il 70-80% di tutte le Ig sieriche, mentre il 50% è contenuto nel liquido interstiziale. Il contenuto medio di IgG nel siero del sangue di un adulto sano è di 12 g / l. L'emivita delle IgG è di 21 giorni.
L'IgG è un monomero, ha 2 centri di legame all'antigene (può legare contemporaneamente 2 molecole di antigene, quindi la sua valenza è 2), un peso molecolare di circa 160 kDa e una costante di sedimentazione di 7S. Esistono i sottotipi Gl, G2, G3 e G4. È sintetizzato dai linfociti B maturi e dalle plasmacellule. È ben definito nel siero del sangue al picco della risposta immunitaria primaria e secondaria.
Ha un'alta affinità. IgGl e IgG3 legano il complemento e G3 è più attivo di Gl. L'IgG4, come l'IgE, ha citofilia (tropismo, o affinità, per mastociti e basofili) ed è coinvolta nello sviluppo di reazioni allergiche di tipo I. Nelle reazioni immunodiagnostiche, le IgG possono manifestarsi come anticorpo incompleto.
Passa facilmente attraverso la barriera placentare e fornisce immunità umorale al neonato nei primi 3-4 mesi di vita. È anche in grado di essere secreto nella secrezione delle mucose, incluso nel latte per diffusione.
Le IgG forniscono neutralizzazione, opsonizzazione ed etichettatura dell'antigene, innescano la citolisi mediata dal complemento e la citotossicità cellulo-mediata anticorpo-dipendente.
Immunoglobulina classe M. La molecola più grande di tutte le Ig. Questo è un pentamero con 10 centri di legame all'antigene, cioè la sua valenza è 10. Il suo peso molecolare è di circa 900 kDa, la costante di sedimentazione è 19S. Ci sono sottotipi Ml e M2. Le catene pesanti della molecola IgM, a differenza di altri isotipi, sono costituite da 5 domini. L'emivita delle IgM è di 5 giorni.
Rappresenta circa il 5-10% di tutte le Ig sieriche. Il contenuto medio di IgM sieriche di un adulto sano è di circa 1 g/L. Questo livello nell'uomo viene raggiunto all'età di 2-4 anni.
L'IgM è filogeneticamente l'immunoglobulina più antica. È sintetizzato dai precursori e dai linfociti B maturi. Si forma all'inizio della risposta immunitaria primaria, è anche il primo ad essere sintetizzato nel corpo del neonato - è determinato già alla 20a settimana di sviluppo intrauterino.
Possiede un'elevata avidità, l'attivatore del complemento più efficace nel modo classico. Partecipa alla formazione del siero e dell'immunità umorale secretoria. Essendo una molecola polimerica contenente una catena J, può formare una forma secretoria ed essere secreta nella secrezione delle mucose, compreso il latte. La maggior parte degli anticorpi normali e delle isoagglutinine sono IgM.
Non attraversa la placenta. Il rilevamento di anticorpi specifici dell'isotipo M nel siero del sangue di un neonato indica un'ex infezione intrauterina o un difetto placentare.
Le IgM forniscono neutralizzazione, opsonizzazione ed etichettatura dell'antigene, innescano la citolisi mediata dal complemento e la citotossicità cellulo-mediata anticorpo-dipendente.
Immunoglobulina di classe A. Esiste in forme sieriche e secretorie. Circa il 60% di tutte le IgA è contenuto nelle secrezioni delle mucose.
IgA sierica: Rappresenta circa il 10-15% di tutte le Ig sieriche. Il siero sanguigno di un adulto sano contiene circa 2,5 g/l di IgA, il massimo si raggiunge all'età di 10 anni. L'emivita delle IgA è di 6 giorni.
L'IgA è un monomero, ha 2 centri leganti l'antigene (cioè 2-valente), un peso molecolare di circa 170 kDa e una costante di sedimentazione di 7S. Ci sono sottotipi A1 e A2. È sintetizzato dai linfociti B maturi e dalle plasmacellule. È ben definito nel siero del sangue al picco della risposta immunitaria primaria e secondaria.
Ha un'alta affinità. Potrebbe essere un anticorpo incompleto. Non lega il complemento. Non passa attraverso la barriera placentare.
L'IgA fornisce neutralizzazione, opsonizzazione ed etichettatura dell'antigene, innesca la citotossicità cellulo-mediata anticorpo-dipendente.
IgA secretoria: A differenza del siero, la sIgA secretoria esiste in forma polimerica come di- o trimero (4 o 6-valente) e contiene J- e S-peptidi. Peso molecolare 350 kDa e oltre, costante di sedimentazione 13S e oltre.
È sintetizzato dai linfociti B maturi e dai loro discendenti - plasmacellule della specializzazione corrispondente solo all'interno delle mucose ed è secreto nelle loro secrezioni. Il volume di produzione può raggiungere i 5 g al giorno. Il pool di slgA è considerato il più abbondante nel corpo: la sua quantità supera il contenuto totale di IgM e IgG. Non viene rilevato nel siero del sangue.
La forma secretoria delle IgA è il principale fattore dell'immunità locale umorale specifica delle mucose del tratto gastrointestinale, del sistema genito-urinario e delle vie respiratorie. Grazie alla catena a S è resistente all'azione delle proteasi. slgA non attiva il complemento, ma si lega efficacemente agli antigeni e li neutralizza. Previene l'adesione dei microbi alle cellule epiteliali e la generalizzazione dell'infezione all'interno delle mucose.
Immunoglobulina di classe E. Chiamata anche reagina. Il contenuto nel siero del sangue è estremamente basso - circa 0,00025 g / l. Il rilevamento richiede l'uso di metodi diagnostici speciali altamente sensibili. Peso molecolare - circa 190 kDa, costante di sedimentazione - circa 8S, monomero. Rappresenta circa lo 0,002% di tutte le Ig circolanti. Questo livello viene raggiunto dai 10-15 anni di età.
È sintetizzato dai linfociti B maturi e dalle plasmacellule principalmente nel tessuto linfoide dell'albero broncopolmonare e del tratto gastrointestinale.
Non lega il complemento. Non passa attraverso la barriera placentare. Ha una pronunciata citofilia - tropismo per mastociti e basofili. Partecipa allo sviluppo dell'ipersensibilità di tipo immediato - reazione di tipo I.
Immunoglobuline di classe D. Non ci sono molte informazioni sulle Ig di questo isotipo. È contenuto quasi completamente nel siero del sangue ad una concentrazione di circa 0,03 g/l (circa lo 0,2% del numero totale di Ig circolanti). L'IgD ha un peso molecolare di 160 kDa e una costante di sedimentazione di 7S, monomero.
Non lega il complemento. Non passa attraverso la barriera placentare. È un recettore per i precursori dei linfociti B.
BIGLIETTO #30
No. 1 L'agente eziologico dell'amebiasi. Tassonomia. Caratteristica. Diagnostica microbiologica. Trattamento specifico.
Tassonomia: tipo Sarcomastigophorae, sottotipo Sarcodina, classe Lobosia, ordine Amoebida.
Morfologia: Ci sono due fasi dello sviluppo del patogeno: vegetativo e cistico. La fase vegetativa ha diverse forme: vegetativa grande (tessuto), vegetativa piccola; forma precistica, simile alla forma luminale, che forma cisti.
La cisti (fase di riposo) ha una forma ovale. Una cisti matura contiene 4 nuclei. La forma luminale è inattiva, vive nel lume del colon superiore come un innocuo commensale, nutrendosi di batteri e detriti.
Una grande forma vegetativa si forma, in determinate condizioni, da una piccola forma vegetativa. È il più grande, forma pseudopodi e ha movimento. Può fagocitare gli eritrociti. Trovato in feci fresche con amebiasi.
Coltivazione: su supporti ricchi di sostanze nutritive.
Resistenza: Al di fuori del corpo, le forme vegetative del patogeno muoiono rapidamente (entro 30 minuti). Le cisti sono persistenti nell'ambiente e persistono nelle feci e nell'acqua. Nel cibo, nella verdura e nella frutta, le cisti persistono per diversi giorni. Muoiono quando vengono bolliti.
Epidemiologia: Amebiasi - malattia antroponosa; la fonte dell'invasione è una persona. Il meccanismo di trasmissione è oro-fecale. L'infezione si verifica quando le cisti vengono introdotte con cibo, acqua, attraverso oggetti domestici.
Patogenesi e clinica: Le cisti che entrano nell'intestino, e le forme luminali di ameba formatesi da esse, possono abitare l'intestino crasso senza causare malattie. Con una diminuzione della resistenza del corpo, le amebe vengono introdotte nella parete intestinale e si moltiplicano. Si sviluppa l'amebiasi intestinale.
I trofozoiti di forma tissutale sono mobili a causa della formazione di pseudopodi. Penetrano nella parete del colon, provocando necrosi; sono in grado di fagocitare gli eritrociti; può essere trovato nelle feci umane. Con la necrosi si formano ulcere. Clinicamente, l'amebiasi intestinale si presenta come frequenti feci molli e sanguinolente, accompagnate da febbre e disidratazione. Nelle feci si trovano pus e muco, a volte con sangue.
Le amebe con flusso sanguigno possono entrare nel fegato, nei polmoni, nel cervello, causando lo sviluppo dell'amebiasi extraintestinale.
Immunità: Instabile, principalmente il collegamento cellulare è attivato.
Diagnostica microbiologica. Il metodo principale è un esame microscopico delle feci del paziente, nonché il contenuto degli ascessi degli organi interni. Gli strisci vengono colorati con soluzione di Lugol o ematossilina. Studi sierologici (RNGA, ELISA, RSK): il più alto titolo di anticorpi nel siero del sangue viene rilevato con amebiasi extraintestinale.
Trattamento: Applicare metronidazolo, furamide.
Prevenzione: identificazione e trattamento di secrezioni di cisti e portatori di amebe, effettuando misure sanitarie generali.
N. 2 Interferoni. Natura, modalità di ottenimento. Applicazione.
Gli interferoni sono glicoproteine prodotte dalle cellule in risposta a infezioni virali e altri stimoli. Bloccano la riproduzione del virus in altre cellule e partecipano all'interazione delle cellule del sistema immunitario. Esistono due gruppi sierologici di interferoni: tipo I - IFN-? e IFN - ?; Tipo II - IFN-.? Gli interferoni di tipo I hanno effetti antivirali e antitumorali, mentre l'interferone di tipo II regola una risposta immunitaria specifica e una resistenza non specifica.
L'interferone (leucociti) è prodotto dai leucociti trattati con virus e altri agenti. ?-interferone (fibroblasto) è prodotto da fibroblasti trattati con virus.
L'IFN di tipo I, legandosi alle cellule sane, le protegge dai virus. L'effetto antivirale dell'IFN di tipo I può essere dovuto anche al fatto che è in grado di inibire la proliferazione cellulare, interferendo con la sintesi degli amminoacidi.
IFN-? prodotta da linfociti T e NK. Stimola l'attività dei linfociti T e B, dei monociti/macrofagi e dei neutrofili. Induce l'apoptosi di macrofagi attivati, cheratinociti, epatociti, cellule del midollo osseo, cellule endoteliali e sopprime l'apoptosi dei monociti periferici e dei neuroni infetti da herpes.
L'interferone leucocitario geneticamente modificato viene prodotto nei sistemi procariotici (Escherichia coli). Biotecnologia per ottenere interferone leucocitario comprende le seguenti fasi: 1) trattamento della massa leucocitaria con induttori di interferone; 2) isolamento della miscela di mRNA dalle cellule trattate; 3) ottenere DNA complementare totale mediante trascrittasi inversa; 4) inserimento del cDNA nel plasmide di Escherichia coli e suo clonaggio; 5) selezione di cloni contenenti geni di interferone; 6) inclusione nel plasmide di un forte promotore per il successo della trascrizione genica; 7) espressione del gene dell'interferone, cioè sintesi della proteina corrispondente; 8) distruzione delle cellule procariotiche e purificazione dell'interferone mediante cromatografia di affinità.
interferoni applicare per la prevenzione e il trattamento di numerose infezioni virali. Il loro effetto è determinato dalla dose del farmaco, ma alte dosi di interferone hanno un effetto tossico. Gli interferoni sono ampiamente utilizzati per l'influenza e altre malattie respiratorie acute. Il farmaco è efficace nelle prime fasi della malattia, viene applicato localmente. Gli interferoni hanno un effetto terapeutico nell'epatite B, nell'herpes e nelle neoplasie maligne.
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Le reazioni sierologiche sono designate in accordo con i fenomeni che accompagnano la formazione di un complesso antigene-anticorpo durante l'interazione di componenti con proprietà diverse. Ci sono reazioni di agglutinazione, precipitazione e lisi.
Test di agglutinazione (RA)
La reazione di agglutinazione (RA) si basa sull'uso di un antigene corpuscolare (sospensione di batteri, eritrociti sensibilizzati, particelle di lattice, ecc.), Interagendo con anticorpi specifici, a seguito del quale precipita il complesso antigene-anticorpo risultante. Questa reazione è ampiamente utilizzata nella pratica di laboratorio per la diagnosi sierologica di infezioni batteriche e per l'identificazione di microrganismi isolati.
L'AR viene utilizzato per la diagnosi di molte malattie infettive: brucellosi (reazioni di Wright e Heddleson), tularemia, leptospirosi (RAL - la reazione di agglutinazione e lisi della leptospira), listeriosi, tifo (PAP - la reazione di agglutinazione della rickettsia), shigellosi , yersiniosi e altre pseudotomie.
Reazione di agglutinazione indiretta o passiva (RIGA o RPGA).
Per la messa in scena di questa reazione vengono utilizzati eritrociti di animali (ariete, scimmia, cavie, alcuni uccelli) sensibilizzati con anticorpi o antigene, che si ottiene incubando una sospensione di eritrociti e una soluzione di antigene o siero immunitario.
I diagnostici ottenuti sulla base di eritrociti sensibilizzati con antigeni sono chiamati diagnostica degli eritrociti antigenici... Sono destinati alla determinazione degli anticorpi in diluizioni seriali di siero sanguigno, ad esempio, diagnostica della shigellosi eritrocitaria, O-diagnostica della salmonella eritrocitaria.
Di conseguenza, viene chiamata la diagnostica basata su eritrociti sensibilizzati con immunoglobuline specifiche antiquariato(immunoglobuline) diagnostici e servono a rilevare gli antigeni in vari materiali, ad esempio, l'immunoglobulina difterica diagnosticum per RIGA, che viene utilizzato per rilevare l'esotossina della difterite del corynebacterium in un mezzo nutritivo liquido seminando materiale dal naso e dall'orofaringe.
La reazione di emoagglutinazione viene utilizzata per diagnosticare sia infezioni batteriche (febbre tifoide, paratifo, dissenteria, brucellosi, peste, colera, ecc.) che virali (influenza, infezioni da adenovirus, morbillo, ecc.). RIGA supera RA in sensibilità e specificità.
Reazione di inibizione dell'emoagglutinazione (RTGA)
La reazione di inibizione dell'emoagglutinazione (RTGA) viene utilizzata per titolare gli anticorpi antivirali nei sieri di sangue, nonché per stabilire il tipo di colture virali isolate. RTGA può essere utilizzato per diagnosticare quelle infezioni virali, i cui agenti causali hanno proprietà emoagglutinanti.
Il principio del metodo è che il siero contenente anticorpi contro un tipo specifico di virus sopprime la sua attività emoagglutinante e gli eritrociti rimangono non agglutinati.
La reazione di inibizione (ritardo) dell'emoagglutinazione passiva (RTPHA).
Ci sono tre componenti coinvolti nell'RTPHA: siero immunitario, antigene (materiale di prova) ed eritrociti sensibilizzati.
Se il materiale del test contiene un antigene che reagisce specificamente con gli anticorpi del siero immunitario standard, allora li lega e con la successiva aggiunta di eritrociti sensibilizzati con un antigene omologo al siero, l'emoagglutinazione non si verifica.
RTPHA viene utilizzato per rilevare gli antigeni microbici, per la loro determinazione quantitativa, nonché per controllare la specificità dell'RPHA.
Reazione di agglutinazione al lattice (LAT)
Le particelle di lattice sono utilizzate come veicolo di anticorpi (immunoglobuline). RLA è un metodo espresso per la diagnosi di malattie infettive, tenendo conto del tempo (fino a 10 minuti) e della capacità di rilevare l'antigene in una piccola quantità del materiale di prova.
RLA è usato per indicare antigeni di Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae tipo b, Neisseria meningitidis nel liquido cerebrospinale, per rilevare streptococchi di gruppo A in tamponi faringei, per diagnosticare salmonellosi, yersiniosi e altre malattie. La sensibilità del metodo è di 1-10 ng / ml, o 10³ -10⁶ cellule batteriche in 1 µl.
Reazione di coagulazione (RCoA)
La reazione di coagglutinazione (RCoA) si basa sulla capacità della proteina A dello stafilococco di legare immunoglobuline specifiche. RCA - un metodo di diagnostica espressa - viene utilizzato per rilevare antigeni termostabili solubili nelle secrezioni umane e come parte degli immunocomplessi circolanti (CIC). La rilevazione di antigeni specifici nella CEC richiede la loro precipitazione preliminare dal siero del sangue.
Reazione di precipitazione
Nella reazione di precipitazione (RP), a seguito dell'interazione di anticorpi con antigeni solubili altamente dispersi (proteine, polisaccaridi), si formano complessi con la partecipazione del complemento - precipitati. È un test sensibile utilizzato per rilevare e caratterizzare un'ampia varietà di antigeni e anticorpi. L'esempio più semplice di un RP di alta qualità è la formazione di una banda di precipitazione opaca in una provetta al confine della stratificazione dell'antigene sul siero immunitario: la reazione di precipitazione dell'anello. Vari tipi di RP sono ampiamente utilizzati in agar semiliquido o gel di agarosio (metodo di doppia immunodiffusione, metodo di immunodiffusione radiale, immunoelettroforesi).
Reazione di fissazione del complemento (CBC)
La reazione di fissazione del complemento (CSC) si basa sul fenomeno dell'emolisi con la partecipazione del complemento, ad es. è in grado di rilevare solo anticorpi che legano il complemento.
RSK è ampiamente utilizzato per la diagnosi di molte infezioni batteriche e virali, rickettsiosi, clamidia, mononucleosi infettiva, infezioni da protozoi, elmintiasi. La CSC è una reazione sierologica complessa, in cui sono coinvolti due sistemi: il sistema indagato (siero sanguigno), rappresentato dal sistema antigene-anticorpo e complemento, ed emolitico (eritrociti di pecora + siero emolitico). Il siero emolitico è un siero di sangue inattivato dal riscaldamento di un coniglio immunizzato con eritrociti di pecora. Contiene anticorpi contro i globuli rossi di pecora.
Un risultato RSK positivo - l'assenza di emolisi - si osserva se il siero del test contiene anticorpi omologhi all'antigene. In questo caso, il complesso antigene - anticorpo formato lega il complemento e, in assenza di complemento libero, l'aggiunta del sistema emolitico non è accompagnata da emolisi. In assenza di anticorpi corrispondenti all'antigene nel siero, non si verifica la formazione di un complesso antigene-anticorpo, il complemento rimane libero e il siero provoca l'emolisi degli eritrociti, cioè la presenza di emolisi è un risultato negativo della reazione.
Yushchuk N.D., Vengerov Yu.Ya.
119. Test sierologici utilizzati per diagnosticare le infezioni virali.
Rilevazione nel siero un paziente con anticorpi contro gli antigeni del patogeno consente di diagnosticare la malattia. Gli studi sierologici vengono anche utilizzati per identificare antigeni di microbi, varie sostanze biologicamente attive, gruppi sanguigni, antigeni tissutali e tumorali, complessi immunitari, recettori cellulari, ecc.
Quando un microbo è isolato il patogeno viene identificato dal paziente studiando le sue proprietà antigeniche utilizzando sieri immunodiagnostici, cioè sieri sanguigni di animali iperimmunizzati contenenti anticorpi specifici. Questo è il cosiddetto identificazione sierologica microrganismi.
In microbiologia e immunologia, sono ampiamente utilizzati reazioni di agglutinazione, precipitazione, neutralizzazione, reazioni che coinvolgono il complemento, utilizzando anticorpi e antigeni marcati (radioimmunologico, immunodosaggio enzimatico, metodi di immunofluorescenza). Le reazioni elencate differiscono nell'effetto registrato e nella tecnica di stadiazione, tuttavia, sono tutte basate sulla reazione di interazione di un antigene con un anticorpo e vengono utilizzate per rilevare sia gli anticorpi che gli antigeni. Le reazioni immunitarie sono caratterizzate da elevata sensibilità e specificità.
Caratteristiche dell'interazione degli anticorpi con l'antigene sono alla base delle reazioni diagnostiche nei laboratori. Reazione in vitro tra antigene e anticorpo consiste in una fase specifica e non specifica. V fase specifica c'è un rapido legame specifico del sito attivo dell'anticorpo al determinante dell'antigene. poi arriva fase aspecifica - più lento, che si manifesta in fenomeni fisici visibili, ad esempio la formazione di fiocchi (fenomeno di agglutinazione) o precipitazioni sotto forma di torbidità. Questa fase richiede la presenza di determinate condizioni (elettroliti, pH ottimale dell'ambiente).
Il legame del determinante dell'antigene (epitopo) al centro attivo del frammento Fab degli anticorpi è dovuto alle forze di van der Waals, ai legami idrogeno e all'interazione idrofobica. La forza e la quantità di antigene legato dagli anticorpi dipendono dall'affinità, dall'avidità degli anticorpi e dalla loro valenza.
Alla domanda sulla diagnostica rapida:
1. La coltura isolata nella sua forma pura si presta alla diagnostica. 2. In laboratori appositamente attrezzati (è necessario ottenere l'autorizzazione) 3. Rispetto di regole rigorose quali: una stanza isolata, le necessarie tute protettive speciali, sanificazione completa obbligatoria della stanza dopo aver lavorato con l'agente patogeno, sanificazione dei ricercatori dopo la fine del opera. Metodi di diagnostica esperta. 1. Batteriologia - mezzi nutritivi politropici combinati per lo studio rapido di morph, tintore, biochimica. proprietà. Uso di nastro indicatore enzimatico, metodo elettrofisico, metodo di dischi di carta impregnati di varie sostanze (glucosio, lattosio, ecc.) 2. Fagodiagnostica. 3. Sierodiagnostica - Metodo di Mancini, reazione di precipitazione in gel secondo Ascoli, RA, RPGA. 4. Batterioscopia - RIF diretta e indiretta. Metodi di diagnostica espressa per: Colera - M.Z. Ermolyeva, distretto di immobilizzazione con siero diagnostico del colera, RIF. Tularemia - RA su vetro, RPGA Plague - tipizzazione fagica, metodo dei dischi di carta di carboidrati, RPGA. Sib.yazva - Metodo Ascoli, RIF, RPGA. Modello di crescita: ci sono tre diffusi (anaerobi facoltativi), inferiori (anaerobi obbligati) e superficiali (aerobi obbligati).
Isolamento di una coltura pura di batteri anaerobi
Nella pratica di laboratorio, dovrai spesso lavorare con microrganismi anaerobici. Sono più stravaganti nei confronti dei mezzi nutritivi rispetto agli aerobi, hanno spesso bisogno di speciali integratori per la crescita, richiedono la cessazione dell'accesso all'ossigeno durante la loro coltivazione, la loro durata di crescita è più lunga. Pertanto, lavorare con loro è più complicato e richiede una notevole attenzione da parte di batteriologi e assistenti di laboratorio.
È importante proteggere il materiale che contiene agenti patogeni anaerobici dagli effetti tossici dell'ossigeno atmosferico. Pertanto, si consiglia di prelevare materiale dai focolai di infezione purulenta durante la loro puntura con una siringa; il tempo tra il prelievo del materiale e la semina sul mezzo nutritivo dovrebbe essere il più breve possibile.
Poiché vengono utilizzati speciali mezzi nutritivi per la coltivazione di batteri anaerobici, che non dovrebbero contenere ossigeno e avere un basso potenziale redox (-20 -150 mV), nella loro composizione vengono introdotti indicatori - resazurina, blu di metilene e simili, che reagiscono a un cambiamento di questo potenziale. Con la sua crescita, le forme incolori di indicatori si rinnovano e cambiano colore: la resazurina colora il rosa medio e il blu di metilene - blu. Tali cambiamenti indicano l'impossibilità di utilizzare i mezzi per la coltivazione di microbi anaerobici.
Aiuta a ridurre il potenziale redox dell'introduzione di almeno lo 0,05% di agar nel terreno, che, aumentando la sua viscosità, aiuta a ridurre l'apporto di ossigeno. Questo, a sua volta, si ottiene anche utilizzando mezzi nutritivi freschi (non oltre due ore dopo la produzione) e ridotti.
Va tenuto presente che a causa delle peculiarità del metabolismo di tipo fermentativo dei batteri anaerobi, richiedono ambienti più ricchi di nutrienti e vitamine. I più usati sono infusi cardiocerebrali ed epatici, estratti di soia e di lievito, digerito idrolitico di caseina, peptone, triptone. È indispensabile aggiungere fattori di crescita come tween-80, emina, menadione, sangue intero o emolizzato.
L'isolamento di una coltura pura di microrganismi aerobi consiste in una serie di fasi. Il primo giorno (fase 1 dello studio), il materiale patologico viene portato in un contenitore sterile (provetta, pallone, bottiglia). Viene studiato in base al suo aspetto, consistenza, colore, odore e altri segni, viene preparato uno striscio, dipinto ed esaminato al microscopio. In alcuni casi (gonorrea acuta, peste), in questa fase è possibile effettuare una diagnosi precedente e, inoltre, scegliere il mezzo su cui verrà inoculato il materiale. Ha preso un ciclo batteriologico (il più delle volte usato), usando una spatola seguendo il metodo Drygalsky, con un tampone di garza di cotone. Le tazze vengono chiuse, capovolte, firmate con una matita speciale e poste in un termostato alla temperatura ottimale (37°C) per 18-48 anni. L'obiettivo di questa fase è ottenere colonie isolate di microrganismi. Tuttavia, a volte per accumulare il materiale, viene seminato su terreni nutritivi liquidi.
Gli strisci vengono preparati da colonie sospette, colorati con il metodo Gram per studiare le proprietà morfologiche e tintoriali dei patogeni e i batteri mobili vengono esaminati in una goccia "sospesa" o "schiacciata". Questi segni hanno un valore diagnostico estremamente grande nella caratterizzazione di alcuni tipi di microrganismi. I resti delle colonie indagate, accuratamente, senza toccarne altre, vengono rimossi dalla superficie del terreno e inoculati su slant agar o su settori di piastre Petri con terreno nutritivo per ottenere una coltura pura. Le provette oi piatti di coltura vengono posti in un termostato alla temperatura ottimale per 18-24 ore.
Sui terreni di coltura liquidi, i batteri possono anche crescere in modi diversi, sebbene le caratteristiche delle manifestazioni di crescita siano più povere rispetto a quelle densi.
I batteri possono causare un annebbiamento diffuso del mezzo, mentre il suo colore potrebbe non cambiare o acquisire il colore di un pigmento. Questo modello di crescita è più spesso osservato nella maggior parte dei microrganismi anaerobi facoltativi.
A volte si forma un sedimento sul fondo della provetta. Può essere friabile, omogeneo, viscoso, viscido, ecc. L'ambiente sopra di esso può rimanere trasparente o diventare torbido. Se i microbi non formano pigmenti, il precipitato ha un colore siruvato-bilio o giallastro. Di norma, i batteri anaerobici crescono in un rango simile.
La crescita parziale si manifesta con la formazione di scaglie, grani attaccati alle pareti interne della provetta. Allo stesso tempo, il mezzo rimane trasparente.
I batteri aerobici tendono a crescere superficialmente. Spesso si forma una pellicola delicata, incolore o bluastra sotto forma di un rivestimento appena percettibile sulla superficie, che scompare quando il mezzo viene scosso o agitato. Il film può essere umido, spesso, avere un fascio, una consistenza viscida e aderire al cappio, si estende dietro di esso. Tuttavia, esiste anche un film denso, secco e fragile, il cui colore dipende dal pigmento prodotto dai microrganismi.
Se necessario, viene effettuato uno striscio, colorato, esaminato al microscopio e i microrganismi vengono inoculati con un'ansa sulla superficie di un mezzo nutritivo denso per ottenere colonie isolate.
Il terzo giorno (fase 3 dello studio), viene studiata la natura della crescita di una coltura pura di microrganismi e viene eseguita la sua identificazione.
Innanzitutto, prestano attenzione alle peculiarità della crescita dei microrganismi sul terreno e fanno uno striscio, dipingendolo con il metodo Gram, per verificare la purezza della coltura. Se si osservano al microscopio batteri dello stesso tipo di morfologia, dimensione e proprietà tintoriali (capacità di dipingere), si conclude che la coltura è pura. In alcuni casi, già dietro l'aspetto e le caratteristiche della loro crescita, è possibile trarre una conclusione sul tipo di agenti patogeni isolati. La determinazione del tipo di batteri per le loro caratteristiche morfologiche è chiamata identificazione morfologica. La determinazione del tipo di agenti patogeni per le loro caratteristiche culturali è chiamata identificazione culturale.
Tuttavia, questi studi non sono sufficienti per trarre una conclusione definitiva sul tipo di microbi isolati. Pertanto, studiano le proprietà biochimiche dei batteri. Sono abbastanza diversi.
Molto spesso vengono studiate proprietà saccarolitiche, proteolitiche, peptolitiche, emolitiche, la formazione di enzimi di decarbossilasi, ossidasi, catalasi, plasmocoagulasi, DNasi, fibrinolisina, riduzione di nitrati a nitriti e simili. Per questo, esistono mezzi nutritivi speciali che vengono inoculati con microrganismi (fila variegata di Giss, MPB, siero di latte cagliato, latte, ecc.).
La determinazione del tipo di agente patogeno in base alle sue proprietà biochimiche è chiamata identificazione biochimica.
METODI DI COLTIVAZIONE E ISOLAMENTO DI UNA COLTURA BATTERICA PURA Per una coltivazione di successo, oltre a terreni correttamente selezionati e seminati correttamente, sono necessarie condizioni ottimali: temperatura, umidità, aerazione (apporto d'aria). La coltivazione degli anaerobi è più difficile degli aerobi; vengono utilizzati vari metodi per rimuovere l'aria dal mezzo nutritivo. L'isolamento di alcuni tipi di batteri (coltura pura) dal materiale di prova, che, di regola, contiene una miscela di vari microrganismi, è una delle fasi di qualsiasi studio batteriologico. Una coltura pura di microbi è ottenuta da una colonia microbica isolata. Quando una coltura pura viene isolata dal sangue (emocoltura), viene preliminarmente "coltivata" in un mezzo liquido: 10-15 ml di sangue sterile vengono inoculati in 100-150 ml di un mezzo liquido. Il rapporto tra sangue inoculato e terreno di coltura 1:10 non è casuale: è così che si ottiene la diluizione del sangue (il sangue non diluito ha un effetto dannoso sui microrganismi). Fasi di isolamento di una coltura pura di batteri Stadio I (materiale nativo) Microscopia (idea approssimativa della microflora). Semina su terreno nutritivo solido (ottenimento di colonie). Stadio II (colonie isolate) Studio delle colonie (proprietà culturali dei batteri). Esame microscopico di microbi in uno striscio colorato (proprietà morfologiche dei batteri). Inoculare su agar nutriente per isolare la coltura pura. Fase III (coltura pura) Determinazione delle proprietà culturali, morfologiche, biochimiche e di altro tipo per l'identificazione della coltura batterica IDENTIFICAZIONE DEI BATTERI L'identificazione delle colture batteriche isolate viene effettuata studiando la morfologia dei batteri, le loro caratteristiche culturali, biochimiche e altre inerenti a ciascuna specie .
La diagnostica sierologica basata sulla reazione antigene-anticorpo può essere utilizzata per determinare sia quelli che altri e svolge un ruolo nel determinare l'eziologia dell'infezione virale anche con risultati negativi dell'isolamento del virus.
Il successo della diagnostica sierologica dipende dalla specificità della reazione e dal rispetto delle condizioni temporali per il prelievo di sangue, necessarie affinché il corpo sintetizza gli anticorpi.
Nella maggior parte dei casi vengono utilizzati sieri di sangue accoppiati, prelevati ad intervalli di 2-3 settimane. Una reazione positiva è considerata un aumento di almeno 4 volte del titolo anticorpale. È noto che gli anticorpi più specifici appartengono alle classi IgG e IgM, che vengono sintetizzati in momenti diversi del processo infettivo. In questo caso, gli anticorpi IgM appartengono a quelli precoci e i test utilizzati per determinarli vengono utilizzati per la diagnosi precoce (è sufficiente esaminare un siero). Gli anticorpi IgG vengono sintetizzati più tardi e persistono a lungo.
Per la tipizzazione dei virus, viene utilizzato il PH, per la diagnostica specifica del gruppo, ad esempio l'infezione da adenovirus, usano reazione di fissazione del complemento(RSK). I più comuni sono reazione di inibizione dell'emoagglutinazione(RTGA), RSK, RIF, reazione passiva e emoagglutinazione passiva inversa(RPGA, ROPGA), varie versioni di ELISA, che quasi ovunque hanno sostituito la RIA, che è uguale ad essa in sensibilità.
RTGA utilizzato per diagnosticare malattie causate da virus emoagglutinanti. Si basa sul legame anticorpale del siero del paziente con il virus standard aggiunto. L'indicatore della reazione sono gli eritrociti, agglutinati dal virus (formazione di un caratteristico "ombrello") in assenza di anticorpi specifici e depositati sul fondo non agglutinati se presenti.
RSKè uno dei test sierologici tradizionali e viene utilizzato per diagnosticare molte infezioni virali. Due sistemi prendono parte alla reazione: anticorpi del siero del paziente + virus standard ed eritrociti di montone + anticorpi contro di essi, nonché complemento titolato. Quando gli anticorpi e il virus corrispondono, questo complesso si lega al complemento e la lisi degli eritrociti di pecora non avviene (reazione positiva). Con un CSC negativo, il complemento favorisce la lisi degli eritrociti. Lo svantaggio di questo metodo è la sua sensibilità insufficientemente elevata e la difficoltà di standardizzare i reagenti.
Per tenere conto dell'importanza delle CSC, oltre che della RTGA, è necessaria la titolazione di sieri appaiati, cioè presi all'inizio della malattia e durante il periodo di convalescenza.
gioco di ruolo- agglutinazione di eritrociti (o sfere di polistirene) sensibilizzati con antigeni virali in presenza di anticorpi. Qualsiasi virus può essere assorbito sugli eritrociti, indipendentemente dalla presenza o assenza di attività emoagglutinante. A causa della presenza di reazioni non specifiche, i sieri vengono studiati a una diluizione di 1:10 o più.
RNGA- agglutinazione di eritrociti sensibilizzati con anticorpi specifici in presenza di antigeni virali. Il ROPHA più diffuso è stato ottenuto quando l'antigene HBs è stato rilevato sia nei pazienti che nei donatori di sangue.
SE anche il metodo è come ELISA, utilizzato per la determinazione degli anticorpi nel siero. L'ELISA a scopo diagnostico sta diventando sempre più importante e diffuso. L'antigene virale viene adsorbito sulla fase solida (il fondo dei pozzetti delle piastre di polistirene o delle sfere di polistirene). Quando vengono aggiunti gli anticorpi corrispondenti presenti nel siero, si legano agli antigeni adsorbiti. La presenza degli anticorpi desiderati viene rilevata utilizzando anticorpi (ad esempio umani) coniugati a un enzima (perossidasi). L'aggiunta del substrato e la reazione substrato-enzima danno il colore. L'ELISA può essere utilizzato anche per determinare gli antigeni. In questo caso, gli anticorpi vengono adsorbiti sulla fase solida.
Anticorpi monoclonali. Nell'ultimo decennio sono stati compiuti grandi progressi nella diagnosi delle infezioni virali, quando, con lo sviluppo della ricerca di ingegneria genetica, è stato sviluppato un sistema per ottenere anticorpi monoclonali. Pertanto, la specificità e la sensibilità dei metodi diagnostici per la determinazione degli antigeni virali sono state nettamente aumentate. La ristretta specificità dei monocloni, che rappresentano una piccola frazione di proteine virali che potrebbero non essere presenti nel materiale clinico, viene superata con successo utilizzando diversi anticorpi monoclonali contro vari determinanti virali.
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