एचआईवी संक्रमण
एचआईवी संक्रमण मानव इम्युनोडेफिशिएंसी वायरस (एचआईवी) के कारण होने वाली बीमारी है, जो लिम्फोसाइटों, मैक्रोफेज, तंत्रिका ऊतक की कोशिकाओं में लंबे समय तक बनी रहती है, जिसके परिणामस्वरूप शरीर की प्रतिरक्षा और तंत्रिका तंत्र को धीरे-धीरे प्रगतिशील क्षति होती है, जो माध्यमिक द्वारा प्रकट होती है। संक्रमण, ट्यूमर, सबस्यूट एन्सेफलाइटिस और अन्य रोग परिवर्तन।
प्रेरक एजेंट टी और 2 प्रकार के मानव इम्यूनोडेफिशियेंसी वायरस हैं - एचआईवी -1, एचआईवी -2 (एचआईवी-आई, एचआईवी -2, मानव इम्यूनोडेफिशियेंसी वायरस, प्रकार I, 11) - रेट्रो वायरस के परिवार से संबंधित हैं, उपपरिवार धीमे वायरस से... विरियन गोलाकार कण होते हैं जिनका व्यास 100-140 एनएम होता है। वायरल कण में एक बाहरी फॉस्फोलिपिड झिल्ली होती है जिसमें एक निश्चित आणविक भार के साथ ग्लाइकोप्रोटीन (संरचनात्मक प्रोटीन) होता है, जिसे किलोडाल्टन में मापा जाता है। एचआईवी -1 में, ये जीपी 160, जीपी 120, जीपी 41 हैं। नाभिक को कवर करने वाले वायरस के आंतरिक लिफाफे को एक ज्ञात आणविक भार के साथ प्रोटीन द्वारा भी दर्शाया जाता है - पी 17, पी 24, पी 55 (एचआईवी -2 में जीपी होता है) 140, जीपी 105, जीपी 36, पी 16, पी 25, पी 55)।
एचआईवी जीनोम में आरएनए और एक रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस (रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस) एंजाइम शामिल हैं। रेट्रोवायरस जीनोम को होस्ट सेल जीनोम से जोड़ने के लिए, डीएनए को पहले वायरल आरएनए टेम्प्लेट पर रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस का उपयोग करके संश्लेषित किया जाता है। फिर प्रोवायरस डीएनए को मेजबान सेल के जीनोम में डाला जाता है। एचआईवी में एक स्पष्ट एंटीजेनिक परिवर्तनशीलता है, जो इन्फ्लूएंजा वायरस से काफी अधिक है।
मानव शरीर में, एचआईवी का मुख्य लक्ष्य टी-लिम्फोसाइट्स हैं, जो सतह पर सबसे बड़ी संख्या में सीडी 4 रिसेप्टर्स ले जाते हैं। एचआईवी अपने आरएनए के पैटर्न का अनुसरण करते हुए रिवर्टेज की मदद से कोशिका में प्रवेश करने के बाद, वायरस डीएनए को संश्लेषित करता है, जो मेजबान सेल (टी-लिम्फोसाइट्स) के आनुवंशिक तंत्र में एकीकृत होता है और एक प्रोवायरस अवस्था में जीवन के लिए वहां रहता है। टी-हेल्पर लिम्फोसाइट्स के अलावा, मैक्रोफेज, बी-लिम्फोसाइट्स प्रभावित होते हैं। न्यूरोग्लिया, आंतों के म्यूकोसा और कुछ अन्य कोशिकाओं की कोशिकाएं। टी-लिम्फोसाइट्स (सीडी 4 कोशिकाओं) की संख्या में कमी का कारण न केवल वायरस का प्रत्यक्ष साइटोपैथिक प्रभाव है, बल्कि असंक्रमित कोशिकाओं के साथ उनका संलयन भी है। एचआईवी संक्रमण वाले रोगियों में टी-लिम्फोसाइटों की हार के साथ, सभी वर्गों के इम्युनोग्लोबुलिन के संश्लेषण में वृद्धि के साथ बी-लिम्फोसाइटों का एक पॉलीक्लोनल सक्रियण होता है, विशेष रूप से आईजीजी और आईजीए, और बाद में प्रतिरक्षा के इस हिस्से की कमी। प्रणाली। प्रतिरक्षा प्रक्रियाओं का बिगड़ा हुआ विनियमन अल्फा-इंटरफेरॉन, बीटा-2-माइक्रोग्लोबुलिन ए के स्तर में वृद्धि और इंटरल्यूकिन -2 के स्तर में कमी से भी प्रकट होता है। प्रतिरक्षा प्रणाली की शिथिलता के परिणामस्वरूप, विशेष रूप से जब टी-लिम्फोसाइट्स (सीडी 4) की संख्या 1 μl रक्त में 400 या उससे कम कोशिकाओं तक कम हो जाती है, तो अनियंत्रित एचआईवी प्रतिकृति के लिए स्थितियां उत्पन्न होती हैं, जिसमें विभिन्न प्रकार के विषाणुओं की संख्या में उल्लेखनीय वृद्धि होती है। शरीर के वातावरण। प्रतिरक्षा प्रणाली के कई हिस्सों की हार के परिणामस्वरूप, एचआईवी से संक्रमित व्यक्ति विभिन्न संक्रमणों के रोगजनकों के खिलाफ रक्षाहीन हो जाता है। इम्यूनोसप्रेशन बढ़ने की लॉबी में, गंभीर प्रगतिशील बीमारियां विकसित होती हैं जो सामान्य रूप से काम कर रहे प्रतिरक्षा प्रणाली वाले व्यक्ति में नहीं होती हैं। इन रोगों को WHO द्वारा AIDS मार्कर (संकेतक) के रूप में परिभाषित किया गया है।
पहला समूह - ऐसे रोग जो केवल गंभीर इम्युनोडेफिशिएंसी (सीडी 4 की गिनती 200 से नीचे) में निहित हैं। एचआईवी-विरोधी एंटीबॉडी या एचआईवी एंटीजन की अनुपस्थिति में नैदानिक ​​निदान किया जाता है।
दूसरा समूह ऐसे रोग हैं जो गंभीर इम्युनोडेफिशिएंसी की पृष्ठभूमि के खिलाफ और कुछ मामलों में इसके बिना विकसित होते हैं। इसलिए, ऐसे मामलों में, निदान की प्रयोगशाला पुष्टि आवश्यक है।

सामग्री की विषय तालिका "वायरस का पता लगाने के तरीके। मायकोसेस (फंगल रोग) के निदान के तरीके। प्रोटोजोआ का पता लगाने के तरीके।":

वायरल संक्रमण के निदान के लिए सीरोलॉजिकल तरीके। रक्तगुल्म का निषेध। वायरल हस्तक्षेप द्वारा साइटोपैथिक प्रभाव का निषेध। प्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस। इम्यूनोइलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी।

बहुमत के साथ विषाणु संक्रमणप्रतिरक्षा प्रतिक्रिया विकसित करने के लिए इस्तेमाल किया निदान... सेलुलर प्रतिक्रियाओं का आमतौर पर संक्रामक एजेंटों या उनके द्वारा संक्रमित लक्ष्य कोशिकाओं के खिलाफ लिम्फोसाइटों के साइटोटोक्सिसिटी के परीक्षणों में मूल्यांकन किया जाता है, या लिम्फोसाइटों की विभिन्न एजी और माइटोगेंस का जवाब देने की क्षमता निर्धारित की जाती है। व्यावहारिक प्रयोगशालाओं के काम में, सेलुलर प्रतिक्रियाओं की गंभीरता शायद ही कभी निर्धारित की जाती है। एंटीवायरल एटी की पहचान करने के तरीके अधिक व्यापक हो गए हैं।

PH पर आधारित है साइटोपैथोजेनिक प्रभाव का दमनविशिष्ट एटी के साथ वायरस को मिलाने के बाद। अज्ञात वायरस को ज्ञात वाणिज्यिक एंटीसेरा के साथ मिलाया जाता है और उपयुक्त ऊष्मायन के बाद, सेल मोनोलेयर में पेश किया जाता है। कोशिका मृत्यु की अनुपस्थिति संक्रामक एजेंट और ज्ञात एटी के बीच एक विसंगति को इंगित करती है।

रक्तगुल्म का निषेध

RTGA का उपयोग वायरस की पहचान करने के लिए किया जाता हैविभिन्न एरिथ्रोसाइट्स को एकत्र करने में सक्षम। इसके लिए, रोगज़नक़ युक्त संस्कृति माध्यम को एक ज्ञात वाणिज्यिक एंटीसेरम के साथ मिलाया जाता है और सेल संस्कृति में पेश किया जाता है। ऊष्मायन के बाद, संस्कृति की हेमग्लूटीनेशन की क्षमता निर्धारित की जाती है और इसकी अनुपस्थिति में, एंटीसेरम के साथ वायरस की असंगति के बारे में एक निष्कर्ष निकाला जाता है।

वायरल हस्तक्षेप द्वारा साइटोपैथिक प्रभाव का निषेध

विषाणुओं के हस्तक्षेप के कारण साइटोपैथिक प्रभाव के निषेध की प्रतिक्रियाएक रोगज़नक़ की पहचान करने के लिए उपयोग किया जाता है जो संवेदनशील कोशिकाओं की संस्कृति में एक ज्ञात साइटोपैथोजेनिक वायरस के साथ हस्तक्षेप करता है। इसके लिए, वाणिज्यिक सीरम को अध्ययन के तहत वायरस युक्त संस्कृति माध्यम में पेश किया जाता है (उदाहरण के लिए, रूबेला वायरस के लिए, यदि यह संदेह है), दूसरी संस्कृति को इनक्यूबेट और संक्रमित किया जाता है; 1-2 दिनों के बाद, एक ज्ञात साइटोपैथोजेनिक वायरस (उदाहरण के लिए, कोई ईसीएचओ वायरस) इसमें पेश किया जाता है। एक साइटोपैथोजेनिक प्रभाव की उपस्थिति में, यह निष्कर्ष निकाला जाता है कि पहली संस्कृति लागू एटी के अनुरूप वायरस से संक्रमित थी।

प्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस

अन्य परीक्षणों में, सबसे आम पाया गया प्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस प्रतिक्रिया(सबसे तेज़, सबसे संवेदनशील और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य)। उदाहरण के लिए, साइटोपैथोजेनिक प्रभाव द्वारा सीएमवी की पहचान के लिए कम से कम 2-3 सप्ताह की आवश्यकता होती है, और लेबल मोनोक्लोनल एटी का उपयोग करते समय, 24 घंटों के बाद पहचान संभव है। फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके जांच करें (आपको संक्रमित कोशिकाओं के फ्लोरोसेंस की उपस्थिति का पता लगाने की अनुमति देता है)।

इम्यूनोइलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी

इम्यूनोइलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी(पिछली विधि का एक एनालॉग) इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (उदाहरण के लिए, विभिन्न प्रकार के हर्पीज वायरस) द्वारा पता लगाए गए विभिन्न प्रकार के वायरस की पहचान करने की अनुमति देता है, जो रूपात्मक विशेषताओं के आधार पर नहीं किया जा सकता है। एंटीसेरा के बजाय, विभिन्न तरीकों से लेबल किए गए एटी का उपयोग पहचान के लिए किया जाता है, लेकिन विधि की जटिलता और उच्च लागत इसके आवेदन को सीमित करती है।

13. स्पाइरोकेट्स, उनकी आकृति विज्ञान और जैविक गुण। मनुष्यों के लिए रोगजनक प्रजाति।

14. रिकेट्सिया, उनकी आकृति विज्ञान और जैविक गुण। संक्रामक विकृति विज्ञान में रिकेट्सिया की भूमिका।

15. माइकोप्लाज्मा की आकृति विज्ञान और अल्ट्रास्ट्रक्चर। मनुष्यों के लिए रोगजनक प्रजाति।

16. क्लैमाइडिया, आकृति विज्ञान और अन्य जैविक गुण। पैथोलॉजी में भूमिका।

17. कवक, उनकी आकृति विज्ञान और जीव विज्ञान की विशेषताएं। टैक्सोनॉमी के सिद्धांत। मनुष्यों में कवक के कारण होने वाले रोग।

18. प्रोटोजोआ, उनकी आकृति विज्ञान और जीव विज्ञान की विशेषताएं। टैक्सोनॉमी के सिद्धांत। मनुष्यों में प्रोटोजोआ के कारण होने वाले रोग।

19. वायरस की आकृति विज्ञान, अवसंरचना और रासायनिक संरचना। वर्गीकरण के सिद्धांत।

20. कोशिका के साथ वायरस की परस्पर क्रिया। जीवन चक्र के चरण। वायरस की दृढ़ता और लगातार संक्रमण की अवधारणा।

21. वायरल संक्रमण के प्रयोगशाला निदान के सिद्धांत और तरीके। वायरस की खेती के तरीके।

24. जीवाणुओं के जीनोम की संरचना। मोबाइल आनुवंशिक तत्व, बैक्टीरिया के विकास में उनकी भूमिका। जीनोटाइप और फेनोटाइप की अवधारणा। परिवर्तनशीलता के प्रकार: फेनोटाइपिक और जीनोटाइपिक।

25. जीवाणुओं के प्लास्मिड, उनके कार्य और गुण। जेनेटिक इंजीनियरिंग में प्लास्मिड का उपयोग।

26. आनुवंशिक पुनर्संयोजन: परिवर्तन, पारगमन, संयुग्मन।

27. जेनेटिक इंजीनियरिंग। नैदानिक, रोगनिरोधी और चिकित्सीय तैयारी प्राप्त करने के लिए आनुवंशिक इंजीनियरिंग विधियों का उपयोग।

28. प्रकृति में रोगाणुओं का प्रसार। मिट्टी, जल, वायु, इसके अध्ययन के तरीके के माइक्रोफ्लोरा। स्वच्छता संकेतक सूक्ष्मजीवों के लक्षण।

29. मानव शरीर का सामान्य माइक्रोफ्लोरा, शारीरिक प्रक्रियाओं और विकृति विज्ञान में इसकी भूमिका। डिस्बिओसिस की अवधारणा। सामान्य माइक्रोफ्लोरा की बहाली के लिए तैयारी: यूबायोटिक्स (प्रोबायोटिक्स)।

31. संक्रमण के प्रकट होने के रूप। बैक्टीरिया और वायरस की दृढ़ता। रिलैप्स, रीइन्फेक्शन, सुपरिनफेक्शन की अवधारणा।

32. संक्रामक प्रक्रिया के विकास की गतिशीलता, इसकी अवधि।

33. संक्रामक प्रक्रिया में सूक्ष्मजीव की भूमिका। रोगजनकता और पौरुष। विषाणु के मापन की इकाइयाँ। रोगजनकता के कारकों की अवधारणा।

34. ओ.वी. द्वारा रोगजनकता कारकों का वर्गीकरण। बुखारिन। रोगजनक कारकों के लक्षण।

35. प्रतिरक्षा की अवधारणा। प्रतिरक्षा के प्रकार।

36. संक्रमण के खिलाफ शरीर के गैर-विशिष्ट सुरक्षात्मक कारक। आई की भूमिका मेचनिकोव प्रतिरक्षा के सेलुलर सिद्धांत के गठन में।

39. इम्युनोग्लोबुलिन, उनकी आणविक संरचना और गुण। इम्युनोग्लोबुलिन के वर्ग। प्राथमिक और माध्यमिक प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया।

40. Jayle और Coombs के अनुसार अतिसंवेदनशीलता का वर्गीकरण। एलर्जी की प्रतिक्रिया के चरण।

41. तत्काल अतिसंवेदनशीलता। घटना के तंत्र, नैदानिक ​​​​महत्व।

42. एनाफिलेक्टिक शॉक और सीरम बीमारी। घटना के कारण। तंत्र। उनकी चेतावनी।

43. विलंबित प्रकार की अतिसंवेदनशीलता। त्वचा एलर्जी परीक्षण और कुछ संक्रामक रोगों के निदान में उनका उपयोग।

44. एंटीवायरल, एंटिफंगल, एंटीट्यूमर, ट्रांसप्लांट इम्युनिटी की विशेषताएं।

45. क्लिनिकल इम्यूनोलॉजी की अवधारणा। मानव प्रतिरक्षा स्थिति और इसे प्रभावित करने वाले कारक। प्रतिरक्षा स्थिति का आकलन: उनके निर्धारण के लिए मुख्य संकेतक और तरीके।

46. ​​प्राथमिक और माध्यमिक इम्युनोडेफिशिएंसी।

47. इन विट्रो में एक एंटीबॉडी के साथ प्रतिजन की बातचीत। नेटवर्क संरचनाओं का सिद्धांत।

48. समूहन की प्रतिक्रिया। अवयव, तंत्र, सेटिंग के तरीके। आवेदन।

49. Coombs प्रतिक्रिया। तंत्र। अवयव। आवेदन।

50. निष्क्रिय रक्तगुल्म की प्रतिक्रिया। तंत्र। अवयव। आवेदन।

51. रक्तगुल्म के निषेध की प्रतिक्रिया। तंत्र। अवयव। आवेदन।

52. वर्षा की प्रतिक्रिया। तंत्र। अवयव। सेटिंग के तरीके। आवेदन।

53. बाध्यकारी पूरक की प्रतिक्रिया। तंत्र। अवयव। आवेदन।

54. एंटीटॉक्सिन के साथ विष के बेअसर होने की प्रतिक्रिया, कोशिका संवर्धन में और प्रयोगशाला पशुओं के शरीर में विषाणुओं का निष्प्रभावीकरण। तंत्र। अवयव। सेटिंग के तरीके। आवेदन।

55. इम्यूनोफ्लोरेसेंस की प्रतिक्रिया। तंत्र। अवयव। आवेदन।

56. इम्यूनोसे विश्लेषण। इम्युनोब्लॉटिंग। तंत्र। अवयव। आवेदन।

57. टीके। परिभाषा। टीकों का आधुनिक वर्गीकरण। वैक्सीन की तैयारी के लिए आवश्यकताएँ।

59. वैक्सीन प्रोफिलैक्सिस। मारे गए बैक्टीरिया और वायरस से टीके। खाना पकाने के सिद्धांत। मारे गए टीकों के उदाहरण. संबद्ध टीके। मारे गए टीकों के फायदे और नुकसान।

60. आणविक टीके: टॉक्सोइड्स। प्राप्त करना। संक्रामक रोगों की रोकथाम के लिए विषाक्त पदार्थों का उपयोग। टीकों के उदाहरण।

61. आनुवंशिक रूप से इंजीनियर टीके। प्राप्त करना। आवेदन। फायदे और नुकसान।

62. वैक्सीन थेरेपी। औषधीय टीकों की अवधारणा। प्राप्त करना। आवेदन। कारवाई की व्यवस्था।

63. डायग्नोस्टिक एंटीजेनिक ड्रग्स: डायग्नोस्टिकम, एलर्जेंस, टॉक्सिन्स। प्राप्त करना। आवेदन।

67. इम्युनोमोड्यूलेटर की अवधारणा। परिचालन सिद्धांत। आवेदन।

69. कीमोथेरेपी दवाएं। कीमोथेरेपी सूचकांक की अवधारणा। कीमोथेरेपी दवाओं के मुख्य समूह, उनके जीवाणुरोधी क्रिया का तंत्र।

71. एंटीबायोटिक संवेदनशीलता का निर्धारण करने के तरीके

71. सूक्ष्मजीवों की दवा प्रतिरोध और इसकी घटना का तंत्र। सूक्ष्मजीवों के अस्पताल उपभेदों की अवधारणा। दवा प्रतिरोध को दूर करने के तरीके।

72. संक्रामक रोगों के सूक्ष्मजीवविज्ञानी निदान के तरीके।

73. टाइफाइड और पैराटाइफाइड बुखार के प्रेरक कारक। वर्गीकरण। विशेषता। सूक्ष्मजीवविज्ञानी निदान। विशिष्ट रोकथाम और उपचार।

74. एस्चेरिचियोसिस के प्रेरक एजेंट। वर्गीकरण। विशेषता। स्वास्थ्य और रोग में एस्चेरिचिया कोलाई की भूमिका। सूक्ष्मजीवविज्ञानी निदान। इलाज।

75. शिगेलोसिस के कारक एजेंट। वर्गीकरण। विशेषता। सूक्ष्मजीवविज्ञानी निदान। इलाज।

76. साल्मोनेलोसिस के प्रेरक एजेंट। वर्गीकरण। विशेषता। सूक्ष्मजीवविज्ञानी निदान। विशिष्ट रोकथाम और उपचार।

77. हैजा के प्रेरक कारक। वर्गीकरण। विशेषता। सूक्ष्मजीवविज्ञानी निदान। विशिष्ट रोकथाम और उपचार।

78. स्टेफिलोकोसी। वर्गीकरण। विशेषता। सूक्ष्मजीवविज्ञानी निदान। विशिष्ट रोकथाम और उपचार।

79. स्ट्रेप्टोकोकी। वर्गीकरण। विशेषता। सूक्ष्मजीवविज्ञानी निदान। इलाज।

80. मेनिंगोकोकी। वर्गीकरण। विशेषता। सूक्ष्मजीवविज्ञानी निदान। विशिष्ट रोकथाम और उपचार।

81. गोनोकोकस। वर्गीकरण। विशेषता। सूक्ष्मजीवविज्ञानी निदान। इलाज।

82. तुलारेमिया का प्रेरक एजेंट। वर्गीकरण। विशेषता। सूक्ष्मजीवविज्ञानी निदान। विशिष्ट रोकथाम और उपचार।

83. एंथ्रेक्स का प्रेरक एजेंट। वर्गीकरण। विशेषता। सूक्ष्मजीवविज्ञानी निदान। विशिष्ट रोकथाम और उपचार।

84. ब्रुसेलोसिस का प्रेरक एजेंट। वर्गीकरण। विशेषता। सूक्ष्मजीवविज्ञानी निदान। विशिष्ट रोकथाम और उपचार।

85. प्लेग का प्रेरक एजेंट। वर्गीकरण। विशेषता। सूक्ष्मजीवविज्ञानी निदान। विशिष्ट रोकथाम और उपचार।

86. अवायवीय गैस संक्रमण के प्रेरक कारक। वर्गीकरण। विशेषता। सूक्ष्मजीवविज्ञानी निदान। विशिष्ट रोकथाम और उपचार।

87. बोटुलिज़्म का प्रेरक एजेंट। वर्गीकरण। विशेषता। सूक्ष्मजीवविज्ञानी निदान। विशिष्ट रोकथाम और उपचार।

88. टेटनस का प्रेरक एजेंट। वर्गीकरण। विशेषता। सूक्ष्मजीवविज्ञानी निदान। विशिष्ट रोकथाम और उपचार।

89. गैर-बीजाणु बनाने वाले अवायवीय। वर्गीकरण। विशेषता। सूक्ष्मजीवविज्ञानी निदान। इलाज।

91. काली खांसी और पैरापर्टुसिस के कारक एजेंट। वर्गीकरण। विशेषता। सूक्ष्मजीवविज्ञानी निदान। विशिष्ट रोकथाम और उपचार।

92. तपेदिक के प्रेरक एजेंट। वर्गीकरण। विशेषता। सूक्ष्मजीवविज्ञानी निदान। विशिष्ट रोकथाम और उपचार।

93. एक्टिनोमाइसेट्स। वर्गीकरण। विशेषता। सूक्ष्मजीवविज्ञानी निदान। इलाज।

94. रिकेट्सियोसिस के प्रेरक एजेंट। वर्गीकरण। विशेषता। सूक्ष्मजीवविज्ञानी निदान। विशिष्ट रोकथाम और उपचार।

क्लैमाइडिया के 95. प्रेरक एजेंट। वर्गीकरण। विशेषता। सूक्ष्मजीवविज्ञानी निदान। इलाज।

96. उपदंश का प्रेरक एजेंट। वर्गीकरण। विशेषता। सूक्ष्मजीवविज्ञानी निदान। इलाज।

97. लेप्टोस्पायरोसिस का प्रेरक एजेंट। वर्गीकरण। विशेषता। सूक्ष्मजीवविज्ञानी निदान। विशिष्ट रोकथाम और उपचार।

98. आईक्सोडिक टिक-जनित बोरेलिओसिस (लाइम रोग) का प्रेरक एजेंट। वर्गीकरण। विशेषता। सूक्ष्मजीवविज्ञानी निदान। इलाज।

100. मशरूम का वर्गीकरण। विशेषता। मानव विकृति विज्ञान में भूमिका। प्रयोगशाला निदान। इलाज।

101. मायकोसेस का वर्गीकरण। सतही और गहरे मायकोसेस। कैंडिडा जीनस के खमीर जैसे मशरूम। मानव विकृति विज्ञान में भूमिका।

102. इन्फ्लूएंजा का प्रेरक एजेंट। वर्गीकरण। विशेषता। प्रयोगशाला निदान। विशिष्ट रोकथाम और उपचार।

103. पोलियोमाइलाइटिस का प्रेरक एजेंट। वर्गीकरण। विशेषता। प्रयोगशाला निदान। विशिष्ट प्रोफिलैक्सिस।

104. हेपेटाइटिस ए और ई। वर्गीकरण के कारक एजेंट। विशेषता। प्रयोगशाला निदान। विशिष्ट प्रोफिलैक्सिस।

105. टिक-जनित एन्सेफलाइटिस का प्रेरक एजेंट। वर्गीकरण। विशेषता। प्रयोगशाला निदान। विशिष्ट प्रोफिलैक्सिस।

106. रेबीज का कारक एजेंट। वर्गीकरण। विशेषता। प्रयोगशाला निदान। विशिष्ट रोकथाम और उपचार।

107. रूबेला का प्रेरक एजेंट। वर्गीकरण। विशेषता। प्रयोगशाला निदान। विशिष्ट प्रोफिलैक्सिस।

108. खसरे का कारक एजेंट। वर्गीकरण। विशेषता। प्रयोगशाला निदान। विशिष्ट प्रोफिलैक्सिस।

109. कण्ठमाला का प्रेरक एजेंट। वर्गीकरण। विशेषता। प्रयोगशाला निदान। विशिष्ट प्रोफिलैक्सिस।

110. हरपीज संक्रमण। वर्गीकरण। विशेषता। प्रयोगशाला निदान। विशिष्ट रोकथाम और उपचार।

111. चेचक का प्रेरक कारक। वर्गीकरण। विशेषता। प्रयोगशाला निदान। इलाज।

112. हेपेटाइटिस बी, सी, डी। वर्गीकरण के कारक एजेंट। विशेषता। सवारी डिब्बा। प्रयोगशाला निदान। विशिष्ट प्रोफिलैक्सिस।

113. एचआईवी संक्रमण। वर्गीकरण। रोगजनकों के लक्षण। प्रयोगशाला निदान। विशिष्ट रोकथाम और उपचार।

114. चिकित्सा जैव प्रौद्योगिकी, इसके उद्देश्य और उपलब्धियां।

118. एंटीवायरल, जीवाणुरोधी, एंटिफंगल, एंटीट्यूमर, प्रत्यारोपण प्रतिरक्षा की विशेषताएं।

119. वायरल संक्रमण का निदान करने के लिए प्रयोग किए जाने वाले सीरोलॉजिकल परीक्षण।

119. वायरल संक्रमण का निदान करने के लिए प्रयोग किए जाने वाले सीरोलॉजिकल परीक्षण।

सीरम में पता लगानारोगज़नक़ के प्रतिजनों के प्रति एंटीबॉडी वाला रोगी रोग का निदान करना संभव बनाता है। सीरोलॉजिकल अध्ययनों का उपयोग रोगाणुओं के प्रतिजनों, विभिन्न जैविक रूप से सक्रिय पदार्थों, रक्त समूहों, ऊतक और ट्यूमर प्रतिजनों, प्रतिरक्षा परिसरों, सेल रिसेप्टर्स आदि की पहचान के लिए भी किया जाता है।

जब एक सूक्ष्म जीव पृथक होता हैरोगज़नक़ की पहचान रोगी के प्रतिरक्षी गुणों का अध्ययन करके प्रतिरक्षा निदान सीरा, यानी विशिष्ट एंटीबॉडी वाले हाइपरइम्यूनाइज़्ड जानवरों के रक्त सीरा का उपयोग करके की जाती है। यह तथाकथित है सीरोलॉजिकल पहचानसूक्ष्मजीव।

सूक्ष्म जीव विज्ञान और प्रतिरक्षा विज्ञान में, उनका व्यापक रूप से उपयोग किया जाता हैएग्लूटीनेशन की प्रतिक्रियाएं, वर्षा, न्यूट्रलाइजेशन, पूरक से जुड़ी प्रतिक्रियाएं, लेबल एंटीबॉडी और एंटीजन (रेडियोइम्यूनोलॉजिकल, एंजाइम इम्यूनोसे, इम्यूनोफ्लोरेसेंस विधियों) का उपयोग करना। सूचीबद्ध प्रतिक्रियाएं रिकॉर्ड किए गए प्रभाव और स्टेजिंग की तकनीक में भिन्न होती हैं, हालांकि, वे सभी एंटीबॉडी के साथ एंटीजन की बातचीत की प्रतिक्रिया पर आधारित होती हैं और एंटीबॉडी और एंटीजन दोनों का पता लगाने के लिए उपयोग की जाती हैं। प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं को उच्च संवेदनशीलता और विशिष्टता की विशेषता है।

एंटीजन के साथ एंटीबॉडी की बातचीत की विशेषताएंप्रयोगशालाओं में नैदानिक ​​प्रतिक्रियाओं का आधार हैं। प्रतिक्रिया कृत्रिम परिवेशीयएंटीजन और एंटीबॉडी के बीच एक विशिष्ट और गैर-विशिष्ट चरण होता है। वी विशिष्ट चरणएंटीजन निर्धारक के लिए एंटीबॉडी की सक्रिय साइट का तेजी से विशिष्ट बंधन होता है। फिर आता है गैर विशिष्ट चरण -धीमी, जो दृश्यमान भौतिक घटनाओं में प्रकट होती है, उदाहरण के लिए, गुच्छे का निर्माण (एग्लूटिनेशन घटना) या मैलापन के रूप में वर्षा। इस चरण में कुछ शर्तों (इलेक्ट्रोलाइट्स, पर्यावरण का इष्टतम पीएच) की उपस्थिति की आवश्यकता होती है।

एंटीबॉडी के फैब-टुकड़े के सक्रिय केंद्र के लिए एंटीजन निर्धारक (एपिटोप) का बंधन वैन डेर वाल्स बलों, हाइड्रोजन बांड और हाइड्रोफोबिक इंटरैक्शन के कारण होता है। एंटीबॉडी द्वारा बाध्य एंटीजन की ताकत और मात्रा आत्मीयता, एंटीबॉडी की प्रबलता और उनकी संयोजकता पर निर्भर करती है।

एक्सप्रेस डायग्नोस्टिक्स के बारे में प्रश्न के लिए:

1. अपने शुद्ध रूप में अलग-थलग पड़ी संस्कृति खुद को निदान के लिए उधार देती है। 2. विशेष रूप से सुसज्जित प्रयोगशालाओं में (अनुमति प्राप्त की जानी चाहिए) 3. सख्त नियमों का अनुपालन जैसे: एक अलग कमरा, आवश्यक विशेष सुरक्षात्मक सूट, रोगज़नक़ के साथ काम करने के बाद कमरे का अनिवार्य पूर्ण स्वच्छता, अनुसंधान की समाप्ति के बाद शोधकर्ताओं का स्वच्छता काम। विशेषज्ञ निदान के तरीके। 1. बैक्टीरियोलॉजी - मॉर्फ्स, टिंक्टर, बायोकेम के तेजी से अध्ययन के लिए संयुक्त पॉलीट्रोपिक पोषक तत्व मीडिया। गुण। एंजाइम संकेतक टेप का उपयोग, इलेक्ट्रोफिजिकल विधि, विभिन्न पदार्थों (ग्लूकोज, लैक्टोज, आदि) के साथ लगाए गए पेपर डिस्क की विधि। 2. फागोडायग्नोस्टिक्स। 3. सेरोडायग्नोस्टिक्स - मैनसिनी की विधि, एस्कोली, आरए, आरपीजीए के अनुसार जेल में वर्षा की प्रतिक्रिया। 4. बैक्टीरियोस्कोपी - प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष आरआईएफ। के लिए एक्सप्रेस डायग्नोस्टिक्स के तरीके: हैजा - एमजेड एर्मोलीवा, हैजा डायग्नोस्टिक सीरम, आरआईएफ के साथ स्थिरीकरण का जिला। तुलारेमिया - कांच पर आरए, आरपीजीए प्लेग - फेज टाइपिंग, कार्बोहाइड्रेट पेपर डिस्क की विधि, आरपीजीए। Sib.yazva - एस्कोली विधि, RIF, RPGA। ग्रोथ पैटर्न: तीन डिफ्यूज़ (ऐच्छिक अवायवीय), निचला (बाध्यकारी अवायवीय) और सतही (बाध्यकारी एरोबेस) होते हैं।

अवायवीय जीवाणुओं की शुद्ध संस्कृति का अलगाव

प्रयोगशाला अभ्यास में, आपको अक्सर अवायवीय सूक्ष्मजीवों के साथ काम करना होगा। वे एरोबिक्स की तुलना में पोषक माध्यमों के लिए अधिक सनकी हैं, उन्हें अक्सर विशेष विकास की खुराक की आवश्यकता होती है, उनकी खेती के दौरान ऑक्सीजन की पहुंच की समाप्ति की आवश्यकता होती है, उनकी वृद्धि की अवधि लंबी होती है। इसलिए, उनके साथ काम करना अधिक जटिल है और इसमें बैक्टीरियोलॉजिस्ट और प्रयोगशाला सहायकों से काफी ध्यान देने की आवश्यकता है।

वायुमंडलीय ऑक्सीजन के विषाक्त प्रभाव से अवायवीय रोगजनकों वाली सामग्री की रक्षा करना महत्वपूर्ण है। इसलिए, एक सिरिंज के साथ उनके पंचर के दौरान प्युलुलेंट संक्रमण के foci से सामग्री लेने की सिफारिश की जाती है; सामग्री लेने और पोषक माध्यम पर इसे बोने के बीच का समय जितना संभव हो उतना कम होना चाहिए।

चूंकि अवायवीय जीवाणुओं की खेती के लिए विशेष पोषक माध्यम का उपयोग किया जाता है, जिसमें ऑक्सीजन नहीं होना चाहिए और कम रेडॉक्स क्षमता (-20 -150 mV) होनी चाहिए, संकेतक - रेसज़ुरिन, मेथिलीन ब्लू और इसी तरह, उनकी संरचना के लिए पेश किए जाते हैं, जो प्रतिक्रिया करते हैं इस क्षमता में बदलाव के लिए। इसकी वृद्धि के साथ, संकेतकों के रंगहीन रूपों को नवीनीकृत किया जाता है और उनका रंग बदल जाता है: रेज़ाज़ुरिन मध्यम गुलाबी, और मेथिलीन नीला - नीला दाग देता है। इस तरह के परिवर्तन अवायवीय रोगाणुओं की खेती के लिए मीडिया का उपयोग करने की असंभवता को इंगित करते हैं।

यह माध्यम में कम से कम 0.05% अगर की शुरूआत की रेडॉक्स क्षमता को कम करने में मदद करता है, जो इसकी चिपचिपाहट को बढ़ाकर ऑक्सीजन की आपूर्ति को कम करने में मदद करता है। यह, बदले में, ताजा (उत्पादन के दो घंटे बाद नहीं) और कम पोषक तत्व मीडिया का उपयोग करके भी प्राप्त किया जाता है।

यह ध्यान में रखा जाना चाहिए कि एनारोबिक बैक्टीरिया के किण्वक प्रकार के चयापचय की ख़ासियत के कारण, उन्हें पोषक तत्वों और विटामिन से भरपूर वातावरण की आवश्यकता होती है। सबसे अधिक उपयोग किए जाने वाले कार्डियो-सेरेब्रल और यकृत संक्रमण, सोया और खमीर के अर्क, कैसिइन के हाइड्रोलाइटिक डाइजेस्ट, पेप्टोन, ट्रिप्टोन हैं। ट्वीन -80, हेमिन, मेनाडायोन, संपूर्ण या हेमोलाइज्ड रक्त जैसे विकास कारकों को जोड़ना अनिवार्य है।

एरोबिक सूक्ष्मजीवों की शुद्ध संस्कृति के अलगाव में कई चरण होते हैं। पहले दिन (अध्ययन का चरण 1), रोग संबंधी सामग्री को एक बाँझ कंटेनर (टेस्ट ट्यूब, फ्लास्क, बोतल) में ले जाया जाता है। इसकी उपस्थिति, बनावट, रंग, गंध और अन्य संकेतों द्वारा इसका अध्ययन किया जाता है, एक माइक्रोस्कोप के तहत एक धब्बा तैयार किया जाता है, चित्रित किया जाता है और जांच की जाती है। कुछ मामलों में (तीव्र सूजाक, प्लेग), इस स्तर पर, पिछले निदान करना संभव है, और इसके अलावा, उस माध्यम का चयन करें जिस पर सामग्री को टीका लगाया जाएगा। यह एक कपास-धुंध झाड़ू के साथ, ड्राईगल्स्की विधि के बाद एक स्पैटुला का उपयोग करते हुए, एक बैक्टीरियोलॉजिकल लूप (सबसे अधिक बार उपयोग किया जाता है) लिया। कपों को बंद कर दिया जाता है, उल्टा कर दिया जाता है, एक विशेष पेंसिल के साथ हस्ताक्षरित किया जाता है और 18-48 वर्षों के लिए इष्टतम तापमान (37 डिग्री सेल्सियस) पर थर्मोस्टैट में रखा जाता है। इस चरण का लक्ष्य सूक्ष्मजीवों की पृथक कालोनियों को प्राप्त करना है। हालांकि, कभी-कभी सामग्री को ढेर करने के लिए, इसे तरल पोषक माध्यम पर बोया जाता है।

रोगजनकों के रूपात्मक और टिंचोरियल गुणों का अध्ययन करने के लिए ग्राम विधि का उपयोग करके दागदार संदिग्ध कॉलोनियों से स्मीयर तैयार किए जाते हैं, और मोटाइल बैक्टीरिया की जांच "फांसी" या "कुचल" बूंद में की जाती है। कुछ प्रकार के सूक्ष्मजीवों के लक्षण वर्णन में ये लक्षण अत्यंत महान नैदानिक ​​महत्व के हैं। जांच की गई कॉलोनियों के अवशेष, ध्यान से, दूसरों को छुए बिना, माध्यम की सतह से हटा दिए जाते हैं और एक शुद्ध संस्कृति प्राप्त करने के लिए एक पोषक माध्यम के साथ तिरछी अगर या पेट्री डिश के क्षेत्रों पर टीका लगाया जाता है। टेस्ट ट्यूब या कल्चर डिश को 18-24 घंटों के लिए इष्टतम तापमान पर थर्मोस्टैट में रखा जाता है।

तरल संस्कृति मीडिया पर, बैक्टीरिया भी अलग-अलग तरीकों से विकसित हो सकते हैं, हालांकि विकास की अभिव्यक्तियों की विशेषताएं घने लोगों की तुलना में खराब हैं।

बैक्टीरिया माध्यम के फैलाना बादल पैदा कर सकता है, जबकि इसका रंग नहीं बदल सकता है या वर्णक का रंग प्राप्त नहीं कर सकता है। यह वृद्धि पैटर्न सबसे अधिक ऐच्छिक अवायवीय सूक्ष्मजीवों में सबसे अधिक बार देखा जाता है।

कभी-कभी परखनली के नीचे तलछट बन जाती है। यह टेढ़ा, सजातीय, चिपचिपा, घिनौना आदि हो सकता है। इसके ऊपर का वातावरण पारदर्शी रह सकता है या बादल बन सकता है। यदि रोगाणु वर्णक नहीं बनाते हैं, तो अवक्षेप में एक सिरुवेट-बिलियम या पीला रंग होता है। एक नियम के रूप में, एनारोबिक बैक्टीरिया एक समान रैंक में बढ़ते हैं।

आंशिक वृद्धि परखनली की भीतरी दीवारों से जुड़े गुच्छे, दानों के बनने से प्रकट होती है। साथ ही माध्यम पारदर्शी रहता है।

एरोबिक बैक्टीरिया सतही रूप से विकसित होते हैं। एक नाजुक, रंगहीन या नीले रंग की फिल्म अक्सर सतह पर बमुश्किल ध्यान देने योग्य कोटिंग के रूप में बनती है, जो माध्यम के हिलने या उत्तेजित होने पर गायब हो जाती है। फिल्म नमी हो सकती है, मोटी हो सकती है, एक बंडल हो सकती है, एक पतली स्थिरता हो सकती है और लूप से चिपक सकती है, इसके पीछे फैल सकती है। हालांकि, एक घनी, सूखी, नाजुक फिल्म भी होती है, जिसका रंग सूक्ष्मजीवों द्वारा उत्पादित वर्णक पर निर्भर करता है।

यदि आवश्यक हो, तो एक स्मीयर बनाया जाता है, दाग दिया जाता है, एक माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है, और सूक्ष्मजीवों को पृथक कालोनियों को प्राप्त करने के लिए घने पोषक माध्यम की सतह पर एक लूप के साथ टीका लगाया जाता है।

तीसरे दिन (अध्ययन का चरण 3), सूक्ष्मजीवों की एक शुद्ध संस्कृति के विकास की प्रकृति का अध्ययन किया जाता है और इसकी पहचान की जाती है।

सबसे पहले, वे माध्यम पर सूक्ष्मजीवों के विकास की ख़ासियत पर ध्यान देते हैं और शुद्धता के लिए संस्कृति की जांच करने के लिए, ग्राम विधि का उपयोग करके इसे चित्रित करते हुए एक धब्बा बनाते हैं। यदि एक ही प्रकार के आकारिकी, आकार और टिंचोरियल (पेंट करने की क्षमता) गुणों के जीवाणु सूक्ष्मदर्शी के नीचे देखे जाते हैं, तो यह निष्कर्ष निकाला जाता है कि संस्कृति शुद्ध है। कुछ मामलों में, पहले से ही उनके विकास की उपस्थिति और विशेषताओं के पीछे, पृथक रोगजनकों के प्रकार के बारे में निष्कर्ष निकालना संभव है। बैक्टीरिया के प्रकार को उनकी रूपात्मक विशेषताओं के लिए निर्धारित करना रूपात्मक पहचान कहलाता है। अपनी सांस्कृतिक विशेषताओं के लिए रोगजनकों के प्रकार का निर्धारण सांस्कृतिक पहचान कहलाता है।

हालांकि, ये अध्ययन पृथक रोगाणुओं के प्रकार के बारे में अंतिम निष्कर्ष निकालने के लिए पर्याप्त नहीं हैं। इसलिए, वे बैक्टीरिया के जैव रासायनिक गुणों का अध्ययन करते हैं। वे काफी विविध हैं।

सबसे अधिक बार, saccharolytic, proteolytic, peptolytic, hemolytic गुण, decarboxylases, oxidase, catalase, plasmocoagulase, DNase, फाइब्रिनोलिसिन, नाइट्रेट्स को नाइट्राइट में कमी, और इसी तरह के एंजाइमों का अध्ययन किया जाता है। इसके लिए, विशेष पोषक माध्यम हैं जो सूक्ष्मजीवों (गिस, एमपीबी, दही मट्ठा, दूध, आदि की भिन्न पंक्ति) के साथ टीका लगाए जाते हैं।

रोगज़नक़ के प्रकार को उसके जैव रासायनिक गुणों द्वारा निर्धारित करना जैव रासायनिक पहचान कहलाता है।

शुद्ध जीवाणु संस्कृति की खेती और अलगाव के तरीके सफल खेती के लिए, सही ढंग से चयनित मीडिया और सही ढंग से बोए जाने के अलावा, इष्टतम स्थितियां आवश्यक हैं: तापमान, आर्द्रता, वातन (वायु आपूर्ति)। एरोबिक की तुलना में अवायवीय की खेती अधिक कठिन है, पोषक माध्यम से हवा को निकालने के लिए विभिन्न तरीकों का उपयोग किया जाता है। परीक्षण सामग्री से कुछ प्रकार के बैक्टीरिया (शुद्ध संस्कृति) का अलगाव, जिसमें एक नियम के रूप में, विभिन्न सूक्ष्मजीवों का मिश्रण होता है, किसी भी बैक्टीरियोलॉजिकल अध्ययन के चरणों में से एक है। रोगाणुओं की एक शुद्ध संस्कृति एक पृथक माइक्रोबियल कॉलोनी से प्राप्त की जाती है। जब एक शुद्ध संस्कृति को रक्त (रक्त संस्कृति) से अलग किया जाता है, तो इसे प्रारंभिक रूप से एक तरल माध्यम में "विकसित" किया जाता है: 10-15 मिलीलीटर बाँझ रक्त को तरल माध्यम के 100-150 मिलीलीटर में टीका लगाया जाता है। टीकाकृत रक्त और संस्कृति माध्यम 1:10 का अनुपात आकस्मिक नहीं है - इस प्रकार रक्त कमजोर पड़ने को प्राप्त किया जाता है (अधूरे रक्त का सूक्ष्मजीवों पर हानिकारक प्रभाव पड़ता है)। बैक्टीरिया की शुद्ध संस्कृति के अलगाव के चरण चरण I (मूल सामग्री) माइक्रोस्कोपी (माइक्रोफ्लोरा का मोटा विचार)। ठोस पोषक माध्यम (कॉलोनियों को प्राप्त करना) पर बुवाई। चरण II (पृथक उपनिवेश) उपनिवेशों का अध्ययन (बैक्टीरिया के सांस्कृतिक गुण)। सना हुआ धब्बा (बैक्टीरिया के रूपात्मक गुण) में रोगाणुओं की सूक्ष्म जांच। शुद्ध संस्कृति को अलग करने के लिए पोषक तत्व अगर तिरछा पर टीका लगाएं। चरण III (शुद्ध संस्कृति) बैक्टीरिया की संस्कृति की पहचान के लिए सांस्कृतिक, रूपात्मक, जैव रासायनिक और अन्य गुणों का निर्धारण बैक्टीरिया की पहचान बैक्टीरिया की आकृति विज्ञान, उनके सांस्कृतिक, जैव रासायनिक और अन्य विशेषताओं में निहित बैक्टीरिया की आकृति विज्ञान का अध्ययन करके पृथक जीवाणु संस्कृतियों की पहचान की जाती है। प्रत्येक प्रजाति।

यह विशिष्ट वायरल एंटीजन - डायग्नोस्टिकम या विशेष परीक्षण प्रणालियों का उपयोग करके सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाओं में रोगी के रक्त में एंटीवायरल एंटीबॉडी के निर्धारण पर आधारित है। वायरल संक्रमण के लिए सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाएं एक तरल माध्यम (RSK, RTGA, RNGA, RONGA, RTONGA, RIA), एक जेल (RPG, RRG, RVIEF) में या एक ठोस-चरण वाहक (उदाहरण के लिए, दीवारों पर) में की जाती हैं। प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के घटकों में से एक के निर्धारण के साथ एक पॉलीस्टायर्न प्लेट का कुआं - एंटीजन या एंटीबॉडी)। एलिसा, आईईएम, आरजीएडीएसटीओ, आरआईएफ, आरजीएडी, आरटीजीएडी जैसे ठोस चरण विधियों को जाना जाता है।

अक्सर, अधिकांश स्वस्थ लोगों के रक्त में प्राकृतिक एंटीवायरल एंटीबॉडी की उपस्थिति के कारण, वायरल संक्रमण का सीरोलॉजिकल निदान अनुसंधान पर आधारित होता है। युग्मित सीरम,एंटीबॉडी टिटर में वृद्धि को निर्धारित करने के लिए शुरुआत में और बीमारी के बीच में या स्वास्थ्य लाभ की अवधि के दौरान लिया जाता है। एंटीबॉडी टिटर में चार गुना या उससे अधिक की वृद्धि को नैदानिक ​​रूप से महत्वपूर्ण माना जाता है।

एरिथ्रोसाइट्स (RNGA, RONGA, RTONGA, RGadsTO, RRG), एंजाइम (एलिसा), रेडियोधर्मी आइसोटोप (RIA, आरपीजी) या फ्लोरोक्रोमेस (RIF) के साथ लेबलिंग पर एंटीजन या एंटीबॉडी के सोखने से सीरोलॉजिकल तरीकों की संवेदनशीलता में वृद्धि होती है। एरिथ्रोसाइट्स के लसीका के सिद्धांत का भी उपयोग किया जाता है ( सिस्टम) पूरक (आरएसके, आरआरजी) की उपस्थिति में एंटीजन और एंटीबॉडी की बातचीत में।

पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया (सीबीसी)ठंड में पूरक बंधन के एक प्रकार के रूप में (रातोंरात + 4 डिग्री सेल्सियस पर) अक्सर वायरोलॉजी में कई वायरल संक्रमणों के पूर्वव्यापी निदान के लिए और रोगियों से सामग्री में वायरस-विशिष्ट एंटीजन के निर्धारण के लिए उपयोग किया जाता है।

रेडियल हेमोलिसिस रिएक्शन (RHR) agarose में जेल पूरक की उपस्थिति में वायरस-विशिष्ट एंटीबॉडी के प्रभाव में एक एंटीजन के साथ संवेदनशील एरिथ्रोसाइट्स के हेमोलिसिस की घटना पर आधारित है और इन्फ्लूएंजा, एआरवीआई, रूबेला, कण्ठमाला, टोगावायरस संक्रमण के सीरोलॉजिकल निदान के लिए उपयोग किया जाता है।

भेड़ के एरिथ्रोसाइट्स (10% निलंबन के 0.3 मिलीलीटर) की प्रतिक्रिया तैयार करने के लिए 0.1 मिलीलीटर बिना पतला वायरल एंटीजन मिलाएं और मिश्रण को कमरे के तापमान पर 10 मिनट के लिए रखा जाता है। संवेदी एरिथ्रोसाइट्स के 0.3 मिलीलीटर और पूरक के 0.1 मिलीलीटर को 42 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 1.2% agarose में जोड़ा जाता है, मिश्रण को कांच की स्लाइड्स पर या पॉलीस्टायर्न प्लेटों के कुओं में डाला जाता है, जमे हुए agarose जेल में छेद का उपयोग करके काट दिया जाता है पंच और जांच और नियंत्रण सेरा से भरा। ग्लास या पैनल ढक्कन से ढके होते हैं और थर्मोस्टेट में 16-18 घंटे के लिए एक आर्द्र कक्ष में रखे जाते हैं। सीरम से भरे छिद्रों के चारों ओर हेमोलिसिस क्षेत्र के व्यास द्वारा प्रतिक्रिया को ध्यान में रखा जाता है। नियंत्रण में कोई हेमोलिसिस नहीं है।

प्रयोगशाला निदान

यूडीसी -078

वायरल संक्रमण के प्रयोगशाला निदान

एन.एन. टोंटी, वी.एम. स्टेखानोव

इंस्टीट्यूट ऑफ वायरोलॉजी का नाम के नाम पर रखा गया है डि इवानोव्स्की रैम्स, मॉस्को

वायरल संक्रमण का प्रयोगशाला निदान

एन.एन. नोसिक, वी.एम. स्टाचानोवा

परिचय

एंटीवायरल ड्रग्स, इम्यूनोमॉड्यूलेटर्स और विभिन्न तंत्र क्रिया वाले टीकों का उपयोग करके वायरल रोगों के उपचार और रोकथाम में अवसरों का विस्तार करने के लिए तेज और सटीक प्रयोगशाला निदान की आवश्यकता होती है। कुछ एंटीवायरल दवाओं की संकीर्ण विशिष्टता के लिए भी संक्रामक एजेंट के त्वरित और अत्यधिक विशिष्ट निदान की आवश्यकता होती है। एंटीवायरल थेरेपी की निगरानी के लिए वायरस के निर्धारण के लिए मात्रात्मक तरीकों की आवश्यकता है। रोग के एटियलजि को स्थापित करने के अलावा, महामारी विरोधी उपायों के आयोजन में प्रयोगशाला निदान महत्वपूर्ण है।

महामारी के संक्रमण के पहले मामलों का शीघ्र निदान महामारी विरोधी उपायों के समय पर कार्यान्वयन की अनुमति देता है - संगरोध, अस्पताल में भर्ती, टीकाकरण, आदि। संक्रामक रोगों के उन्मूलन के लिए कार्यक्रमों के कार्यान्वयन, जैसे कि चेचक, ने दिखाया है कि जैसे ही उन्हें लागू किया जाता है, प्रयोगशाला निदान की भूमिका बढ़ जाती है। रक्त सेवा और प्रसूति अभ्यास में प्रयोगशाला निदान एक आवश्यक भूमिका निभाता है, उदाहरण के लिए, संक्रमित दाताओं की पहचान मानव रोगक्षमपयॉप्तता विषाणु(एचआईवी), हेपेटाइटिस बी वायरस (एचबीवी), गर्भवती महिलाओं में रूबेला और साइटोमेगालोवायरस संक्रमण का निदान।

निदान के तरीके

वायरल संक्रमण के प्रयोगशाला निदान के लिए तीन मुख्य दृष्टिकोण हैं (तालिका 1, तालिका 2):

1) वायरल एंटीजन या न्यूक्लिक एसिड की उपस्थिति के लिए सामग्री की प्रत्यक्ष परीक्षा;

2) नैदानिक ​​सामग्री से वायरस का अलगाव और पहचान;

3) रोग के दौरान वायरल एंटीबॉडी में उल्लेखनीय वृद्धि की स्थापना के आधार पर सीरोलॉजिकल डायग्नोस्टिक्स।

वायरल निदान के लिए किसी भी चुने हुए दृष्टिकोण के साथ, अध्ययन के तहत सामग्री की गुणवत्ता सबसे महत्वपूर्ण कारकों में से एक है। इसलिए, उदाहरण के लिए, नमूने के प्रत्यक्ष विश्लेषण के लिए या वायरस के अलगाव के लिए, परीक्षण सामग्री रोग की शुरुआत में ही प्राप्त की जानी चाहिए, जब रोगज़नक़ अभी भी अपेक्षाकृत बड़ी मात्रा में उत्सर्जित होता है और अभी तक एंटीबॉडी से बाध्य नहीं होता है, और प्रत्यक्ष शोध के लिए नमूना मात्रा पर्याप्त होनी चाहिए। कथित बीमारी के अनुसार सामग्री का चयन करना भी महत्वपूर्ण है, यानी वह सामग्री जिसमें संक्रमण के रोगजनन के आधार पर, वायरस की उपस्थिति की संभावना सबसे बड़ी है।

सफल निदान में एक महत्वपूर्ण भूमिका उस वातावरण द्वारा निभाई जाती है जिसमें सामग्री ली जाती है, इसे कैसे ले जाया जाता है और इसे कैसे संग्रहीत किया जाता है। तो, नासॉफिरिन्जियल या रेक्टल स्मीयर, पुटिकाओं की सामग्री को एक प्रोटीन युक्त माध्यम में रखा जाता है जो वायरस की संक्रामकता के तेजी से नुकसान को रोकता है (यदि इसे अलग करने की योजना है), या एक उपयुक्त बफर में (यदि इसकी योजना बनाई गई है) न्यूक्लिक एसिड के साथ काम करने के लिए)।

नैदानिक ​​सामग्री के निदान के लिए प्रत्यक्ष तरीके

प्रत्यक्ष विधियाँ वे विधियाँ हैं जो वायरस, वायरल एंटीजन या वायरल का पता लगाती हैं न्यूक्लिक अम्ल(एनसी) सीधे नैदानिक ​​सामग्री में, यानी वे सबसे तेज (2-24 घंटे) हैं। हालांकि, रोगजनकों की कई विशिष्टताओं के कारण, प्रत्यक्ष विधियों की अपनी सीमाएं होती हैं (झूठे सकारात्मक और झूठे नकारात्मक परिणाम प्राप्त करने की संभावना)। इसलिए, उन्हें अक्सर अप्रत्यक्ष तरीकों से पुष्टि की आवश्यकता होती है।

इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (ईएम)। इस तरीके का इस्तेमाल करके आप असली वायरस का पता लगा सकते हैं। वायरस के सफल निर्धारण के लिए, नमूने में इसकी सांद्रता 1 मिली में लगभग 1 · 10 6 कण होनी चाहिए। लेकिन चूंकि रोगज़नक़ की एकाग्रता, एक नियम के रूप में, रोगियों से सामग्री में महत्वहीन है, वायरस की खोज मुश्किल है और उच्च गति सेंट्रीफ्यूजेशन का उपयोग करके इसकी प्रारंभिक वर्षा की आवश्यकता होती है, जिसके बाद नकारात्मक विपरीत होता है। इसके अलावा, EM वायरस को टाइप करने की अनुमति नहीं देता है, क्योंकि उनमें से कई के परिवार के भीतर रूपात्मक अंतर नहीं होते हैं। उदाहरण के लिए, हर्पीज सिम्प्लेक्स, साइटोमेगाली, या हर्पीस ज़ोस्टर वायरस रूपात्मक रूप से लगभग अप्रभेद्य हैं।

नैदानिक ​​​​उद्देश्यों के लिए उपयोग किए जाने वाले ईएम प्रकारों में से एक है प्रतिरक्षा इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी(IEM), जो वायरस के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी का उपयोग करता है। वायरस के साथ एंटीबॉडी की बातचीत के परिणामस्वरूप, कॉम्प्लेक्स बनते हैं, जो नकारात्मक विपरीत होने के बाद, पता लगाना आसान होता है।

आईईएम ईएम की तुलना में कुछ अधिक संवेदनशील है और इसका उपयोग उन मामलों में किया जाता है जहां वायरस का संवर्धन नहीं किया जा सकता है कृत्रिम परिवेशीय, उदाहरण के लिए, वायरल हेपेटाइटिस के रोगजनकों की खोज करते समय।

इम्यूनोफ्लोरेसेंस प्रतिक्रिया (आरआईएफ)। विधि एक डाई से बंधे एंटीबॉडी के उपयोग पर आधारित है, उदाहरण के लिए, फ्लोरेसिन आइसोथियोसाइनेट। आरआईएफ का व्यापक रूप से रोगियों की सामग्री में वायरल एंटीजन का पता लगाने और तेजी से निदान के लिए उपयोग किया जाता है।

व्यवहार में, दो RIF विकल्पों का उपयोग किया जाता है: सीधातथा अप्रत्यक्ष... पहले मामले में, वायरस के लिए डाई-लेबल एंटीबॉडी लागू होते हैं, जो संक्रमित कोशिकाओं (स्मीयर, सेल संस्कृति) पर लागू होते हैं। इस प्रकार, प्रतिक्रिया एक चरण में आगे बढ़ती है। इस पद्धति का नुकसान कई वायरस के लिए संयुग्मित विशिष्ट सीरा के एक बड़े सेट की आवश्यकता है।

आरआईएफ के अप्रत्यक्ष संस्करण में, परीक्षण सामग्री पर एक विशिष्ट सीरम लगाया जाता है, जिसके एंटीबॉडी सामग्री में निहित वायरल एंटीजन से बंधे होते हैं, और फिर एक एंटी-प्रजाति सीरम को जानवर के गामा ग्लोब्युलिन में स्तरित किया जाता है जिसमें विशिष्ट प्रतिरक्षा सीरम तैयार किया गया था, उदाहरण के लिए, एंटी-खरगोश, एंटी-हॉर्स, आदि। आरआईएफ के लाभ अप्रत्यक्ष संस्करण में केवल एक प्रकार के लेबल एंटीबॉडी की आवश्यकता होती है।

ऊपरी श्वसन पथ के श्लेष्म झिल्ली से स्मीयर-प्रिंट के विश्लेषण में तीव्र श्वसन वायरल संक्रमण के एटियलजि को जल्दी से समझने के लिए आरआईएफ पद्धति का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। नैदानिक ​​सामग्री में वायरस का प्रत्यक्ष पता लगाने के लिए आरआईएफ का सफल उपयोग तभी संभव है जब इसमें पर्याप्त रूप से बड़ी संख्या में संक्रमित कोशिकाएं हों और सूक्ष्मजीवों के साथ मामूली संदूषण हो जो गैर-विशिष्ट ल्यूमिनेसिसेंस उत्पन्न कर सकते हैं।

एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट परख (एलिसा)। वायरल एंटीजन के निर्धारण के लिए एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट एसेज़, सिद्धांत रूप में, आरआईएफ के समान हैं, लेकिन रंजक के बजाय एंजाइमों के साथ एंटीबॉडी को लेबल करने पर आधारित हैं। सबसे व्यापक रूप से उपयोग किए जाने वाले हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज और क्षारीय फॉस्फेट हैं; -galactosidase और -lactamases का भी उपयोग किया जाता है। लेबल किए गए एंटीबॉडी एंटीजन से बंधते हैं, और इस तरह के एक जटिल का पता उस एंजाइम के लिए एक सब्सट्रेट जोड़कर लगाया जाता है जिससे एंटीबॉडी संयुग्मित होते हैं। प्रतिक्रिया का अंतिम उत्पाद एक अघुलनशील अवक्षेप के रूप में हो सकता है, और फिर एक पारंपरिक प्रकाश माइक्रोस्कोप का उपयोग करके या घुलनशील उत्पाद के रूप में लेखांकन किया जाता है, जो आमतौर पर रंगीन होता है (या फ्लोरोसेंट या ल्यूमिनेस कर सकता है) और यंत्रवत दर्ज किया जाता है।

चूंकि एलिसा घुलनशील प्रतिजनों को माप सकता है, इसलिए नमूने में अक्षुण्ण कोशिकाओं की कोई आवश्यकता नहीं है और इस प्रकार विभिन्न प्रकार की नैदानिक ​​सामग्री का उपयोग किया जा सकता है।

एलिसा पद्धति का एक अन्य महत्वपूर्ण लाभ एंटीजन की मात्रा निर्धारित करने की क्षमता है, जो रोग के नैदानिक ​​पाठ्यक्रम और कीमोथेरेपी की प्रभावशीलता का आकलन करने के लिए इसका उपयोग करना संभव बनाता है। एलिसा, आरआईएफ की तरह, प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष दोनों संस्करणों में इस्तेमाल किया जा सकता है।

सॉलिड-फेज एलिसा, जो एक घुलनशील रंगीन प्रतिक्रिया उत्पाद देता है, का सबसे व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। एलिसा का उपयोग एंटीजन को निर्धारित करने के लिए किया जा सकता है (फिर एंटीबॉडी को ठोस चरण पर लागू किया जाता है - एक पॉलीस्टाइन प्लेट के कुएं के नीचे), और एंटीबॉडी निर्धारित करने के लिए (फिर एंटीजन को ठोस चरण में लागू किया जाता है)।

रेडियोइम्यूनोसे (आरआईए) ... विधि रेडियोआइसोटोप के साथ एंटीबॉडी के लेबलिंग पर आधारित है, जो वायरल एंटीजन के निर्धारण में उच्च संवेदनशीलता प्रदान करती है। विधि 80 के दशक में व्यापक हो गई, विशेष रूप से एचबीवी और अन्य असाध्य वायरस के मार्करों के निर्धारण के लिए। विधि के नुकसान में रेडियोधर्मी पदार्थों के साथ काम करने की आवश्यकता और महंगे उपकरण (गामा काउंटर) का उपयोग शामिल है।

आणविक तरीके। प्रारंभ में, वायरल जीनोम का पता लगाने के लिए शास्त्रीय विधि को एनके संकरण की एक अत्यधिक विशिष्ट विधि माना जाता था, लेकिन आजकल, वायरल जीनोम का अलगाव पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन(पीसीआर)।

न्यूक्लिक एसिड का आणविक संकरण।यह विधि डबल-स्ट्रैंडेड संरचनाओं के निर्माण के साथ डीएनए या आरएनए के पूरक किस्में के संकरण और एक लेबल का उपयोग करके उनकी पहचान पर आधारित है। इस प्रयोजन के लिए, विशेष डीएनए या आरएनए जांच का उपयोग किया जाता है, एक आइसोटोप (32 पी) या बायोटिन के साथ लेबल किया जाता है, जो डीएनए या आरएनए के पूरक किस्में का पता लगाता है। विधि के कई प्रकार हैं: - बिंदु संकरण - पृथक और विकृत एनसी को फिल्टर पर लागू किया जाता है और फिर एक लेबल जांच जोड़ी जाती है; परिणामों का संकेत - 32 पी या धुंधला का उपयोग करते समय ऑटोरैडियोग्राफी - एविडिन-बायोटिन के साथ; - धब्बा संकरण - कुल डीएनए से प्रतिबंध एंडोन्यूक्लाइजेस के साथ काटे गए एनके टुकड़ों को अलग करने की एक विधि और नाइट्रोसेल्यूलोज फिल्टर में स्थानांतरित और लेबल जांच के साथ परीक्षण किया गया; एचआईवी संक्रमण के लिए एक पुष्टिकरण परीक्षण के रूप में उपयोग किया जाता है; - संकरण बगल में- संक्रमित कोशिकाओं में एनके के निर्धारण की अनुमति देता है।

पीसीआरप्राकृतिक डीएनए प्रतिकृति के सिद्धांत पर आधारित है। विधि का सार थर्मोस्टेबल टाक डीएनए पोलीमरेज़ और दो विशिष्ट प्राइमरों - तथाकथित प्राइमरों का उपयोग करके वायरस-विशिष्ट डीएनए अनुक्रम के संश्लेषण (प्रवर्धन) के चक्रों की बार-बार पुनरावृत्ति में निहित है।

प्रत्येक चक्र में विभिन्न तापमान स्थितियों के साथ तीन चरण होते हैं। प्रत्येक चक्र में, संश्लेषित अनुभाग की प्रतियों की संख्या दोगुनी हो जाती है। नए संश्लेषित डीएनए टुकड़े अगले प्रवर्धन चक्र में नए किस्में के संश्लेषण के लिए एक टेम्पलेट के रूप में काम करते हैं, जो 25-35 चक्रों को इसके निर्धारण के लिए चयनित डीएनए क्षेत्र की पर्याप्त संख्या में प्रतियां उत्पन्न करने की अनुमति देता है, आमतौर पर agarose जेल में वैद्युतकणसंचलन द्वारा।

विधि अत्यधिक विशिष्ट और बहुत संवेदनशील है। यह आपको परीक्षण सामग्री में वायरल डीएनए की कई प्रतियों का पता लगाने की अनुमति देता है। हाल के वर्षों में, वायरल संक्रमण (हेपेटाइटिस वायरस, दाद, साइटोमेगाली, पेपिलोमा, आदि) के निदान और निगरानी के लिए पीसीआर का तेजी से उपयोग किया गया है।

मात्रात्मक पीसीआर का एक प्रकार विकसित किया गया है, जिससे प्रवर्धित डीएनए साइट की प्रतियों की संख्या निर्धारित करना संभव हो जाता है। तकनीक जटिल, महंगी है और अभी तक नियमित उपयोग के लिए पर्याप्त रूप से मानकीकृत नहीं है।

साइटोलॉजिकल तरीके वर्तमान में सीमित नैदानिक ​​​​मूल्य है, लेकिन फिर भी कई संक्रमणों के लिए इसका उपयोग किया जाना चाहिए। शव परीक्षण, बायोप्सी, स्मीयर की सामग्री की जांच की जाती है, जिसे उपयुक्त प्रसंस्करण के बाद, एक माइक्रोस्कोप के तहत दाग और विश्लेषण किया जाता है। साइटोमेगालोवायरस संक्रमण के मामले में, उदाहरण के लिए, ऊतक वर्गों में या मूत्र में, विशिष्ट विशाल कोशिकाएं - "उल्लू की आंख" पाई जाती हैं, रेबीज के मामले में - कोशिकाओं के साइटोप्लाज्म (बाबेश-नेग्री के छोटे शरीर) में समावेशन। कुछ मामलों में, उदाहरण के लिए, क्रोनिक हेपेटाइटिस के विभेदक निदान में, यकृत ऊतक की स्थिति का आकलन करना महत्वपूर्ण है।