प्रत्यक्ष Coombs परीक्षण विधि। एंटीग्लोबुलिन परीक्षण

- एक अध्ययन जो रक्त में अपूर्ण एंटी-एरिथ्रोसाइट एंटीबॉडी की सामग्री को निर्धारित करने में मदद करता है। यह एंटीग्लोबुलिन परीक्षण गर्भवती महिलाओं में एंटीबॉडी का पता लगा सकता है।

इसके अलावा, यह आरएच-संघर्ष के साथ नवजात शिशुओं में हेमोलिटिक एनीमिया का निदान करने के लिए प्रारंभिक चरणों में अनुमति देता है। यह लाल रक्त कोशिकाओं के विनाश को रोकने में मदद करता है, जो सामान्य रक्त गठन के लिए आवश्यक हैं। यह परीक्षण 1945 में रॉबर्ट कॉम्ब्स द्वारा बनाया गया था, यही कारण है कि इसे इसका नाम मिला।

Coombs का परीक्षण एक बहुमुखी अध्ययन है जो वयस्कों और बच्चों दोनों में हेमटोपोइजिस में विकारों के समय पर निदान की अनुमति देता है।

इस तरह के परीक्षण निम्न प्रकार हैं:

1. प्रत्यक्ष Coombs परीक्षण- आपको एरिथ्रोसाइट्स की सतह पर स्थित एंटीबॉडी निर्धारित करने की अनुमति देता है। आमतौर पर, ऐसा अध्ययन संदिग्ध हेमोलिसिस, ऑटोइम्यून हेमोलिटिक एनीमिया और अन्य ऑटोइम्यून बीमारियों के लिए निर्धारित है। इसके अलावा, इसे क्विनिन, पेनिसिलिन या मेथिल्डोपा पर आधारित दवाओं के साथ ड्रग थेरेपी के बाद या रक्त आधान के बाद किया जाता है। अधिक सटीक परिणाम प्राप्त करने के लिए, अध्ययन से पहले, आपको कम से कम 1 सप्ताह पहले दवाओं का सेवन पूरी तरह से बंद कर देना चाहिए।
2. अप्रत्यक्ष Coombs परीक्षण - एक परीक्षण जो प्लाज्मा में एंटी-एरिथ्रोसाइट एंटीबॉडी का पता लगा सकता है। यह आमतौर पर गर्भावस्था के दौरान और रक्त आधान से पहले किया जाता है। एंटी-एरिथ्रोसाइट एंटीबॉडी प्रतिरक्षा प्रणाली के प्रतिक्रियात्मक कार्य के दौरान या कुछ दवाओं की प्रतिक्रिया के रूप में एक व्यक्ति के रक्त में दिखाई देते हैं। अधिक सटीक अध्ययन के लिए, 2 घंटे के अंतराल पर एक बार में कई बाड़ लगाए जाते हैं।

के लिए संकेत

Coombs परीक्षण केवल तभी किया जाता है जब कोई गंभीर संकेत हो। यह एक महंगा और लंबा अध्ययन है और एक विशिष्ट परीक्षण है।

आमतौर पर, निम्नलिखित स्थितियों को इसके कार्यान्वयन के लिए संकेत माना जाता है:

1. रक्त आधान के साथ... परीक्षण आपको यह निर्धारित करने की अनुमति देता है कि क्या प्राप्तकर्ता का रक्त मानव शरीर में जड़ लेगा, साथ ही साथ दान संभव है या नहीं। इस मामले में, दाता और प्राप्तकर्ता दोनों की सामग्री की जांच करना आवश्यक है। एंटीबॉडी की प्रकृति का निर्धारण करना महत्वपूर्ण है, क्योंकि आरएच संघर्ष की पृष्ठभूमि के खिलाफ शरीर में उनकी असंगति के मामले में, प्रतिरक्षा प्रणाली नष्ट हो जाती है। इससे गंभीर बीमारियों का विकास होता है, और दुर्लभ मामलों में भी मृत्यु हो जाती है।
2. सर्जरी से पहले, जब रक्त की हानि का खतरा होता है... यह इसलिए किया जाता है ताकि चिकित्सक शरीर को बहाल करने के लिए उपयुक्त रक्त का इंजेक्शन लगा सके।
3. आरएच संवेदीकरण की पहचान करने के लिए। रीसस एक विशिष्ट प्रतिजन है जो गर्भावस्था के दौरान हर महिला के शरीर में होता है। यदि मां के पास सकारात्मक आरएच है, और पिता नकारात्मक है, या इसके विपरीत, बच्चे के लिए कोई निर्भरता नहीं है, तो वह किसी को भी विरासत में दे सकता है। यदि बच्चा मां के विपरीत रीसस प्राप्त करता है, तो संवेदीकरण का खतरा अधिक है। इस घटना को मां और बच्चे के रक्त के मिश्रण की विशेषता है। यह गर्भधारण के दौरान और जन्म के दौरान दोनों हो सकता है।

यदि गर्भवती महिला के शरीर में आरएच-संघर्ष होता है, तो मां की प्रतिरक्षा एक विदेशी शरीर के रूप में अपने भ्रूण को महसूस करना शुरू कर देती है। इस वजह से, एक बड़ा जोखिम है कि वह उस पर हमला करना शुरू कर देगा।

इस तरह के कार्यों के परिणामस्वरूप, बच्चा गंभीर विकृति विकसित कर सकता है। सबसे अधिक बार, एरिथ्रोब्लास्टोसिस होता है - एक ऐसी घटना जिसमें बच्चे का शरीर पर्याप्त संख्या में लाल रक्त कोशिकाओं का उत्पादन नहीं कर सकता है।

इसके अलावा, आरएच-संघर्ष के कारण भ्रूण की मृत्यु गर्भ में या जन्म के तुरंत बाद हो सकती है। उपचार के लिए सही दृष्टिकोण के साथ, ऐसे गंभीर परिणामों से आसानी से बचा जा सकता है।

आदर्श से विचलन

यदि परिणाम कॉम्बस प्रतिक्रिया के लिए सकारात्मक है, तो चिकित्सक निष्कर्ष निकालता है कि रक्त वाहिका में एरिथ्रोसाइट्स के एंटीबॉडी हैं। इससे पता चलता है कि रक्तदाता का रक्त रोगी के खून के अनुकूल नहीं हो सकता है।

यदि आरएच नकारात्मक रक्त के साथ एक गर्भवती महिला के शरीर में सकारात्मक परिणाम का निदान किया जाता है, तो उसके शरीर में भ्रूण के रक्त में एंटीबॉडी होते हैं।

यह आरएच-संघर्ष की बात करता है, जिसके लिए डॉक्टर की ओर से गर्भावस्था के प्रबंधन के साथ-साथ महिला से सभी निर्देशों और सिफारिशों के कार्यान्वयन के लिए एक अत्यंत सावधानीपूर्वक दृष्टिकोण की आवश्यकता होती है।

यदि एंटीबॉडी बच्चे के रक्त में मौजूद हैं, तो नवजात शिशु के हेमोलिटिक रोग का निदान किया जाता है। इस मामले में, यह निर्धारित करने के लिए एक दूसरा अध्ययन किया जाता है कि क्या गर्भवती मां के रक्त में एंटीबॉडी के साइट्रेट में वृद्धि होती है या नहीं।

Coombs के परीक्षण से संभावित जटिलताएं

Coombs परीक्षण एक काफी सुरक्षित परीक्षा है जो आपको प्रारंभिक चरणों में कई ऑटोइम्यून बीमारियों का निदान करने की अनुमति देता है। यह शायद ही कभी जटिलताओं का कारण बनता है, आमतौर पर नकारात्मक परिणाम रक्त के नमूने से जुड़े होते हैं।

वे इसमें शामिल हैं:

• त्वचा के नीचे रक्तस्राव या रक्तस्राव
• चक्कर आना और बेहोशी
• संक्रामक संदूषण

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एंटीग्लोबुलिन परीक्षण, अपूर्ण विरोधी एरिथ्रोसाइट एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए डिज़ाइन किया गया था, 1945 में Coombs, Morant, Reis द्वारा प्रस्तावित किया गया था और बाद में नाम Coombs का परीक्षण प्राप्त किया। इस पद्धति का सार यह है कि एंटीग्लोबुलिन सीरम जिसमें मानव इम्युनोग्लोबुलिन के एंटीबॉडी होते हैं, एरीथ्रोसाइट्स के साथ प्रतिक्रिया पर अपूर्ण एंटीबॉडी के साथ संवेदीकरण होता है, उनके बढ़ने की ओर जाता है।

यह निर्भर करता है कि एंटीबॉडी एरिथ्रोसाइट्स की सतह पर तय की गई हैं या रक्त प्लाज्मा में एक स्वतंत्र अवस्था में हैं, एक प्रत्यक्ष या अप्रत्यक्ष Coombs परीक्षण का उपयोग किया जाता है।

एक प्रत्यक्ष Coombs का परीक्षण उन मामलों में किया जाता है जहां यह विश्वास करने का कारण है कि अध्ययन के तहत लाल रक्त कोशिकाएं पहले से ही हैं विवो में उपयुक्त एंटीबॉडी के साथ संवेदीकरण किया गया है, अर्थात प्रतिक्रिया के पहले चरण में - एरिथ्रोसाइट्स की सतह पर एंटीबॉडी का निर्धारण - शरीर में हुआ और एंटीग्लोबुलिन सीरम के बाद के अतिरिक्त संवेदी कोशिकाओं के एकत्रीकरण का कारण बनता है।

एक अप्रत्यक्ष Coombs परीक्षण का उपयोग करते हुए, अध्ययन के तहत सीरम में मौजूद अपूर्ण एंटीबॉडी का पता लगाया जाता है। इस मामले में, प्रतिक्रिया दो चरणों में होती है। पहला चरण परीक्षण सीरम के साथ परीक्षण एरिथ्रोसाइट्स का ऊष्मायन है, जिसके दौरान परीक्षण सीरम नमूने में निहित एंटीबॉडी एरिथ्रोसाइट सतह पर तय किए जाते हैं। दूसरा चरण एंटीग्लोबुलिन सीरम के अतिरिक्त है।

अब तक, Coombs का परीक्षण व्यापक रूप से इम्यूनोपैथोलॉजिकल स्थितियों के निदान के लिए प्रयोगशाला अभ्यास में उपयोग किया जाता है, विशेष रूप से ऑटोइम्यून हेमोलिटिक एनीमिया के लिए, एरिथ्रोसाइट्स के विनाश के लिए विशेषता है, जो कि एंटीबॉडी के लिए कोशिका झिल्ली के बंधन और (या) घटकों के कारण होता है। इसकी मदद से एरिथ्रोसाइट झिल्ली पर आईजी जी (आमतौर पर आईजी जी 1 और आईजी जी 3) की उपस्थिति का पता चलता है, जो पूरक को सक्रिय कर सकता है, और कभी-कभी पूरक (सी 3 डी)। हालांकि, बीमारी की तीव्र अवधि में, एरिथ्रोसाइट्स के विनाश के कारण, जिस पर हेमोलिटिक संकट के साथ-साथ बड़ी संख्या में एंटीबॉडी तय किए गए थे, साथ ही रोग के क्रोनिक कोर्स में एंटीबॉडी की अपर्याप्त मात्रा के साथ, एक नकारात्मक प्रत्यक्ष Coombs परीक्षण मनाया जा सकता है।

यह जोर दिया जाना चाहिए कि अप्रत्यक्ष Coombs परीक्षण आधान मीडिया के व्यक्तिगत चयन के लिए सबसे अच्छा तरीका है, क्योंकि यह एरिथ्रोसाइट एंटीजन के संदर्भ में दाता और प्राप्तकर्ता की व्यक्तिगत संगतता के सबसे सटीक निर्धारण की अनुमति देता है।

स्व-प्रतिरोपण अवधि में अंगों और ऊतकों के सभी प्राप्तकर्ताओं की जांच करते समय और हेमटोपोइएटिक स्टेम सेल के प्राप्तकर्ताओं को भी प्रत्यारोपण के बाद एक प्रत्यक्ष एंटीग्लोबुलिन परीक्षण के अतिरिक्त प्रदर्शन की सिफारिश की जाती है।

इम्यूनोमैमेटोलॉजी और ट्रांसफ्यूसिओलॉजी के अलावा, एंटीग्लोबुलिन परीक्षणों का व्यापक रूप से कई रोग स्थितियों के निदान में उपयोग किया जाता है: हेमटोलॉजिकल रोगों सहित, लिम्फोप्रोलिफेरेटिव रोगों, संयोजी ऊतक के प्रणालीगत रोगों में, सोजोग्रेन रोग, क्रोनिक सक्रिय हेपेटाइटिस, आदि।

सतह एरिथ्रोसाइट एंटीजन को निर्धारित करने के लिए मेडिकल जेनेटिक्स और फोरेंसिक दवा में कोम्बस के परीक्षणों का सक्रिय रूप से उपयोग किया जाता है।

Coombs 'परीक्षण एक बल्कि श्रमसाध्य अनुसंधान पद्धति को संदर्भित करता है जिसके कार्यान्वयन में विशेष देखभाल की आवश्यकता होती है। इसका उपयोग करते समय, विशेष रूप से कमजोर सकारात्मक प्रतिक्रियाओं की व्याख्या के साथ, कुछ कठिनाइयां जुड़ी हुई हैं। यह ज्ञात है कि Coombs के परीक्षण करते समय झूठी कमजोर सकारात्मक या नकारात्मक प्रतिक्रियाएं एरिथ्रोसाइट्स के अपर्याप्त प्रभावी धुलाई का परिणाम हो सकती हैं, सीरम के निशान के साथ एंटीग्लोबुलिन अभिकर्मक का निष्प्रभावीकरण, साथ ही एक अप्रकाशित सतह के साथ संपर्क जिस पर एंटीग्लोबुलिन तय किया जा सकता है, जिससे इसकी गतिविधि खो सकती है। Coombs के परीक्षण का एक और दोष एंटीग्लोबुलिन अभिकर्मक की अस्थिरता है, जिसके उत्पादन और भंडारण में कुछ विशेषताएं हैं, जिससे एंटीग्लोबुलिन सीरम के साथ हीमोग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया को निर्धारित करना मुश्किल हो जाता है।

इसके अलावा, ए। होलबर्न, डी। वॉक एट अल द्वारा संचालित अध्ययन। दिखाया गया है कि एरिथ्रोसाइट निलंबन के पुनरुत्थान के दौरान झूठे नकारात्मक परिणामों का कारण अत्यधिक झटके हो सकता है। एंटीग्लोबुलिन परीक्षण करते समय प्रतिकूल परिणाम एंटीग्लोबुलिन अभिकर्मक में एंटी-सप्लीमेंटरी एंटीबॉडीज के मिश्रण की उपस्थिति के कारण भी हो सकते हैं, विशेष रूप से C3d, C3c, C4c और C4d पूरक घटकों के लिए, जो परीक्षण के दौरान एरिथ्रोसाइट्स की सतह पर adsorbed हैं और ऊष्मायन के दौरान पैदा होंगे।

इन कमियों को परीक्षण नमूनों की पूरी तरह से धुलाई और प्रतिक्रिया की स्थिति की निगरानी करके आसानी से समाप्त किया जा सकता है।

पिछले दशक में, अप्रत्यक्ष Coombs परीक्षण के समय को कम करने और इसकी संवेदनशीलता को बढ़ाने के लिए कम आयनिक शक्ति आइसोटोनिक समाधान (LISS) का उपयोग किया गया है।

एंटीग्लोबुलिन परीक्षणों का निर्विवाद लाभ, लेखकों की एक संख्या के अनुसार, उनकी उच्च संवेदनशीलता है, जो वैकल्पिक अनुसंधान विधियों के संकल्प से अधिक है जो कि नॉनग्लूटिनेटिंग एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए उपयोग किया जाता है।

हमने पॉलीग्लसिन, जिलेटिन और एंटीग्लोबुलिन सीरम का उपयोग करके अपूर्ण एंटीबॉडी की उपस्थिति के लिए रक्त सीरम अनुसंधान विधियों के संकल्प की तुलना की है। अध्ययन के दौरान, जिलेटिन, पॉलीग्लसिन और अप्रत्यक्ष एंटीग्लोबुलिन परीक्षणों का उपयोग करते हुए आइसोम्यून दाताओं से 140 रक्त सीरम नमूनों में अपूर्ण एंटी-डी-एंटीबॉडी के टाइटर्स की निगरानी की गई थी। इन तरीकों की स्थापना आम तौर पर स्वीकृत तरीकों के अनुसार की गई थी।

यह पाया गया कि उनके संकल्प के संदर्भ में, एंटी-डी-एंटीबॉडी के साथ एरिथ्रोसाइट्स के संवेदीकरण का पता लगाने के तरीके निम्नानुसार व्यवस्थित हैं: सबसे संवेदनशील अप्रत्यक्ष Coombs परीक्षण है, फिर जिलेटिन परीक्षण और कम से कम जानकारीपूर्ण पॉलीग्लुसीन परीक्षण है। प्रयोगों की इस श्रृंखला में प्राप्त परिणाम पूरी तरह से साहित्य डेटा के अनुरूप हैं, जो हमें यह निष्कर्ष निकालने की अनुमति देता है कि Coombs के परीक्षणों की संवेदनशीलता पर्याप्त रूप से अधिक है, जो शरीर में एंटी-एरिथेथे एंटीबॉडी की उपस्थिति के साथ उच्च स्तर की विश्वसनीयता के साथ पहचान करना संभव बनाता है जो लाल रक्त कोशिकाओं के एकत्रीकरण का कारण नहीं बनता है।

फिर भी, जब व्यवहार में Coombs के परीक्षण स्थापित करते हैं, तो ऐसे मामले होते हैं जब अपूर्ण एंटीबॉडी का पता नहीं लगाया जाता है, हालांकि रोग की नैदानिक \u200b\u200bतस्वीर या पिछले टीकाकरण उनकी संभावित उपस्थिति को इंगित करता है। ऐसे मामलों में, यह माना जा सकता है कि एंटीग्लोबुलिन सीरम एंटीबॉडी द्वारा प्रीपिलेटेड होने के लिए एंटीबॉडी की मात्रा पर्याप्त नहीं है।

इस निष्कर्ष की पुष्टि हमारे स्वयं के प्रयोग से हुई, जिसमें, कोशिकाओं के विश्लेषणात्मक माइक्रोइलेक्ट्रोफोरेसिस की विधि का उपयोग करते हुए, परीक्षण एरिथ्रोसाइट्स पर एंटी-डी एंटीबॉडी की उपस्थिति का पता लगाया गया, जो अप्रत्यक्ष रूप से Coombs के परीक्षण में पता नहीं लगाया गया था। प्रयोगों की इस श्रृंखला में, एंटीग्लोब्युलिन सीरम को एरिथ्रोसाइट्स में जोड़ा गया था जो पहले इस्तेमाल में एंटीटैलोजेनेसिस की अवधि के दौरान प्रतिरक्षित दाताओं के रक्त से प्राप्त सीरा के साथ जुड़ा हुआ था, अर्थात्। उस अवधि के दौरान जब कॉम्ब्स के परीक्षण सहित ज्ञात विधियों द्वारा एंटीबॉडी का निर्धारण नहीं किया गया था।

किए गए अध्ययनों में, एरिथ्रोसाइट्स की सतह पर अपूर्ण एंटीबॉडी की उपस्थिति के प्रमाण एंटीग्लोबुलिन सीरम के अलावा के बाद संवेदी लाल रक्त कोशिकाओं की इलेक्ट्रोफोरेटिक गतिशीलता में सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण परिवर्तन थे। यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि बाद में, अप्रत्यक्ष Coombs परीक्षण में सभी प्रतिरक्षित दाताओं के रक्त सीरम में एंटी-डी एंटीबॉडी निर्धारित किए गए थे।

गिलरंड एट अल। यह भी पता चला है कि एंटीग्लोबुलिन परीक्षणों को संवेदनशीलता की एक निश्चित सीमा द्वारा विशेषता है: एक सकारात्मक परिणाम केवल तभी नोट किया जाता है जब एक एरिथ्रोसाइट की सतह पर कम से कम 500 आईजी जी अणु निर्धारित होते हैं।

इसके अलावा, साहित्य इस बात का सबूत देता है कि कोम्बस के परीक्षण का एक संभावित नकारात्मक परिणाम एंटीबॉडी के निम्न संबंध से जुड़ा हो सकता है जो एरिथ्रोसाइट्स को संवेदनशील बनाता है, जिसके परिणामस्वरूप वे धोने के दौरान लाल कोशिकाओं की सतह से आसानी से अलग हो जाते हैं।

उपरोक्त को ध्यान में रखते हुए, यह निष्कर्ष निकाला जा सकता है कि कुछ मामलों में कूम्ब्स के परीक्षण का नकारात्मक परिणाम अभी तक एरिथ्रोसाइट्स की सतह पर तय एंटीबॉडी की अनुपस्थिति का प्रमाण नहीं है।

यह ज्ञात है कि Coombs की प्रतिक्रियाएं अत्यधिक विशिष्ट हैं और अधिकांश प्रकार के अपूर्ण एंटीबॉडी का पता लगा सकती हैं। हालांकि, जैसा कि कुछ प्रायोगिक आंकड़ों द्वारा दिखाया गया है, एंटीगलोबुलिन परीक्षण गैर-प्रतिरक्षाविज्ञानी स्थितियों में सकारात्मक हो सकते हैं। ई। मुइरहेड एट अल। फेनिलहाइड्राजाइन के प्रशासन के बाद दूसरे दिन, कुत्तों को एक पॉजिटिव कॉम्ब्स का परीक्षण करने के लिए मनाया गया। एक सकारात्मक प्रतिक्रिया की इतनी तीव्र उपस्थिति इसकी प्रतिरक्षात्मक प्रकृति के खिलाफ सबूत है और, बल्कि एरिथ्रोसाइट्स की सतह पर प्रोटीन के गैर-सोखना सोखना के साथ जुड़ा हुआ है।

एम। विलियम्स एट अल। पाया गया कि क्लैवुलैनिक एसिड भी एक सकारात्मक प्रतिक्रिया का कारण बन सकता है, जो लेखकों के अनुसार, एरिथ्रोसाइट सतह पर प्लाज्मा प्रोटीन के गैर-सोखना सोखना के साथ जुड़ा हुआ है। इसी तरह का प्रभाव सेफलोस्पोरिन एंटीबायोटिक दवाओं के साथ देखा गया था।

उपरोक्त अध्ययनों के लेखक, कोम्बस के परीक्षणों से प्राप्त सकारात्मक परिणामों की गैर-प्रतिरक्षाविज्ञानी प्रकृति पर जोर देते हैं और जोर देते हैं कि ये पदार्थ लाल रक्त कोशिकाओं के झिल्ली के संशोधन का कारण बनने में सक्षम हैं, जिसके परिणामस्वरूप एरिथ्रोसाइट्स प्रोटीन (विशेष रूप से, एल्बुमिन) को सोख सकते हैं, जो रक्त प्लाज्मा में सामान्य रूप से मौजूद होते हैं और होते नहीं हैं। एंटीबॉडी के गुण। इसके अलावा, यह संभव है कि यह सेल सतह पर adsorbed किया जा रहा है, xenobiotic है, जो सेल झिल्ली और प्लाज्मा प्रोटीन के बीच एक कड़ी के रूप में कार्य करता है।

एंटीग्लोबुलिन परीक्षण स्थापित करने के परिणामों की सही व्याख्या के लिए, परिधीय रक्त में युवा और परिपक्व एरिथ्रोसाइट्स के बीच मात्रात्मक अनुपात को भी ध्यान में रखा जाना चाहिए। यह पाया गया कि एन्थिल्रोनिन सीरम द्वारा बढ़ाया एरिथ्रोन पुनर्जनन की अवधि के दौरान शरीर से निकाले गए रेटिकुलोसाइट्स को बढ़ाया जा सकता है।

सकारात्मक प्रत्यक्ष एंटीग्लोबुलिन परीक्षा परिणाम एल। यह विभिन्न रोग स्थितियों में भी मनाया जाता है, प्रतिरक्षा प्रणाली के विकारों के साथ, भड़काऊ प्रक्रियाएं एरिथ्रोसाइट्स के झिल्ली पर विभिन्न विशिष्टता के एंटीबॉडी के अविशिष्ट सोखना के लिए अग्रणी होती हैं। इससे पता चलता है कि आईजी जी अणु एरिथ्रोसाइट्स के विशिष्ट एंटीजन के साथ बातचीत नहीं करते हैं, लेकिन केवल अध्ययन के तहत कोशिकाओं की सतह पर तय होते हैं।

यह ध्यान में रखा जाना चाहिए कि डिस्प्रोटीनीमिया के विकास या पैराप्रोटीन की उपस्थिति के कारण होने वाली बीमारियों के मामलों में एक कोम्बस परीक्षण की स्थापना करते समय, एक सकारात्मक परिणाम एरिथ्रोसाइट्स की सतह पर प्रोटीन की उपस्थिति के कारण होता है, जिसमें एंटीबॉडी के गुण नहीं होते हैं, जो प्रकृति के संबंध में एंटीग्लोबुलिन नमूनों की विशिष्टता की कमी को इंगित करता है।

इस प्रकार, जैसा कि कई अध्ययनों से पता चलता है, प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष एंटीग्लोबुलिन परीक्षणों के सकारात्मक परिणाम एंटीबॉडी की उपस्थिति का पूर्ण प्रमाण नहीं हैं, क्योंकि शरीर के आइसोसेंसिटाइजेशन या ऑटोसेंसिटाइजेशन से जुड़े विभिन्न रोग स्थितियों में सकारात्मक प्रतिक्रियाएं नहीं देखी जा सकती हैं। इसलिए, रोग की नैदानिक \u200b\u200bतस्वीर के साथ कई प्रतिरक्षाविज्ञानी तरीकों के परिणामों की तुलना केवल एक को विकासशील रोग प्रक्रिया को पूरी तरह से निर्धारित करने की अनुमति देती है।

एक नकारात्मक प्रत्यक्ष परीक्षण के साथ एक सकारात्मक अप्रत्यक्ष एंटीग्लोबुलिन परीक्षण आमतौर पर अध्ययन किए गए सीरम में मुक्त alloantibodies की उपस्थिति को इंगित करता है, जो पिछले रक्त आधान या गर्भधारण के साथ जुड़ा हुआ है।

कोम्बब्स का परीक्षण अक्सर पैरॉक्सिस्मल नोक्टेर्नल हेमोग्लोबिनुरिया के तेज होने के साथ सकारात्मक होता है; एंटी-सी 3 और एंटी-सी 3 डीजी के साथ पॉजिटिव कोम्स की परीक्षा कोल्ड एग्लूटीनिन बीमारी का एक मार्कर है।

ऐसे मामलों में जहां नवजात शिशुओं के हेमोलिटिक रोग के विकास का जोखिम अधिक है, प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष एंटीग्लोबुलिन परीक्षणों के परिणाम निदान करने के लिए बहुत महत्वपूर्ण हैं (गर्भावस्था के दौरान अक्सर) और, यदि आवश्यक हो, तो एंटीबॉडी टिटर में उपस्थिति और परिवर्तन की गतिशील निगरानी। सबसे अधिक, नवजात शिशुओं के हेमोलिटिक रोग को एंटीजन डी के लिए मां और भ्रूण के बीच असंगति के साथ जोड़ा जाता है, कम से कम एबी 0 प्रणाली के एंटीजन के लिए और यहां तक \u200b\u200bकि अन्य एंटीजन (सी, सी, के, आदि) के लिए भी अक्सर कम होता है। परिणामी एंटाइट्स la, जा रहा है, एक नियम के रूप में, Ig G वर्ग के अपूर्ण एंटीबॉडी, अप्रत्यक्ष एंटीग्लोबुलिन परीक्षण में स्पष्ट रूप से पाए जाते हैं। इस रोग में, पहचान किए गए एंटीबॉडी की सही अनुमापांक और विशिष्टता बहुत महत्व रखती है, क्योंकि गर्भवती महिला के रक्त में एंटी-एरिथ्रोसाइट एंटीबॉडी के स्तर और हेमोलिटिक रोग की गंभीरता के संभावित रोग का निदान के बीच एक निश्चित संबंध है।

सुरक्षित आधान चिकित्सा सुनिश्चित करने के लिए नैदानिक \u200b\u200bअभ्यास में अप्रत्यक्ष Coombs का परीक्षण भी आवश्यक है। इसका कार्यान्वयन दाताओं और प्राप्तकर्ताओं की विभिन्न श्रेणियों के साथ-साथ चिकित्सा और निवारक संस्थानों के सभी रोगियों की नियमित परीक्षाओं का अनिवार्य घटक है, जिन्हें रक्त और इसके घटकों के आधान की आवश्यकता हो सकती है।

एक अप्रत्यक्ष एंटीग्लोबुलिन परीक्षण का उपयोग निम्नलिखित मामलों में किया जाता है:

आरएच-कारक (पॉलीग्लसिन, जिलेटिन, आदि) द्वारा आरएच कारक का निर्धारण करने के अस्पष्ट परिणामों के साथ आरएच-संबद्धता (एंटीजन डी) के अधिक सटीक निर्धारण के लिए;

कमजोर एरिथ्रोसाइट एंटीजन (केल, डफी, किड, लुईस सिस्टम, आदि) और इन एंटीजन के एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए;

हीमोलाइटिक एंटी-एरिथ्रोसाइट एंटीबॉडी का पता लगाने और पहचानने के लिए, एंटीबॉडी सहित, जो हेमोलिटिक पोस्ट-ट्रांसफ़्यूज़न प्रतिक्रियाओं का कारण बनता है;

आधान हेमोलिटिक जटिलताओं में AB0 प्रणाली के प्रतिरक्षा एंटीबॉडी की उपस्थिति का निर्धारण करने के लिए;

ट्रांसफ़्यूज्ड रक्त और इसके घटकों के व्यक्तिगत चयन में संगतता के लिए एक परीक्षण के रूप में।

इस प्रकार, Coombs परीक्षण एक महत्वपूर्ण नैदानिक \u200b\u200bपरीक्षण है जिसका उपयोग चिकित्सा के विभिन्न क्षेत्रों (हेमटोलॉजी, प्रसूति, रुमेटोलॉजी, ट्रांसफ्यूजियोलॉजी, नैदानिक \u200b\u200bप्रयोगशाला निदान, आदि) में किया जाता है। कॉम्ब्स परीक्षण की बारीकियों का ज्ञान प्राप्त परिणामों की विश्वसनीयता बढ़ाने में मदद करेगा और प्रयोगशाला डेटा की सही व्याख्या में योगदान देगा।

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ध्यान! लेख चिकित्सा विशेषज्ञों को संबोधित है। मूल स्रोत पर हाइपरलिंक के बिना इंटरनेट पर इस लेख या इसके कुछ हिस्सों को पुन: प्रस्तुत करना कॉपीराइट का उल्लंघन माना जाता है।

एंटीग्लोबुलिन परीक्षण, या Coombs प्रतिक्रिया लाल रक्त कोशिकाओं (एरिथ्रोसाइट्स) पर हमला करने वाले कुछ एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए किया जाता है।

एंटीबॉडी प्रतिरक्षा प्रणाली द्वारा बनाई गई प्रोटीन हैं। आमतौर पर, एंटीबॉडी बैक्टीरिया और वायरस जैसे विदेशी पदार्थों को बांधते और नष्ट करते हैं।

2. एंटीबॉडी परीक्षण की आवश्यकता क्यों है?

निम्नलिखित मामलों में एक एंटीबॉडी परीक्षण किया जा सकता है:

खून चढ़ाने से पहले

आप शायद जानते हैं कि एक व्यक्ति में चार रक्त प्रकार हो सकते हैं। और एक एंटीग्लोबुलिन परीक्षण यह निर्धारित करने के लिए किया जा सकता है कि क्या रक्त आधान संभव है। यदि आप एक आधान प्राप्त कर रहे हैं, तो दाता का रक्त आपके प्रकार (समान एंटीजन) से मेल खाना चाहिए। यदि आधान के दौरान एंटीजन अलग होते हैं, तो प्रतिरक्षा प्रणाली ट्रांसफ़्यूस्ड कोशिकाओं को नष्ट कर देगी। इससे गंभीर बीमारी हो सकती है और मृत्यु भी हो सकती है। यही कारण है कि सही रक्त प्रकार खोजना इतना महत्वपूर्ण है।

आरएच संवेदीकरण के जोखिम की पहचान करने के लिए

रीसस एक प्रतिजन है। इसका पूरा नाम Rh फैक्टर है। गर्भवती महिलाओं के रक्त में आरएच कारक के लिए एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए कोम्बब्स का परीक्षण किया जाता है। यदि एक नकारात्मक रक्त आरएच कारक वाली महिला एक सकारात्मक आरएच कारक वाले बच्चे के साथ गर्भवती है (यह पिता से प्रेषित किया जा सकता है), तो आरएच संवेदीकरण का खतरा होता है। आरएच संवेदीकरण तब होता है जब गर्भावस्था या बच्चे के जन्म के दौरान एक बच्चे का खून मां के रक्त के साथ मिल जाता है। यदि मां का रक्त समूह बच्चे के रक्त समूह के साथ असंगत है, तो उसकी प्रतिरक्षा प्रणाली एक विदेशी वस्तु के रूप में मानते हुए, भ्रूण पर हमला कर सकती है। इस मामले में, भ्रूण एरिथ्रोब्लास्टोसिस नामक एक गंभीर बीमारी विकसित हो सकती है। दुर्लभ मामलों में, यदि बीमारी को छोड़ दिया जाता है, तो भ्रूण या नवजात शिशु की मृत्यु हो सकती है।

एक आरएच-नेगेटिव महिला को आरएच हेमोलिटिक बीमारी को रोकने के लिए उपयोग किए जाने वाले एंटी-आरएएम गैमाग्लोबुलिन (जैसे, रोगम) का इंजेक्शन दिया जा सकता है।

ऑटोइम्यून हेमोलिटिक एनीमिया के निदान के लिए

ऑटोइम्यून हेमोलिटिक एनीमिया एक दुर्लभ बीमारी है जो एरिथ्रोसाइट स्व-एंटीजन के एंटीबॉडी के गठन से जुड़ी है।

3. एंटीग्लोबुलिन परीक्षण के प्रकार

एंटीग्लोबुलिन परीक्षण दो प्रकार के होते हैं, या कोम्ब्स की प्रतिक्रिया: प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष।

प्रत्यक्ष Coombs परीक्षण, या प्रत्यक्ष एंटीग्लोबुलिन परीक्षण लाल रक्त कोशिकाओं से जुड़े एंटीबॉडी का पता लगाता है। इसका उपयोग एनीमिया की पहचान करने के लिए किया जाता है। इस बीमारी में, लाल रक्त कोशिकाएं तेजी से नष्ट हो जाती हैं, क्योंकि वे उत्पन्न होती हैं।

अप्रत्यक्ष Coombs का परीक्षण, या अप्रत्यक्ष एंटीग्लोबुलिन परीक्षण एंटीबॉडी के लिए खोज की जाती है जो लाल रक्त कोशिकाओं से जुड़ी नहीं होती हैं। नमूने के लिए, रक्त सीरम का उपयोग किया जाता है, जिसमें एंटीबॉडी होते हैं। यह प्रक्रिया काफी दुर्लभ है: यह मुख्य रूप से रक्त आधान की संभावना या गर्भवती महिलाओं की परीक्षा में एक मंच के रूप में निर्धारित करने के लिए किया जाता है।

4. Coombs प्रतिक्रिया के परिणाम

नॉर्म:

नकारात्मक परीक्षा परिणाम - कोई एंटीबॉडी का पता नहीं चला।

• प्रत्यक्ष Coombs परीक्षण... एक नकारात्मक प्रत्यक्ष एंटीग्लोबुलिन परीक्षण का मतलब है कि आपके रक्त में लाल रक्त कोशिकाओं से जुड़े एंटीबॉडी नहीं हैं।
• अप्रत्यक्ष Coombs परीक्षण... एक नकारात्मक अप्रत्यक्ष एंटीग्लोबुलिन परीक्षण का मतलब है कि आपका रक्त दाता के रक्त के साथ संगत है। एक गर्भवती महिला के लिए, इस परिणाम का मतलब है कि उसके शरीर ने उसके बच्चे के आरएच पॉजिटिव रक्त प्रकार (आरएच संवेदीकरण नहीं हुआ है) के खिलाफ एंटीबॉडी विकसित नहीं की है।

आदर्श से विचलन:

• प्रत्यक्ष Coombs परीक्षण... एक सकारात्मक प्रत्यक्ष एंटीग्लोबुलिन परीक्षण का मतलब है कि आपके रक्त में एंटीबॉडी हैं जो लाल रक्त कोशिकाओं से लड़ते हैं। यह असंगत रक्त या चिकित्सा स्थितियों जैसे कि नवजात शिशु (एचडीएन) के हेमोलिटिक एनीमिया या हेमोलिटिक रोग के आधान के कारण हो सकता है।
• अप्रत्यक्ष Coombs परीक्षण... एक सकारात्मक अप्रत्यक्ष एंटीग्लोबुलिन परीक्षा परिणाम का मतलब है कि आपका रक्त दाता के रक्त के साथ असंगत है। एक गर्भवती महिला में, ये परिणाम बच्चे के रक्त में सकारात्मक आरएच कारक (आरएच संवेदीकरण) के खिलाफ एंटीबॉडी की उपस्थिति का संकेत देते हैं। यदि बच्चा आरएच पॉजिटिव है, तो गर्भावस्था के दौरान माँ की एक डॉक्टर द्वारा बारीकी से निगरानी की जाएगी।

एंटीग्लोबुलिन सिद्धांत... एरीथ्रोसाइट्स की सतह पर स्थित अपूर्ण प्रकार और पूरक अणुओं (सी) के एंटी-एरिथ्रोसाइट एंटीबॉडी का पता लगाने योग्य है - प्रत्यक्ष परीक्षण - मानव एंटीलोग्लोबिन (एंटीग्लोबुलिन सीरम) वाले जानवरों के सीरम के संपर्क में उनके एकत्रीकरण द्वारा। नि: शुल्क सीरम अपूर्ण एंटीबॉडी का पता लगाया जाता है - एक अप्रत्यक्ष परीक्षण - उन्हें समूह 0 के सामान्य एरिथ्रोसाइट्स के मिश्रण पर फिक्स करके, सभी एंटीजन जिनमें से ज्ञात आरएच सिस्टम से संबंधित हैं, फिर एंटीग्लोब्युलिन सीरम के प्रभाव में agglutinated।

Coombs एंटीग्लोबुलिन परीक्षण की सामग्री, अभिकर्मकों: 10/100 मिलीलीटर ट्यूब; 1, 2 मिलीलीटर स्नातक किए गए पिपेट; पाश्चर पिपेट; tripods; बिना स्लाइड के; 8.5 solution NaCl समाधान; एरिथ्रोसाइट्स। रोगी के एरिथ्रोसाइट्स, साथ ही साथ समूह 0 से संबंधित लोगों को एक एंटीकायगुलेंट पदार्थ (EDTA समाधान) पर ताजा रूप से लिया गया रक्त प्राप्त किया जाएगा।

समूह 0 के एरिथ्रोसाइट्स का चयन किया जाना चाहिए ताकि वे सामान्य व्यक्तियों से आए और सभी शामिल हों आरएच एंटीजन... इन्हें + 4 ° C के तापमान पर ऑटोलॉगस प्लाज्मा में 7 दिनों तक संग्रहीत किया जा सकता है। समूह 0 आरबीसी की अनुपस्थिति में, एक ज्ञात एंटीजेनिक मोज़ेक, समूह 0 आरबीसी, आरएच पॉजिटिव और आरएच नकारात्मक आरबीसी का मिश्रण इस्तेमाल किया जा सकता है।

सीरम रोगी को ताजा सैंपल देना चाहिए।

एंटीग्लोबुलिन सीरम संस्थान द्वारा उत्पादित। डॉ। आई। केंटुज़िनो, एम्फॉल्स में लिनोफिनेटेड रूप में उपलब्ध है जिसमें 1 मिली है। घोलने के बाद, सीरम को -20 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें।

Coombs एंटीग्लोबुलिन परीक्षण तकनीक:
तथा) प्रत्यक्ष Coombs परीक्षण: रोगी के एरिथ्रोसाइट्स को 8.5 solution NaCl घोल से 3 बार कुल्ला।
एंटीग्लोबुलिन सीरम के dilutions से कई माइक्रोस्कोप स्लाइड के लिए एक बड़ी बूंद लागू करें, और इसके बगल में - रोगी की एरिथ्रोसाइट तलछट से एक छोटी बूंद; कांच के कोने से हलचल बूँदें। तैयार सामग्री को 5 मिनट के लिए मेज पर छोड़ दें, फिर एग्लूटीनेटर की उपस्थिति के लिए जांच करें। सकारात्मक परिणाम के मामले में, अधिकतम एग्लूटीटिंग टिटर निर्धारित करें।

ख) अप्रत्यक्ष Coombs परीक्षण: समूह 0 की एरिथ्रोसाइट्स, रीसस-पॉजिटिव और रीसस-नेगेटिव, 8.5 exp NaCl घोल से 3 बार धोएं और सीरम की 8-10 बूंदों के लिए एरिथ्रोसाइट्स की 2 बूंदों की दर से रोगी के सीरम को बेनकाब करें, फिर, 60 मिनट के लिए, 37 ° पर सेते हैं। से। उसके बाद, प्रत्यक्ष Coombs परीक्षण के निर्देशों के अनुसार एरिथ्रोसाइट्स को तीन बार फिर से रगड़ें और एंटीग्लोबुलिन सीरम के साथ उन पर कार्य करें।

जब यह आता है ठंड सक्रिय एंटीबॉडी के बारे में 60 मिनट के लिए समूह 0 के एरिथ्रोसाइट्स का संवेदीकरण करना। + 4 ° C के तापमान पर।

ध्यान दें1) + 4 ° C या कमरे के तापमान पर एक या कई दिनों के लिए संग्रहीत एरिथ्रोसाइट्स पर प्रत्यक्ष Coombs का परीक्षण न करें, क्योंकि परिणाम सामान्य सीरम में मौजूद अपूर्ण शीत-सक्रिय योगों के निर्धारण के कारण झूठे सकारात्मक हो सकते हैं। 2) गंभीर हाइपरप्रोटीनेमिया के मामलों में, एरिथ्रोसाइट्स को 4-5 बार धोएं और सल्फोसैलिसिलिक एसिड का उपयोग करके अंतिम धोने तरल में मट्ठा प्रोटीन की अनुपस्थिति की जांच करें।

एरिथ्रोसाइट तलछट में संभव 2 μg IgG / ml अवशेष एंटीग्लोबुलिन सीरम को बेअसर करें... Coombs का परीक्षण मोनोस्पेक्ट्रिक एंटी-IgG, -IgM, -IgA -C3 और -C4 सेरा का उपयोग करके भी किया जा सकता है ताकि एरिथ्रोसाइट्स की सतह पर गहराई के प्रकार को स्पष्ट किया जा सके, उदाहरण के लिए, ऑटोइम्यून हेमोलिटिक एनीमिया से पीड़ित लोगों में।

अप्रत्यक्ष एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया में मानव रक्त में एरिथ्रोसाइट एंटीजन और एंटी-एरिथ्रोसाइट एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए कॉम्बस की प्रतिक्रिया एक प्रभावी तरीका है। परीक्षण का आधार प्रतिक्रिया के दूसरे चरण में Cobs के एंटीग्लोब्युलिन सीरम (AGS) के उपयोग के बाद एरिथ्रोसाइट एंटीजन को टाइप करने में वर्ग G इम्युनोग्लोबुलिन (IgG) पर आधारित विशिष्ट मोनोक्लोनल अभिकर्मकों का उपयोग है।

AGS का उत्पादन प्रयोगशाला जानवरों के रक्त से सीरम को मिलाकर किया जाता है जो मानव वर्ग G इम्युनोग्लोबुलिन और मोनोक्लोनल एंटीबॉडी के साथ प्रतिरक्षित होता है, घटकों में से एक, सी 3 डी मानव सीरम का पूरक है। एजीएस विशिष्ट एंटीबॉडी के साथ संवेदी एरिथ्रोसाइट्स के एकत्रीकरण का कारण बनता है। एजीएस के प्रभाव में एरिथ्रोसाइट्स पर एंटीबॉडी की अनुपस्थिति में, एक सकारात्मक प्रतिक्रिया नहीं होती है।

अप्रत्यक्ष Coombs प्रतिक्रिया आप की उपस्थिति का निर्धारण करने की अनुमति देता है:

• igG अभिकर्मकों ("अपूर्ण" एंटीबॉडी द्वारा पाया गया एरिथ्रोसाइट एंटीजन, उदाहरण के लिए, मोनोक्लोनल अभिकर्मक एंटी-डी, एंटी-एफ वाई ए, एंटी-एफ वाई बी);
• आईजीजी वर्ग के विरोधी एरिथ्रोसाइट एंटीबॉडी।

अप्रत्यक्ष एंटीग्लोबुलिन परीक्षण: एरिथ्रोसाइट एंटीजन का पता लगाना

हम एंटी-डी IgG tsoliclon के उदाहरण का उपयोग करते हुए अप्रत्यक्ष Coombs प्रतिक्रिया की विधि प्रस्तुत करते हैं।

1. जिस व्यक्ति की जांच की जा रही है उसके नाम के साथ एक साफ ट्यूब लेबल करें।
2. पिपेट 2 बूंदें (लगभग 0.1 मिलीलीटर) एंटी-डी आईजीजी ज़ॉलिकलॉन ट्यूब में।
3. पहले से खारा के साथ धोया विश्लेषण एरिथ्रोसाइट्स के 5% निलंबन के 2 बूंदें जोड़ें। ज़ोक्लोन के साथ परीक्षण के नमूने मिलाएं।
4. 37 डिग्री सेल्सियस पर 30 मिनट के लिए पानी के स्नान या इनक्यूबेटर में मिश्रण सेते हैं।
5. पाश्चर विंदुक के साथ टेस्ट ट्यूब में खारा के 5-10 मिलीलीटर जोड़ें।
6. एक मिनट के लिए 18 - 25 डिग्री सेल्सियस पर 1200 ग्राम केन्द्रापसारक त्वरण पर ट्यूब अपकेंद्रित्र।
7. खारा समाधान निकालें।
8. सेंट्रीफ्यूजेशन 2 - 3 अधिक बार एरिथ्रोसाइट्स धोने की प्रक्रिया को दोहराएं।
9. एंटीग्लोबुलिन सीरम की 2 बूंदों को रक्त कोशिका की गोली में जोड़ें, हलचल करें।
10. 18 - 25 डिग्री सेल्सियस पर एक मिनट के लिए 1200 ग्राम केन्द्रापसारक त्वरण पर ट्यूब को अपकेंद्रित्र करें।
11. एक पिपेट या पाश्चर विंदुक का उपयोग कर खारा की 3 से 5 बूँदें जोड़ें।
12. Resuspend गोली और नेत्रहीन agglutination के लिए आकलन करें। एक स्पष्ट समाधान की पृष्ठभूमि के खिलाफ परीक्षण ट्यूब के निचले भाग में व्यक्त एग्लूट्रेट्स एरिथ्रोसाइट एंटीजन का पता लगाने का संकेत देते हैं। रक्त कोशिकाओं का एक अपारदर्शी निलंबन एंटीजन की अनुपस्थिति को इंगित करता है।

Coombs की प्रतिक्रिया: आइसोइम्यून एंटी-एरिथ्रोसाइट एंटीबॉडी के लिए स्क्रीनिंग

अध्ययन दाता और प्राप्तकर्ता के एरिथ्रोसाइट्स के सभी एंटीजन के लिए व्यक्तिगत संगतता के परीक्षण के भाग के रूप में किया जाता है। दाता के एरिथ्रोसाइट्स के साथ प्राप्तकर्ता के सीरम की पूर्ण संगतता के बारे में निष्कर्ष विश्लेषण के सभी चरणों में हेमोलिसिस और / या एग्लूटिनेशन की अनुपस्थिति के आधार पर बनाया गया है। परीक्षण के किसी भी स्तर पर हेमोलिसिस और / या एग्लूटिनेशन के संकेत रक्त के नमूनों की असंगति को दर्शाते हैं।

AB0 प्रणाली के अनुसार अनुकूलता का आकलन, "कोल्ड" एंटीबॉडी का पता लगाना

1. दाता से रक्त का नमूना तैयार करें:
   • एक स्वचालित औषधि के साथ टेस्ट ट्यूब में 0.2 मिलीलीटर रक्त जोड़ें;
   • खारा में 5.0 मिलीलीटर में एरिथ्रोसाइट्स 3 बार धोएं;
   • lISS कम आयनिक शक्ति समाधान के 3-4 मिलीलीटर में गोली resuspend।
2. प्राप्तकर्ता के नाम और दाता के नाम के साथ दूसरी साफ ट्यूब को लेबल करें।
3. स्वचालित पिपेट के साथ एक लेबल ट्यूब में प्राप्तकर्ता सीरम के पिपेट 0.1 मिलीलीटर।
4. LISS समाधान में 5% एरिथ्रोसाइट निलंबन के 2 बूंदें जोड़ें।
5. तुरंत 18 - 25 डिग्री सेल्सियस पर 15 - 20 सेकंड के लिए 1200 ग्राम केन्द्रापसारक त्वरण पर मिश्रण को अपकेंद्रित्र करें।
6. धीरे से ट्यूब को हिलाकर तलछट को अलग करें। एग्लूटीनेशंस की उपस्थिति का आकलन करें। हेमोलिसिस और / या एग्लूटीनेट्स की उपस्थिति का अर्थ है:
   • aB0 प्रणाली में असंगति;
   • आईजीएम या आईजीए वर्ग के "ठंड" एंटीबॉडी के रोगी के सीरम में उपस्थिति, एबी 0 एंटीजन के लिए विशिष्ट नहीं।

"गर्म" एंटीबॉडी का पता लगाना

1. हेमोलिसिस और / या एग्लूटीनेट्स की अनुपस्थिति में, ट्यूब को 37 डिग्री सेल्सियस पर 10 - 15 मिनट के लिए सेते हैं।
2. कमरे के तापमान पर 15 से 20 सेकंड के लिए 1200 ग्राम पर ट्यूब को अपकेंद्रित्र करें।
3. ट्यूब को हिलाएं और सतह पर तैरनेवाला में हेमोलिसिस और / या एग्लूटीनेट की जांच करें। एक सकारात्मक परिणाम रोगी के सीरम में दाता के एरिथ्रोसाइट एंटीजन के खिलाफ "गर्म" आईजीएम एंटीबॉडी का पता लगाने का संकेत देता है।

Coombs परीक्षण में IgG एंटीबॉडी का पता लगाना

1. यदि अध्ययन के अंतिम चरण में परिणाम नकारात्मक है, तो टेस्ट ट्यूब में 5% 0.9% NaCl घोल को एक पाश्चर विंदुक के साथ जोड़ें।
2. 18 - 25 डिग्री सेल्सियस के एक वायु तापमान पर 15 - 20 सेकंड के लिए 1200 ग्राम पर ट्यूब को अपकेंद्रित्र करें। एक पाश्चर विंदुक के साथ सतह पर तैरनेवाला का निपटान।
3. एरिथ्रोसाइट्स 2 - 3 अधिक बार धोना दोहराएं।
4. टेस्ट ट्यूब में एंटीग्लोबुलिन सीरम की 1 से 2 बूंदें जोड़ें। अच्छी तरह मिलाओ।
5. 15 से 20 सेकंड के लिए 1200 ग्राम पर ट्यूब अपकेंद्रित्र।
6. धीरे एरिथ्रोसाइट तलछट को तोड़ने और नेत्रहीन प्रतिक्रिया परिणाम का आकलन करें। एग्लूटीनेशन का पता लगाने का मतलब है कि डोनर के एरिथ्रोसाइट एंटीजन के खिलाफ IgG एंटीबॉडी के मरीज के सीरम में उपस्थिति।