अप्रत्यक्ष चट्टान। लेबल का उपयोग करते हुए सीरोलॉजिकल परीक्षण

वर्तमान में, सीरोलॉजिकल परीक्षणों का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है जिसमें लेबल वाले एजी या एटी-ला शामिल होते हैं। इनमें इम्यूनोफ्लोरेसेंस, रेडियोइम्यूनोसे और एंजाइम इम्यूनोसे की प्रतिक्रियाएं शामिल हैं।

वे लागू होते हैं:

1) संक्रामक रोगों के सेरोडायग्नोसिस के लिए, अर्थात्, विभिन्न लेबल (एंजाइम, फ्लोरोक्रोम डाई) के साथ ज्ञात संयुग्मित (रासायनिक रूप से संयुक्त) एंटीजन के एक सेट का उपयोग करके एंटीजन का पता लगाने के लिए;

2) मानक लेबल डायग्नोस्टिक एंटीबॉडी (एक्सप्रेस डायग्नोस्टिक्स) का उपयोग करके सूक्ष्मजीव या उसके सेरोवर का निर्धारण करना।

उपयुक्त एजी-एम के साथ जानवरों को प्रतिरक्षित करके सीरम तैयार किए जाते हैं, फिर इम्युनोग्लोबुलिन को अलग किया जाता है और चमकदार रंगों (फ्लोरोक्रोमेस), एंजाइम और रेडियोआइसोटोप के साथ संयुग्मित किया जाता है।

विशिष्टता के संदर्भ में, लेबल वाले एसआर अन्य एसआर से कम नहीं हैं, और उनकी संवेदनशीलता में वे सभी एसआर से श्रेष्ठ हैं।

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चमकदार फ्लोरोक्रोम रंजक (फ्लोरिसिन आइसोथियोसाइनेट, आदि) एक लेबल के रूप में उपयोग किए जाते हैं।

आरआईएफ के विभिन्न संशोधन हैं। संक्रामक रोगों के स्पष्ट निदान के लिए - परीक्षण सामग्री में रोगाणुओं या उनके प्रतिजनों का पता लगाने के लिए, कून के अनुसार आरआईएफ का उपयोग किया जाता है।

कून के अनुसार आरआईएफ के दो तरीके हैं: प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष।

प्रत्यक्ष आरआईएफ घटक:

1) अध्ययन के तहत सामग्री (आंत्र आंदोलन, नासोफरीनक्स, आदि);

2) वांछित प्रतिजन के लिए एटी-ला युक्त विशिष्ट प्रतिरक्षा सीरम लेबल;

3) आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान।

परीक्षण सामग्री से एक स्मीयर को लेबल एंटीसेरम से उपचारित किया जाता है।

AG-AT अभिक्रिया होती है। ल्यूमिनेसेंस सूक्ष्म परीक्षा के दौरान, उस क्षेत्र में जहां एजी-एटी परिसरों को स्थानीयकृत किया जाता है, प्रतिदीप्ति का पता लगाया जाता है - ल्यूमिनेसिसेंस।

अप्रत्यक्ष आरआईएफ घटक:

1) अध्ययन के तहत सामग्री;

2) विशिष्ट एंटीसेरम;

3) एंटीग्लोबुलिन सीरम (इम्युनोग्लोबुलिन के खिलाफ एटी-ला), फ्लोरीक्रोम के साथ लेबल;

4) आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड घोल।

परीक्षण सामग्री से एक स्मीयर को पहले प्रतिरक्षा सीरम के साथ वांछित एंटीजन के साथ इलाज किया जाता है, और फिर लेबल वाले एंटीग्लोबुलिन सीरम के साथ।

ग्लोइंग कॉम्प्लेक्स एजी-एटी - लेबल एटी एक फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप का उपयोग करके पता लगाया जाता है।

अप्रत्यक्ष विधि का लाभ यह है कि विशिष्ट फ्लोरोसेंट सीरा की एक विस्तृत श्रृंखला तैयार करने की कोई आवश्यकता नहीं है, और केवल एक फ्लोरोसेंट एंटीग्लोबुलिन सीरम का उपयोग किया जाता है।

अप्रत्यक्ष आरआईएफ की एक 4-घटक किस्म को भी अलग किया जाता है, जब पूरक अतिरिक्त रूप से पेश किया जाता है (गिनी पिग सीरम)। सकारात्मक प्रतिक्रिया के साथ, एजी-एटी - लेबल - एटी-पूरक का एक परिसर बनता है।

आरआईएफ बैक्टीरिया, रिकेट्सिया और वायरस के एंटीजन के संयोजन पर आधारित है, जिसमें फ्लोरोसेंट डाई (फ्लोरेसिन आइसोथियोसाइनेट, रोडामाइन, बी-आइसोथियानाइट, लिसैटिनरोडामाइन बी -200, सल्फोक्लोराइड, आदि) के साथ लेबल किए गए विशिष्ट एंटीबॉडी होते हैं, जिनमें प्रतिक्रियाशील समूह (सल्फ़ियोसाइनाइड, आदि) होते हैं। )... ये समूह एंटीबॉडी अणुओं के मुक्त अमीनो समूहों के साथ जुड़ते हैं, जो फ्लोरोक्रोम के साथ इलाज करने पर संबंधित प्रतिजन के लिए विशिष्ट आत्मीयता नहीं खोते हैं। गठित एजी-एटी कॉम्प्लेक्स एक ल्यूमिनसेंट माइक्रोस्कोप (छवि 7) के तहत स्पष्ट रूप से दिखाई देने वाली, चमकदार चमकदार संरचनाएं बन जाती हैं। RIF कम मात्रा में बैक्टीरिया और वायरल एंटीजन का पता लगा सकता है। RIF पद्धति का उपयोग दो संस्करणों में किया जाता है: प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष विधि।

प्रत्यक्ष विधि एक लेबल एंटीबॉडी के साथ एक एंटीजन के सीधे कनेक्शन पर आधारित है। एक अप्रत्यक्ष विधि फ्लोरोसेंट रंगों का उपयोग करके एजी-एटी कॉम्प्लेक्स की चरण-दर-चरण पहचान पर आधारित है। पहले चरण में विशिष्ट एंटीबॉडी के साथ एक विशिष्ट एंटीजन के प्रतिरक्षा परिसरों का निर्माण होता है। दूसरा चरण इस परिसर को लेबल एंटीगैमाग्लोबुलिन के साथ इलाज करके पहचानना है।

आरआईएफ के फायदे सादगी, उच्च संवेदनशीलता, परिणाम प्राप्त करने की गति हैं। आरआईएफ का उपयोग इन्फ्लूएंजा, पेचिश, मलेरिया, प्लेग, टुलारेमिया, सिफलिस आदि के शुरुआती एक्सप्रेस निदान के लिए एक विधि के रूप में किया जाता है। इस तरह के शोध के लिए एक फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप का उपयोग किया जाता है।

रेडियोइम्यूनोसे (आरआईए)

आरआईए इम्यूनोडायग्नोस्टिक्स के सबसे संवेदनशील तरीकों में से एक है। इसका उपयोग वायरल हेपेटाइटिस के रोगियों में हेपेटाइटिस बी वायरस के एंटीजन का पता लगाने के लिए किया जाता है। ऐसा करने के लिए, एक संदर्भ सीरम (हेपेटाइटिस बी वायरस के प्रति एंटीबॉडी युक्त सीरम) को परीक्षण सीरम में जोड़ा जाता है। मिश्रण को 40 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 1-2 दिनों के लिए ऊष्मायन किया जाता है, फिर एक संदर्भ एंटीजन (एक आइसोटोप 125 जे के साथ लेबल किया गया एंटीजन) जोड़ा जाता है और ऊष्मायन 24 घंटों तक जारी रहता है। गठित एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स में, संदर्भ सीरम प्रोटीन के खिलाफ एंटी-इम्युनोग्लोबुलिन को जोड़ा जाता है, जो एक अवक्षेप (छवि 8) के गठन की ओर जाता है। परिणाम को काउंटर द्वारा दर्ज किए गए अवक्षेप में दालों की उपस्थिति और संख्या द्वारा ध्यान में रखा जाता है। यदि अध्ययन किए गए सीरम में एक एंटीजन है जो विशिष्ट एंटीबॉडी के लिए बाध्य है, तो बाद वाला लेबल वाले एंटीजन से बंधता नहीं है और इसलिए, यह अवक्षेप में नहीं पाया जाता है। इस प्रकार, आरआईए निर्धारित किए जाने वाले एंटीजन की प्रतिस्पर्धी बातचीत के सिद्धांत और एंटीबॉडी के सक्रिय केंद्रों के साथ लेबल एंटीजन की एक ज्ञात मात्रा पर आधारित है। रेडियोधर्मी आइसोटोप को एक लेबल के रूप में उपयोग किया जाता है।

मंचन की तकनीक के आधार पर, आरआईए के दो तरीके हैं।

1) तकनीक "तरल चरण" (क्लासिक आरआईए)। इस मंचन तकनीक का नुकसान यह है कि आवश्यकता है

मुक्त और बाध्य लेबल वाले एंटीजन (या एंटीबॉडी) का विशेष पृथक्करण।

2) तकनीक "ठोस चरण"।

ज्ञात विशिष्टता के एजी या एटी सॉर्बेंट्स (ठोस चरण) पर बांधते हैं - एक पॉलीस्टाइनिन कुएं या प्लास्टिक टेस्ट ट्यूब की दीवारें। शेष IC घटक क्रमिक रूप से स्थिर AG (AT) पर सोखे जाते हैं।

प्रतिक्रिया की प्रकृति के आधार पर, निम्नलिखित विधियों को प्रतिष्ठित किया जाता है:

1) प्रतियोगी पद्धति - एजी प्रतियोगिता पर आधारित एक विधि।

प्रतिक्रिया घटक:

ए) निर्धारित एएच (परीक्षण सामग्री - रक्त, थूक, आदि);

बी) अध्ययन किए गए एजी-वाई के समान रेडियोआइसोटोप-लेबल एंटीजन;

सी) सॉर्बेंट पर बाध्य ज्ञात एकाग्रता का विशिष्ट एटी-ला;

घ) मानक उच्च रक्तचाप (नियंत्रण);

ई) बफर समाधान।

सबसे पहले, अध्ययन किए गए एजी को प्रतिक्रिया में पेश किया जाता है। एजी-एटी कॉम्प्लेक्स सॉर्बेंट की सतह पर बनता है। सॉर्बेंट को धोया जाता है, फिर लेबल किया गया एजी पेश किया जाता है। अध्ययन किए गए एजी की सामग्री जितनी अधिक होगी, लेबल वाला एजी सॉर्बेंट की सतह पर एटी-एम से उतना ही कम होगा। लेबल किए गए एजी की सांद्रता काउंटरों का उपयोग करके प्रतिक्रिया की रेडियोधर्मिता को मापकर निर्धारित की जाती है। प्रतिक्रिया में रेडियोधर्मिता की मात्रा परीक्षण नमूने में एजी की मात्रा के व्युत्क्रमानुपाती होगी।

2) गैर-प्रतिस्पर्धी विधि।

प्रतिक्रिया घटक:

ए) निर्धारित एजी;

बी) विशिष्ट एटी-ए ज्ञात एकाग्रता का, संबद्ध

शर्बत पर ny;

सी) एंटीबॉडी लिंक्ड एंटीबॉडी के समान, लेबल किए गए

एक रेडियोआइसोटोप;

घ) मानक एजी;

ई) बफर समाधान।

परीक्षण एजी को बाध्य एटी में जोड़ा जाता है। शर्बत पर ऊष्मायन की प्रक्रिया में, एजी-एटी कॉम्प्लेक्स बनते हैं। सॉर्बेंट को मुक्त घटकों से धोया जाता है और लेबल वाले एटी जोड़े जाते हैं, जो परिसर में एजी-ऑन की मुक्त संयोजकता से जुड़ते हैं। रेडियोधर्मिता की मात्रा अध्ययन किए गए एजी की सांद्रता के समानुपाती होती है।

3) "सैंडविच विधि" (अप्रत्यक्ष विधि) - सबसे आम विधि।

अवयव:

ए) जांच सीरम (या जांच एजी);

बी) एजी-एस सॉर्बेंट पर बाध्य (या एटी-ला, एजी-ए का निर्धारण करते समय सॉर्बेंट पर बाध्य);

ग) रेडियोआइसोटोप के साथ लेबल किए गए इम्युनोग्लोबुलिन के खिलाफ नैदानिक ​​एंटीबॉडी;

डी) नियंत्रण सीरा (या एजी);

ई) बफर समाधान।

जांच किए गए एंटीग्लोबुलिन एंटीबॉडी (या एंटीजन) ठोस चरण एंटीजन (एंटीबॉडी) के साथ प्रतिक्रिया करते हैं, जिसके बाद इनक्यूबेट को हटा दिया जाता है और लेबल एंटीग्लोबुलिन एंटीबॉडी को प्रतिक्रिया में पेश किया जाता है, जो सॉर्बेंट की सतह पर एंटीग्लोबुलिन एंटीबॉडी के विशिष्ट परिसरों से बंधते हैं। प्रतिक्रिया में रेडियोधर्मिता की मात्रा अध्ययन के तहत एटी (या एजी) की मात्रा के सीधे आनुपातिक है।

आरआईए के लाभ:

1) उच्च विशिष्टता और संवेदनशीलता;

2) मंचन तकनीक की सादगी;

3) परिणामों के मात्रात्मक मूल्यांकन की सटीकता;

4) आसानी से स्वचालन के लिए उत्तरदायी।

नुकसान: रेडियोधर्मी समस्थानिकों का उपयोग।

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इम्यूनोसे विधि (एलिसा)

विधि का उपयोग टैग एंजाइम (हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज, बी - गैलेक्टोज या क्षारीय फॉस्फेट) के साथ संयुग्मित एंटीबॉडी का उपयोग करके एंटीजन का पता लगाने के लिए किया जाता है। एंजाइम-लेबल वाले प्रतिरक्षा सीरम के साथ प्रतिजन के संयोजन के बाद, सब्सट्रेट और क्रोमोजेन को मिश्रण में जोड़ा जाता है। सब्सट्रेट को एंजाइम द्वारा साफ किया जाता है, और इसके क्षरण उत्पाद क्रोमोजेन के रासायनिक संशोधन का कारण बनते हैं। इस मामले में, क्रोमोजेन अपना रंग बदलता है - रंग की तीव्रता सीधे बाध्य एंटीजन और एंटीबॉडी अणुओं (छवि 9) की संख्या के समानुपाती होती है।

सबसे आम ठोस चरण एलिसा है, जिसमें प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया (एंटीजन या एंटीबॉडी) के घटकों में से एक ठोस वाहक पर अवशोषित होता है। Polystyrene micropanels एक ठोस वाहक के रूप में उपयोग किया जाता है। एंटीबॉडी का निर्धारण करते समय, रोगियों के रक्त सीरम, एक एंजाइम के साथ लेबल किए गए एंटीग्लोबुलिन सीरम और एंजाइम और क्रोमोजेन के लिए सब्सट्रेट समाधान के मिश्रण को क्रमिक रूप से सॉर्बेड एंटीजन के साथ कुओं में जोड़ा जाता है। हर बार अगले घटक को जोड़ने के बाद, अनबाउंड अभिकर्मकों को पूरी तरह से धोकर कुओं से हटा दिया जाता है। यदि परिणाम सकारात्मक है, तो क्रोमोजेन समाधान का रंग बदल जाता है। एक ठोस-चरण वाहक को न केवल एक प्रतिजन के साथ, बल्कि एक एंटीबॉडी के साथ भी संवेदनशील बनाया जा सकता है। फिर वांछित एंटीजन को सोखने वाले एंटीबॉडी के साथ कुओं में जोड़ा जाता है, एंटीजन के खिलाफ एंजाइम-लेबल प्रतिरक्षा सीरम जोड़ा जाता है, और फिर एंजाइम और क्रोमोजेन के लिए सब्सट्रेट के समाधान का मिश्रण होता है।

एलिसा का उपयोग वायरल और बैक्टीरियल रोगजनकों के कारण होने वाले रोगों के निदान के लिए किया जाता है। एंजाइमों को एक लेबल के रूप में उपयोग किया जाता है: पेरोक्सीडेज, क्षारीय फॉस्फेट, आदि।

एक प्रतिक्रिया का एक संकेतक एक उपयुक्त सब्सट्रेट के संपर्क में आने पर रंग प्रतिक्रियाओं को प्रेरित करने के लिए एंजाइमों की क्षमता है। उदाहरण के लिए, ऑर्थोफेनिलडायमाइन समाधान पेरोक्सीडेज के लिए एक सब्सट्रेट है।

सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल किया जाने वाला ठोस चरण एलिसा। एलिसा का सार आरआईए के समान है।

एलिसा परिणामों का मूल्यांकन नेत्रहीन और स्पेक्ट्रोफोटोमीटर पर ऑप्टिकल घनत्व को मापकर किया जा सकता है।

एलिसा के फायदों में शामिल हैं:

रेडियोधर्मी पदार्थों के संपर्क में कमी;

प्रतिक्रिया का आकलन करने के तरीकों में आसानी;

संयुग्मों की स्थिरता;

स्वचालन के लिए आसानी से उत्तरदायी।

हालांकि, आरआईए की तुलना में, विधि की कम संवेदनशीलता नोट की जाती है, लेकिन कुछ मामलों में संवेदनशीलता आरआईएफ और आरआईएम से अधिक हो जाती है।

निम्नलिखित प्रकार के एलिसा उदाहरण के रूप में दिए गए हैं:

प्रतिस्पर्धी प्रकार।

मुलाकात।

वायरल हेपेटाइटिस बी के निदान में सीरम और प्लाज्मा में हेपेटाइटिस बी वायरस (एचबी3 विज्ञापन) के सतह प्रतिजन का पता लगाने और एचबी5 विज्ञापन की ढुलाई का निर्धारण करने के लिए बनाया गया है।

अवयव:

1) परीक्षण सामग्री सीरम या रक्त प्लाज्मा;

2) HBs Ad के प्रतिरक्षी, एक पॉलीस्टाइनिन माइक्रोप्लेट के कुएं की सतह पर अधिशोषित;

3) संयुग्म - HBs के लिए murine मोनोक्लोनल एंटीबॉडी पेरोक्सीडेज के साथ लेबल किए गए विज्ञापन,

4) ऑर्थोफेनिलेनेडियम (ओएफडी) -सब्सट्रेट;

5) फॉस्फेट बफर खारा;

6) नियंत्रण सीरा:

सकारात्मक (एचबीई विज्ञापन के साथ सीरम);

नकारात्मक (एचबीएस विज्ञापन के बिना सीरम)। प्रगति

1) नियंत्रण और परीक्षण सीरा का परिचय।

2) 37 डिग्री सेल्सियस पर 1 घंटे के लिए ऊष्मायन।

3) कुओं की धुलाई।

4) संयुग्म का परिचय।

5) 37 डिग्री सेल्सियस पर 1 घंटे के लिए ऊष्मायन।

6) कुओं की धुलाई।

7) ओएफडी में प्रवेश। HBz Ad की उपस्थिति में, कुओं में घोल पीला हो जाता है।

एलिसा की गणना एक फोटोमीटर का उपयोग करके ऑप्टिकल घनत्व द्वारा की जाती है। ऑप्टिकल घनत्व की डिग्री अध्ययन किए गए d की एकाग्रता के विपरीत आनुपातिक होगी।

तंत्र

प्रतिक्रिया तीन चरणों में आगे बढ़ती है:

1) अध्ययन किए गए सीरम (प्लाज्मा) का HBs विज्ञापन कुएं की सतह पर अधिशोषित समजातीय प्रतिरक्षी से बंधता है। आईसी एजी-एटी का गठन किया गया है। (एनवीजेड विज्ञापन - पाप \ एनवीजेड एटी)।

2) पेरोक्सीडेज के साथ लेबल किए गए एंटीबॉडी एचबी विज्ञापन, एजी-एटी कॉम्प्लेक्स के एचबी विज्ञापन के शेष मुक्त निर्धारकों से बंधे हैं। एटी-एजी-लेबल एटी (ए! 1 एचबी एटी-एचबी एड-एपी (1 एचबीएस एटी, पेरोक्सीडेज के साथ लेबल) का एक परिसर बनता है।

3) एटी-एजी-एटी कॉम्प्लेक्स के ओपीडी इंटरेक्शन (पेरोक्सीडेज के साथ) होता है और पीला रंग होता है।

अप्रत्यक्ष प्रकार

एचआईवी संक्रमण के निदान के लिए यह मुख्य परीक्षण प्रतिक्रिया है।

उद्देश्य: एचआईवी संक्रमण का सीरोलॉजिकल निदान - एचआईवी प्रतिजनों के प्रति एंटीबॉडी का पता लगाना, घटक:

1) परीक्षण सामग्री - रक्त सीरम;

2) सिंथेटिक

यह विधि ल्यूमिनेसेंस की घटना का उपयोग करती है।

ल्यूमिनेसेंस की घटना का सार इस तथ्य में निहित है कि जब विभिन्न प्रकार की ऊर्जा (प्रकाश, विद्युत, आदि) कुछ पदार्थों के अणुओं द्वारा अवशोषित की जाती है, तो उनके परमाणु उत्तेजित अवस्था में चले जाते हैं, और फिर, अपनी मूल स्थिति में लौट आते हैं, अवशोषित ऊर्जा को प्रकाश विकिरण के रूप में मुक्त करते हैं।

आरआईएफ में, ल्यूमिनेसिसेंस खुद को प्रतिदीप्ति के रूप में प्रकट करता है - यह एक चमक है जो विकिरण के क्षण में रोमांचक प्रकाश के साथ होती है और इसके समाप्त होने के तुरंत बाद बंद हो जाती है।

कई पदार्थों और जीवित सूक्ष्मजीवों की अपनी प्रतिदीप्ति (तथाकथित प्राथमिक) होती है, लेकिन इसकी तीव्रता बहुत कम होती है। तीव्र प्राथमिक प्रतिदीप्ति वाले और गैर-फ्लोरोसेंट पदार्थों को फ्लोरोसेंट गुण प्रदान करने के लिए उपयोग किए जाने वाले पदार्थ फ्लोरोक्रोम कहलाते हैं। इस प्रेरित प्रतिदीप्ति को द्वितीयक प्रतिदीप्ति कहते हैं।

प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी में प्रतिदीप्ति को उत्तेजित करने के लिए, स्पेक्ट्रम के पराबैंगनी या नीले-बैंगनी भाग (तरंग दैर्ध्य 300-460 एनएम) का सबसे अधिक उपयोग किया जाता है। इन उद्देश्यों के लिए, प्रयोगशालाओं में विभिन्न मॉडलों के फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप हैं - एमएल-1-एमएल -4, "लुमम"।

वायरोलॉजिकल अभ्यास में, फ्लोरोसेंस माइक्रोस्कोपी के दो मुख्य तरीकों का उपयोग किया जाता है: फ्लोरोक्रोमेशन और फ्लोरोसेंट एंटीबॉडी (या आरआईएफ)।

फ्लोरोक्रोमेशन- यह उनके ल्यूमिनेसिसेंस की ताकत और कंट्रास्ट को बढ़ाने के लिए फ्लोरोक्रोम के साथ तैयारियों का उपचार है। सबसे बड़ी रुचि एक्रिडीन ऑरेंज फ्लोरोक्रोम है, जो न्यूक्लिक एसिड के पॉलीक्रोमैटिक फ्लोरोसेंस को प्रेरित करती है। इसलिए, जब इस फ्लोरोक्रोम के साथ दवाओं का इलाज किया जाता है, तो डीऑक्सीराइबोन्यूक्लिक एसिड चमकीले हरे रंग में, और राइबोन्यूक्लिक एसिड - रूबी लाल में फ्लोरोसेंट होता है।

आरआईएफ विधि में यह तथ्य शामिल है कि एक फ्लोरोक्रोम के साथ एंटीबॉडीज एक समरूप प्रतिजन के साथ एक विशिष्ट बंधन में प्रवेश करने की क्षमता बनाए रखते हैं। फ्लोरोक्रोम की उपस्थिति के कारण परिणामी एंटीजन + एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स, इसकी विशेषता चमक द्वारा एक ल्यूमिनसेंट माइक्रोस्कोप के तहत पता लगाया जाता है।

एंटीबॉडी प्राप्त करने के लिए, अत्यधिक सक्रिय हाइपरइम्यून सीरा का उपयोग किया जाता है, जिसमें से एंटीबॉडी को अलग किया जाता है और एक फ्लोरोक्रोम के साथ लेबल किया जाता है। सबसे अधिक इस्तेमाल किया जाने वाला फ्लोरोक्रोम एफआईटीसी-फ्लोरेसिन आइसोथियोसाइनेट (हरी चमक) और पीसीएक्स-रोडामाइन सल्फोक्लोराइड (लाल चमक) है। फ्लोरोक्रोम-लेबल वाले एंटीबॉडी को संयुग्म कहा जाता है।

तैयारी की तैयारी और धुंधला करने की विधि इस प्रकार है:

• स्मीयर, अंग प्रिंट या कवरस्लिप तैयार करें - कांच की स्लाइड्स पर एक संक्रमित सेल संस्कृति; आप हिस्टोसेक्शन का भी उपयोग कर सकते हैं;
• तैयारी हवा में सूख जाती है और ठंडे एसीटोन में कमरे के तापमान पर या शून्य से 15 डिग्री सेल्सियस (15 मिनट से 4-16 घंटे तक) पर तय की जाती है;
• प्रत्यक्ष या अप्रत्यक्ष तरीके से रंगे; क्रॉस में मूल्यांकन किए गए ल्यूमिनेसेंस की तीव्रता के अनुसार एक ल्यूमिनसेंट माइक्रोस्कोप के तहत रिकॉर्ड रखें।

साथ ही स्वस्थ पशु से तैयार कर दाग-धब्बे-नियंत्रण किया जाता है।

फ्लोरोसेंट एंटीबॉडी का उपयोग करने के दो मुख्य तरीके हैं: प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष।

प्रत्यक्ष विधि (एक-चरण)... एक संयुग्म (फ्लोरोसेंट सीरम से पुटीय वायरस) को एक नम कक्ष में 37 डिग्री सेल्सियस पर 30 मिनट के लिए निश्चित तैयारी पर लगाया जाता है। फिर तैयारी को अनबाउंड संयुग्म से खारा (पीएच 7.2 - 7.5) से धोया जाता है, हवा में सुखाया जाता है, एक गैर-फ्लोरोसेंट तेल के साथ लगाया जाता है और एक माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है।

प्रत्यक्ष विधि एंटीजन की पहचान और पहचान की अनुमति देती है। ऐसा करने के लिए, आपके पास प्रत्येक वायरस के लिए फ्लोरोसेंट सीरम होना चाहिए।

अप्रत्यक्ष विधि (दो-चरणीय)... पुटीय वायरस के प्रति एंटीबॉडी युक्त एक गैर-लेबल सीरम को निश्चित तैयारी पर लागू किया जाता है, 37 डिग्री सेल्सियस पर 30 मिनट के लिए इनक्यूबेट किया जाता है, अनबाउंड एंटीबॉडी को धोया जाता है। तैयारी के लिए एक फ्लोरोसेंट एंटी-प्रजाति सीरम लागू किया जाता है, जो कि जानवर के प्रकार के अनुरूप होता है - 37 डिग्री सेल्सियस पर 30 मिनट के लिए ऊष्मायन किया जाता है। फिर तैयारी को अनबाउंड लेबल एंटीबॉडी से धोया जाता है, हवा में सुखाया जाता है, एक गैर-फ्लोरोसेंट तेल के साथ लगाया जाता है और एक फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है।

एंटीवायरल सीरा जानवरों को उन प्रजातियों के ग्लोब्युलिन से प्रतिरक्षित करके प्राप्त किया जाता है जो एंटीवायरल एंटीबॉडी के उत्पादक के रूप में काम करते हैं। इसलिए, यदि खरगोशों पर एंटीवायरल एंटीबॉडी प्राप्त की जाती हैं, तो फ्लोरोसेंट एंटी-खरगोश सीरम का उपयोग किया जाता है।

अप्रत्यक्ष विधि न केवल एंटीजन का पता लगाने और पहचानने की अनुमति देती है, बल्कि एंटीबॉडी टिटर को प्रकट और निर्धारित करने की भी अनुमति देती है। इसके अलावा, यह विधि एक लेबल वाले सीरम के साथ विभिन्न वायरस के एंटीजन का पता लगा सकती है, क्योंकि यह एंटी-प्रजाति सेरा के उपयोग पर आधारित है। एंटी-खरगोश, एंटी-बोवाइन, एंटी-हॉर्स सीरम और एंटी-गिनी पिग ग्लोब्युलिन सीरम का अधिक बार उपयोग किया जाता है।

अप्रत्यक्ष पद्धति के कई संशोधन विकसित किए गए हैं। सबसे उल्लेखनीय पूरक विधि है। विधि में निष्क्रिय गैर-फ्लोरोसेंट विशिष्ट सीरम और गिनी पिग पूरक को निर्धारित तैयारी के लिए लागू करना, 37 डिग्री सेल्सियस पर 30 मिनट के लिए ऊष्मायन, धोने और प्रतिजन + एंटीबॉडी + पूरक परिसर का पता लगाने के लिए फ्लोरोसेंट एंटी-पूरक सीरम लगाने, के लिए ऊष्मायन शामिल है 37 डिग्री सेल्सियस पर 30 मिनट, धोया, हवा में सुखाया और एक फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप के तहत जांच की गई।

आरआईएफ के लाभ: उच्च विशिष्टता और संवेदनशीलता; मंचन तकनीक की सादगी; घटकों की एक न्यूनतम संख्या की आवश्यकता है। यह एक एक्सप्रेस डायग्नोस्टिक पद्धति है, क्योंकि आप कुछ घंटों के भीतर उत्तर प्राप्त कर सकते हैं। नुकसान में चमक की तीव्रता का आकलन करने में व्यक्तिपरकता शामिल है और दुर्भाग्य से, कभी-कभी फ्लोरोसेंट सेरा खराब गुणवत्ता के होते हैं। वर्तमान में, जानवरों में वायरल रोगों के निदान में आरआईएफ का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है।

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इम्यूनोफ्लोरेसेंस विधि (आरआईएफ, इम्यूनोफ्लोरेसेंस प्रतिक्रिया, कून्स प्रतिक्रिया) फ्लोरोक्रोम के साथ संयुग्मित एबी का उपयोग करके विशिष्ट एआर का पता लगाने की एक विधि है। उच्च संवेदनशीलता और विशिष्टता रखता है।

इसका उपयोग संक्रामक रोगों (परीक्षण सामग्री में रोगज़नक़ की पहचान) के साथ-साथ एब और सतह रिसेप्टर्स और ल्यूकोसाइट्स (इम्यूनोफेनोटाइपिंग) और अन्य कोशिकाओं के मार्करों के निर्धारण के लिए किया जाता है।

फ्लोरोसेंट एंटीबॉडी (सीरा) का उपयोग करके संक्रामक सामग्री, पशु ऊतकों और सेल संस्कृतियों में बैक्टीरिया और वायरल एंटीजन का पता लगाने का व्यापक रूप से नैदानिक ​​अभ्यास में उपयोग किया जाता है। फ्लोरोसेंट सेरा की तैयारी कुछ फ़्लोरोक्रोम (उदाहरण के लिए, फ़्लोरेसिन आइसोथियोसाइनेट) की क्षमता पर आधारित होती है, जो उनकी प्रतिरक्षात्मक विशिष्टता को प्रभावित किए बिना मट्ठा प्रोटीन के साथ रासायनिक रूप से बंध जाती है।

विधि तीन प्रकार की होती है: प्रत्यक्ष, अप्रत्यक्ष, पूरक के साथ। प्रत्यक्ष आरआईएफ विधि इस तथ्य पर आधारित है कि फ्लोरोक्रोम के साथ लेबल किए गए एंटीबॉडी के साथ प्रतिरक्षा सीरा के साथ इलाज किए गए ऊतक प्रतिजन या रोगाणु एक फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप की यूवी किरणों में चमकने में सक्षम हैं। इस तरह के एक ल्यूमिनसेंट सीरम के साथ इलाज किए गए स्मीयर में बैक्टीरिया एक हरे रंग की सीमा के रूप में कोशिका की परिधि के साथ चमकते हैं।

अप्रत्यक्ष आरआईएफ विधि में फ्लोरोक्रोम के साथ लेबल किए गए एंटीग्लोबुलिन (एंटीबॉडी के खिलाफ) सीरम का उपयोग करके एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स का पता लगाना शामिल है। इसके लिए, रोगाणुओं के निलंबन से स्मीयर का उपचार रोगाणुरोधी खरगोश निदान सीरम के एंटीबॉडी के साथ किया जाता है। फिर एंटीबॉडी जो रोगाणुओं के प्रतिजनों को बाध्य नहीं करते हैं, उन्हें धोया जाता है, और रोगाणुओं पर शेष एंटीबॉडी का पता फ़्लोरोक्रोम के साथ लेबल किए गए एंटीग्लोबुलिन (एंटी-खरगोश) सीरम के साथ धब्बा का इलाज करके लगाया जाता है। नतीजतन, फ्लोरोक्रोम के साथ लेबल किए गए माइक्रोब + एंटीमिक्राबियल खरगोश एंटीबॉडी + एंटी-खरगोश एंटीबॉडी का एक परिसर बनता है। यह परिसर एक फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप में देखा जाता है, जैसा कि प्रत्यक्ष विधि में होता है।

तंत्र। परीक्षण सामग्री से एक स्मीयर एक स्लाइड पर तैयार किया जाता है, एक लौ पर तय किया जाता है और रोगज़नक़ के प्रतिजनों के खिलाफ एंटीबॉडी युक्त प्रतिरक्षा खरगोश सीरम के साथ इलाज किया जाता है। एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स बनाने के लिए, दवा को एक आर्द्र कक्ष में रखा जाता है और 15 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया जाता है, जिसके बाद एंटीबॉडी को हटाने के लिए इसे आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान से अच्छी तरह से धोया जाता है जो एंटीजन से बंधे नहीं होते हैं। फिर खरगोश ग्लोब्युलिन के खिलाफ फ्लोरोसेंट एंटीग्लोबुलिन सीरम को 37 डिग्री सेल्सियस पर 15 मिनट के लिए रखा जाता है, और फिर आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान के साथ तैयारी को अच्छी तरह से धोया जाता है। फ्लोरोसेंट एंटीग्लोबुलिन सीरम को एंटीजन पर तय किए गए विशिष्ट एंटीबॉडी के बंधन के परिणामस्वरूप, चमकदार एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स बनते हैं, जिन्हें ल्यूमिनेसिसेंस माइक्रोस्कोपी द्वारा पता लगाया जाता है।

4. नर्सरी के बेडरूम की हवा में स्ट्रेप्टोकोकस के 75 mt/m3, staphylococcus के 12 mt/m3 और तपेदिक के 1 mt/m3 बैक्टीरिया पाए गए। वायु का स्वच्छता और जीवाणु विज्ञान संबंधी मूल्यांकन दें और इसके पुनर्गठन की योजना की रूपरेखा तैयार करें।

परीक्षा टिकट संख्या _54

रेट्रोवायरस। एचआईवी संक्रमण (एड्स) और इसके प्रेरक कारक।

मानव इम्युनोडेफिशिएंसी वायरस एचआईवी संक्रमण का कारण बनता है, जिसके परिणामस्वरूप अधिग्रहित प्रतिरक्षा कमी सिंड्रोम का विकास होता है।

एचआईवी संक्रमण का प्रेरक एजेंट रेट्रोविरिडे परिवार, जीनस लेंटिवायरस से संबंधित एक लिम्फोट्रोपिक वायरस है।

रूपात्मक गुण: आरएनए युक्त वायरस। गोलाकार वायरल कण लिफाफे में ग्लाइकोप्रोटीन के साथ एक डबल लिपिड परत होती है। लिपिड झिल्ली मेजबान कोशिका के प्लाज्मा झिल्ली से आती है जिसमें वायरस प्रजनन करता है। ग्लाइकोप्रोटीन अणु में 2 सबयूनिट होते हैं जो विषाणु की सतह पर स्थित होते हैं और इसके लिपिड झिल्ली को भेदते हैं।

वायरस का मूल शंकु के आकार का होता है और इसमें कैप्सिड प्रोटीन, कई मैट्रिक्स प्रोटीन और प्रोटीज प्रोटीन होते हैं। जीनोम आरएनए के दो स्ट्रैंड बनाता है; प्रजनन की प्रक्रिया के लिए, एचआईवी में रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस या रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस होता है।

वायरस के जीनोम में 3 प्रमुख संरचनात्मक जीन और 7 नियामक और कार्यात्मक जीन होते हैं। कार्यात्मक जीन नियामक कार्य करते हैं और प्रजनन प्रक्रियाओं के कार्यान्वयन और संक्रामक प्रक्रिया में वायरस की भागीदारी सुनिश्चित करते हैं।

वायरस मुख्य रूप से टी- और बी-लिम्फोसाइट्स, मोनोसाइटिक श्रृंखला (मैक्रोफेज, ल्यूकोसाइट्स) की कुछ कोशिकाओं, तंत्रिका तंत्र की कोशिकाओं को प्रभावित करता है।

सांस्कृतिक गुण: टी-लिम्फोसाइटों और मानव मोनोसाइट्स की कोशिका संवर्धन पर (आईएल-2 की उपस्थिति में)।

एंटीजेनिक संरचना: 2 प्रकार के वायरस - एचआईवी -1 और एचआईवी -2 एचआईवी -1, 10 से अधिक जीनोटाइप (उपप्रकार) हैं: ए, बी, सी, डी, ई, एफ ..., अमीनो एसिड संरचना में भिन्न प्रोटीन।

HIV-1 को 3 समूहों में विभाजित किया गया है: M, N, O. अधिकांश आइसोलेट्स समूह M से संबंधित हैं, जिसमें 10 उपप्रकार प्रतिष्ठित हैं: A, B, C, D, Fl, F-2, G, H, I, K प्रतिरोध: भौतिक और रासायनिक कारकों के प्रति संवेदनशील, गर्म होने पर मर जाता है। सूखे रक्त में, सूखे अवस्था में वायरस लंबे समय तक बना रह सकता है।

रोगजनकता कारक, रोगजनन: वायरस लिम्फोसाइट से जुड़ता है, कोशिका में प्रवेश करता है और लिम्फोसाइट में प्रजनन करता है। लिम्फोसाइटों में एचआईवी के गुणन के परिणामस्वरूप, बाद वाले नष्ट हो जाते हैं या अपने कार्यात्मक गुणों को खो देते हैं। विभिन्न कोशिकाओं में वायरस के गुणन के परिणामस्वरूप, यह अंगों और ऊतकों में जमा हो जाता है, और यह रक्त, लसीका, लार, मूत्र, पसीना और मल में पाया जाता है।

एचआईवी संक्रमण में, टी -4 लिम्फोसाइटों की संख्या कम हो जाती है, बी-लिम्फोसाइटों का कार्य बिगड़ा हुआ है, प्राकृतिक हत्यारे कोशिकाओं का कार्य दब जाता है और एंटीजन की प्रतिक्रिया कम हो जाती है और पूरक, लिम्फोसाइट्स और प्रतिरक्षा कार्यों को नियंत्रित करने वाले अन्य कारकों का उत्पादन होता है। (आईएल) बिगड़ा हुआ है, जिसके परिणामस्वरूप प्रतिरक्षा में शिथिलता है। सिस्टम।

क्लिनिक: श्वसन तंत्र प्रभावित होता है (निमोनिया, ब्रोंकाइटिस); केंद्रीय तंत्रिका तंत्र (फोड़े, मेनिन्जाइटिस); गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल ट्रैक्ट (दस्त), घातक नियोप्लाज्म (आंतरिक अंगों के ट्यूमर) होते हैं।

एचआईवी संक्रमण कई चरणों में आगे बढ़ता है: 1) ऊष्मायन अवधि, औसतन 2-4 सप्ताह; 2) प्राथमिक अभिव्यक्तियों का चरण, सबसे पहले तीव्र बुखार, दस्त द्वारा विशेषता; चरण एक स्पर्शोन्मुख चरण और वायरस की दृढ़ता के साथ समाप्त होता है, भलाई की बहाली, हालांकि, एचआईवी एंटीबॉडी रक्त में निर्धारित होते हैं, 3) माध्यमिक रोगों का चरण, श्वसन और तंत्रिका तंत्र को नुकसान से प्रकट होता है। एचआईवी संक्रमण अंतिम, चौथे टर्मिनल चरण - एड्स के साथ समाप्त होता है।

सूक्ष्मजीवविज्ञानी निदान।

वायरोलॉजिकल और सीरोलॉजिकल अध्ययनों में एचआईवी एंटीजन और एंटीबॉडी का निर्धारण करने के तरीके शामिल हैं। इसके लिए एलिसा, आईबी और पीसीआर का इस्तेमाल किया जाता है। एचआईवी -1 और एचआईवी -2 रोगियों के सीरा में सभी वायरल प्रोटीन के प्रति एंटीबॉडी होते हैं। हालांकि, निदान की पुष्टि करने के लिए, HIV-1 में gp41, gpl20, gpl60, p24 प्रोटीन के प्रति एंटीबॉडी और HIV-2 में gp36, gpl05, gpl40 प्रोटीन के प्रतिरक्षी निर्धारित किए जाते हैं। एचआईवी एंटीबॉडी संक्रमण के 2-4 सप्ताह बाद दिखाई देते हैं और एचआईवी के सभी चरणों में पाए जाते हैं।

रक्त, लिम्फोसाइटों में वायरस का पता लगाने की विधि। हालांकि, किसी भी सकारात्मक नमूने के मामले में, आईबी प्रतिक्रिया परिणामों की पुष्टि करने के लिए निर्धारित है। पीसीआर का भी उपयोग किया जाता है, जो ऊष्मायन और प्रारंभिक नैदानिक ​​अवधि में एचआईवी संक्रमण का पता लगाने में सक्षम है, लेकिन इसकी संवेदनशीलता एलिसा की तुलना में कुछ कम है।

नैदानिक ​​​​और सीरोलॉजिकल निदान की पुष्टि प्रतिरक्षाविज्ञानी अध्ययनों द्वारा की जाती है यदि वे जांच किए गए रोगी में इम्युनोडेफिशिएंसी की उपस्थिति का संकेत देते हैं।

एचआईवी के प्रति एंटीबॉडी के निर्धारण के लिए डायग्नोस्टिक एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट परख - एक वाहक पर adsorbed वायरल एंटीजन, मानव Ig के खिलाफ एंटीबॉडी शामिल हैं। एड्स सेरोडायग्नोसिस के लिए उपयोग किया जाता है।

उपचार: सक्रिय कोशिकाओं में कार्य करने वाले रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस अवरोधकों का उपयोग। दवाएं थाइमिडीन डेरिवेटिव हैं - एज़िडोथाइमिडीन और फॉस्फेज़ाइड।

निवारण। विशिष्ट - नहीं।

रोगाणुओं पर भौतिक और रासायनिक कारकों का प्रभाव। उत्परिवर्तन और व्यावहारिक चिकित्सा के लिए इसका महत्व। उदाहरण। पारिस्थितिकी का महत्व।

रासायनिक और जैविक कारकों की कार्रवाई।

रसायनों की क्रिया

रसायन सूक्ष्मजीवों के विकास को रोक सकते हैं या पूरी तरह से रोक सकते हैं। यदि रसायन बैक्टीरिया के विकास को रोकता है, लेकिन हटाने के बाद, उनकी वृद्धि फिर से शुरू हो जाती है।

रोगाणुरोधी पदार्थ, रासायनिक संरचना और बैक्टीरिया पर उनकी जीवाणुनाशक कार्रवाई के तंत्र को ध्यान में रखते हुए, निम्नलिखित समूहों में विभाजित किया जा सकता है: ऑक्सीडेंट, हैलोजन, धातु यौगिक, एसिड और क्षार, सर्फेक्टेंट, अल्कोहल, रंजक, फिनोल और फॉर्मलाडेहाइड डेरिवेटिव।

ऑक्सीडाइज़िंग एजेंट। इस समूह में हाइड्रोजन पेरोक्साइड और पोटेशियम परमैंगनेट शामिल हैं।

हलोजन। क्लोरीन, आयोडीन और उनकी तैयारी: ब्लीच, क्लोरैमाइन बी, पैंटोसिड, अल्कोहल आयोडीन घोल 5%, आयोडिनॉल, आयोडोफॉर्म।

भारी धातुओं के यौगिक (सीसा, तांबा, जस्ता, चांदी, पारा के लवण; चांदी के कार्बनिक यौगिक: प्रोटारगोल, कॉलरगोल)। ये यौगिक मैक्रोऑर्गेनिज्म के ऊतकों पर रोगाणुरोधी और विभिन्न स्थानीय प्रभावों दोनों को लागू करने में सक्षम हैं।

अम्ल और क्षार। एसिड और क्षार की जीवाणुनाशक क्रिया सूक्ष्मजीवों के निर्जलीकरण, पोषक माध्यम के पीएच में परिवर्तन, कोलाइडल सिस्टम के हाइड्रोलिसिस और अम्लीय या क्षारीय एल्बुमिनेट्स के गठन पर आधारित होती है।

रंगों में बैक्टीरिया के विकास को रोकने की क्षमता होती है। वे धीरे-धीरे लेकिन अधिक चयनात्मक रूप से कार्य करते हैं।

फॉर्मलडिहाइड एक रंगहीन गैस है। व्यवहार में, फॉर्मलाडेहाइड (फॉर्मेलिन) के 40% जलीय घोल का उपयोग किया जाता है। पानी में घुलने वाले गैसीय फॉर्मेल्डिहाइड बैक्टीरिया के वानस्पतिक और बीजाणु रूपों पर हानिकारक प्रभाव डालते हैं।

जैविक कारकों की क्रिया

जैविक कारकों की क्रिया मुख्य रूप से रोगाणुओं के विरोध में प्रकट होती है, जब कुछ रोगाणुओं के अपशिष्ट उत्पाद दूसरों की मृत्यु का कारण बनते हैं।

एंटीबायोटिक्स (ग्रीक एंटी-अगेंस्ट, बायोस-लाइफ से) जैविक रूप से सक्रिय पदार्थ हैं जो कवक, बैक्टीरिया, जानवरों, पौधों के जीवन के दौरान बनते हैं और कृत्रिम रूप से बनाए जाते हैं, जो सूक्ष्मजीवों, कवक, रिकेट्सिया, बड़े वायरस, प्रोटोजोआ को चुनिंदा रूप से दबाने और मारने में सक्षम होते हैं। व्यक्तिगत हेलमन्थ्स।

3. गठिया, नैदानिक ​​और व्यावहारिक मूल्य में जीवाणु एंजाइमों की जैविक गतिविधि की प्रतिक्रिया, अधिग्रहित प्रतिरक्षा में एंजाइमों के खिलाफ एंटीबॉडी की सुरक्षात्मक भूमिका (एंटीहायलूरोनिडेस और एंटी ओ-स्ट्रेप्टोलिसिन का निर्धारण)।

गठिया एक संक्रामक और एलर्जी प्रकृति की एक आम बीमारी है, जिसमें संयोजी ऊतक प्रभावित होता है, मुख्य रूप से हृदय प्रणाली, साथ ही जोड़ों, आंतरिक अंगों और केंद्रीय तंत्रिका तंत्र। यह माना जाता है कि गठिया के विकास का कारण रोगजनक सूक्ष्मजीवों की सक्रियता है, मुख्य रूप से बीटा-हेमोलिटिक स्ट्रेप्टोकोकस समूह ए। यह वह है जिसे आमवाती रोग के एटियलजि और रोगजनन में मुख्य भूमिका सौंपी जाती है। सबसे पहले, रोग स्ट्रेप्टोकोकल संक्रमण की पृष्ठभूमि के खिलाफ विकसित होता है। दूसरे, इस समूह के सूक्ष्मजीवों के प्रति एंटीबॉडी की एक बड़ी मात्रा रोगियों के रक्त में पाई जाती है। तीसरा, रोग की रोकथाम जीवाणुरोधी दवाओं के साथ सफलतापूर्वक की जाती है।

संधिशोथ में, श्लेष झिल्ली, अज्ञात कारणों से, बड़ी मात्रा में एंजाइम ग्लूकोज-6-फॉस्फेट डिहाइड्रोजनेज का स्राव करती है, जो कोशिका झिल्ली में डाइसल्फ़ाइड बांड को भी नष्ट कर देती है। इस मामले में, सेलुलर लाइसोसोम से प्रोटीयोलाइटिक एंजाइमों का "रिसाव" होता है, जो आस-पास की हड्डियों और उपास्थि को नुकसान पहुंचाता है। शरीर साइटोकिन्स का उत्पादन करके इस पर प्रतिक्रिया करता है, जिसमें ट्यूमर नेक्रोसिस फैक्टर α TNF-α भी होता है। कोशिकाओं में प्रतिक्रियाओं के कैस्केड, जो साइटोकिन्स द्वारा ट्रिगर होते हैं, रोग के लक्षणों को और बढ़ा देते हैं। TNF-α से जुड़ी पुरानी रुमेटी सूजन अक्सर उपास्थि और जोड़ों को नुकसान पहुंचाती है, जिससे शारीरिक अक्षमता होती है।

61. इम्यूनोफ्लोरेसेंस प्रतिक्रिया। तंत्र, घटक, अनुप्रयोग। मंचन के प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष तरीके।

विधि के तीन मुख्य प्रकार हैं: प्रत्यक्ष, अप्रत्यक्ष (चित्र 13.10), पूरक के साथ। कून्स प्रतिक्रिया रोगाणुओं के प्रतिजनों का पता लगाने या एंटीबॉडी का निर्धारण करने के लिए एक तेजी से निदान पद्धति है।

प्रत्यक्ष आरआईएफ विधि इस तथ्य के आधार पर कि फ्लूरोक्रोम के साथ लेबल किए गए एंटीबॉडी के साथ प्रतिरक्षा सीरा के साथ इलाज किए गए ऊतक प्रतिजन या रोगाणु एक ल्यूमिनसेंट माइक्रोस्कोप की यूवी किरणों में चमकने में सक्षम हैं। एक स्मीयर में बैक्टीरिया इस तरह के ल्यूमिनसेंट सीरम चमक के साथ सेल परिधि के साथ एक के रूप में चमकते हैं हरी सीमा।

अप्रत्यक्ष आरआईएफ विधि फ्लोरोक्रोम के साथ लेबल किए गए एंटीग्लोबुलिन (एंटीबॉडी के खिलाफ) सीरम का उपयोग करके एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स की पहचान करना शामिल है। इसके लिए, रोगाणुओं के निलंबन से स्मीयर का उपचार रोगाणुरोधी खरगोश निदान सीरम के एंटीबॉडी के साथ किया जाता है। फिर एंटीबॉडी जो रोगाणुओं के प्रतिजनों को बाध्य नहीं करते हैं, उन्हें धोया जाता है, और रोगाणुओं पर शेष एंटीबॉडी का पता फ़्लोरोक्रोम के साथ लेबल किए गए एंटीग्लोबुलिन (एंटी-खरगोश) सीरम के साथ धब्बा का इलाज करके लगाया जाता है। नतीजतन, फ्लोरोक्रोम के साथ लेबल किए गए माइक्रोब + एंटीमिक्राबियल खरगोश एंटीबॉडी + एंटी-खरगोश एंटीबॉडी का एक परिसर बनता है। यह परिसर एक फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप में देखा जाता है, जैसा कि प्रत्यक्ष विधि में होता है।

एक लेबल के रूप में चमकदार फ्लोरोक्रोम रंजक (फ्लोरिसिन आइसोथियोसाइनेट, आदि) का उपयोग किया जाता है।

आरआईएफ के विभिन्न संशोधन हैं। संक्रामक रोगों के स्पष्ट निदान के लिए - परीक्षण सामग्री में रोगाणुओं या उनके प्रतिजनों का पता लगाने के लिए, कून के अनुसार आरआईएफ का उपयोग किया जाता है।

कून के अनुसार आरआईएफ के दो तरीके हैं: प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष।

प्रत्यक्ष आरआईएफ घटक:
1) अध्ययन के तहत सामग्री (आंत्र आंदोलन, नासोफरीनक्स, आदि);
2) वांछित प्रतिजन के लिए एटी-ला युक्त विशिष्ट प्रतिरक्षा सीरम लेबल;
3) आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान।
परीक्षण सामग्री से एक स्मीयर को लेबल एंटीसेरम से उपचारित किया जाता है।
AG-AT अभिक्रिया होती है। ल्यूमिनेसेंस सूक्ष्म परीक्षा के दौरान, उस क्षेत्र में जहां एजी-एटी परिसरों को स्थानीयकृत किया जाता है, प्रतिदीप्ति का पता लगाया जाता है - ल्यूमिनेसिसेंस।

अप्रत्यक्ष आरआईएफ घटक:
1) अध्ययन के तहत सामग्री;
2) विशिष्ट एंटीसेरम;
3) एंटीग्लोबुलिन सीरम (इम्युनोग्लोबुलिन के खिलाफ एटी-ला), फ्लोरीक्रोम के साथ लेबल;
4) आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड घोल।

परीक्षण सामग्री से एक स्मीयर को पहले प्रतिरक्षा सीरम के साथ वांछित एंटीजन के साथ इलाज किया जाता है, और फिर लेबल किए गए एंटीग्लोबुलिन सीरम के साथ।

ग्लोइंग कॉम्प्लेक्स एजी-एटी - लेबल एटी एक फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप का उपयोग करके पता लगाया जाता है।
अप्रत्यक्ष विधि का लाभ यह है कि विशिष्ट फ्लोरोसेंट सीरा की एक विस्तृत श्रृंखला तैयार करने की कोई आवश्यकता नहीं है, और केवल एक फ्लोरोसेंट एंटीग्लोबुलिन सीरम का उपयोग किया जाता है।

अप्रत्यक्ष आरआईएफ की एक 4-घटक किस्म को भी अलग किया जाता है, जब पूरक अतिरिक्त रूप से पेश किया जाता है (गिनी पिग सीरम)। सकारात्मक प्रतिक्रिया के साथ, एजी-एटी - लेबल - एटी-पूरक का एक परिसर बनता है।

विषयसूची:

सीधे रास्ते

डार्क फील्ड माइक्रोस्कोपी

पेल ट्रेपोनिमा पोषक मीडिया पर विकसित नहीं हो सकते हैं और एक प्रकाश माइक्रोस्कोप के तहत कल्पना नहीं की जाती है। चूंकि पारंपरिक माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके एक रोगज़नक़ का पता लगाना असंभव है, एक अंधेरे क्षेत्र के साथ एक विशेष माइक्रोस्कोप का उपयोग किया जाता है, जहां रोगज़नक़ एक अंधेरे पृष्ठभूमि के खिलाफ एक सर्पिल के रूप में दिखाई देता है।

माइक्रोस्कोपी के लिए, एक रोग के लिए संदिग्ध घाव से एक बायोमटेरियल लिया जाता है। डार्कफील्ड माइक्रोस्कोपी त्वचा के घावों का आकलन करने का एक संभावित तरीका है जैसे कि प्राथमिक सिफलिस का चैंक्र या माध्यमिक सिफलिस का कॉन्डिलोमा। यदि मैकुलोपापुलर फोकस की सामग्री सूखी है, तो लिम्फ नोड एस्पिरेट की जांच की जाती है।

एक नकारात्मक परिणाम एक रोग प्रक्रिया को बाहर नहीं करता है, सांख्यिकीय रूप से रोगज़नक़ की पहचान केवल 80% में संभव है।

पीसीआर निदान

ट्रेपोनिमा पैलिडम के डीएनए में कई वृद्धि के उद्देश्य से प्रतिक्रिया, सिफलिस के संक्रमण या इसकी अनुपस्थिति के बारे में निष्कर्ष निकालना संभव बनाती है।

विश्लेषण के लिए कोई भी जैव सामग्री हो सकती है: रक्त, उपदंश की सामग्री, मस्तिष्कमेरु द्रव, आदि। परीक्षण ऊष्मायन अवधि के लिए उपयुक्त है।

पीसीआर पूरी तरह से विशिष्ट है।

उपदंश के लिए अप्रत्यक्ष सीरोलॉजिकल परीक्षण: ट्रेपोनेमल और गैर-ट्रेपोनेमल परीक्षण

सीरोलॉजिकल परीक्षण (डीएसी या सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाओं का एक जटिल) सिफलिस के सभी चरणों का निदान करने का सबसे आम तरीका माना जाता है। निम्नलिखित प्रतिक्रियाएं प्रतिष्ठित हैं:

• समूहन;
• वर्षण;
• इम्यूनोफ्लोरेसेंस;
• एंजाइम इम्युनोसे, आदि।

इसके अलावा, उपदंश के लिए सीरोलॉजिकल परीक्षणों को ट्रेपोनेमल और गैर-ट्रेपोनेमल में विभाजित किया गया है।

गैर treponemal

यदि अधिग्रहित उपदंश का संदेह है, तो स्क्रीनिंग परीक्षण किया जाता है, जिसके लिए वे उपयोग करते हैं गैर-ट्रेपोनेमल परीक्षण विभिन्न संशोधनों में मेजबान या रोगजनक ऊतकों के लिपोइड एंटीजन के प्रति एंटीबॉडी का पता लगाना। रूसी संघ में, एक सूक्ष्म अवक्षेपण प्रतिक्रिया (आरएमपी) नियमित रूप से की जाती है, जो रक्त में रोगज़नक़ द्वारा क्षतिग्रस्त कोशिकाओं को एंटीबॉडी का पता लगाने की अनुमति देती है। स्क्रीनिंग विश्वसनीयता अधिक है, लेकिन विशिष्टता कम है, इसलिए परीक्षण निवारक उद्देश्यों के लिए प्राथमिक सामूहिक स्क्रीनिंग के लिए उपयुक्त है।

प्राथमिक उपदंश के लिए तीव्र परीक्षणों की संवेदनशीलता का अनुमान 78-86%, द्वितीयक उपदंश के लिए 100% और तृतीयक उपदंश के लिए 95-98% है।

विशिष्टता - 85-99% से, कभी-कभी कम, जो निम्न स्थितियों में होती है:

• गर्भावधि;
• मासिक धर्म;
• ऑन्कोलॉजी;
• संयोजी ऊतक रोग;
• वायरल रोग;
• जिगर की बीमारी;
• टीकाकरण;
• "ताजा" एमआई;
• टाइफस, आदि

इसके अलावा, आहार में अतिरिक्त वसा, मादक पेय पीने और कुछ दवाएं लेने से झूठी सकारात्मकता हो सकती है।

चैंकेर बनने के 1-2 सप्ताह बाद स्क्रीनिंग टेस्ट के परिणाम सकारात्मक हो जाते हैं। उपचार के कुछ समय बाद गैर-ट्रेपोनेमल परीक्षण नकारात्मक होते हैं। एचआईवी स्थिति में, गैर-ट्रेपोनेमल एंटीबॉडी का लंबे समय तक पता लगाया जा सकता है, कभी-कभी जीवन भर (जो एक उपयुक्त यादृच्छिक अध्ययन के परिणामों से पुष्टि की जाती है)।

अन्य प्रकार के गैर-ट्रेपोनेमल एसेज़: वीडीआरएल, प्लास्मोरगिन टेस्ट (आरपीआर), टोल्यूडीन रेड टेस्ट, कार्डियोलिपिन एंटीजन कॉम्प्लिमेंट बाइंडिंग टेस्ट (सीएसीके)।

वासरमैन रिएक्शन (RW)

पूरक बंधन संक्रमण के लिए प्रतिरक्षा प्रणाली की प्रतिक्रिया है, परिणाम नकारात्मक ("-") से तेजी से सकारात्मक "++++" या 4 प्लस तक भिन्न होता है।

प्राथमिक उपदंश के प्रारंभिक चरण में, आरडब्ल्यू नकारात्मक है।

ट्रेपोनेमल

किसी भी सकारात्मक या समानार्थक गैर-ट्रेपोनेमल परीक्षण के परिणाम की पुष्टि करने के लिए झूठी सकारात्मकता की संभावना के कारण, उपयोग करें ट्रेपोनेमल परीक्षण:

• इम्यूनोफ्लोरेसेंस प्रतिक्रिया (आरआईएफ);
• रक्तगुल्म (RPHA),
• कक्षा जी इम्युनोग्लोबुलिन (आईजीजी) और इम्युनोग्लोबुलिन एम (आईजीएम) के लिए एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट परख (एलिसा);
• इम्युनोब्लॉटिंग;
• RIBT / RIT (पेल ट्रेपोनिमा के स्थिरीकरण की प्रतिक्रिया)।

चिकित्सा की प्रभावशीलता का आकलन करने के लिए ट्रेपोनेमल परीक्षणों का उपयोग नहीं किया जाता है।

आईजीजी वर्ग के ट्रेपोनेमल एंटीबॉडी के निर्धारण के लिए आरआईएफ का उपयोग एक्सप्रेस परीक्षणों के सकारात्मक परिणाम के बाद किया जाता है (प्राथमिक सिफलिस के लिए संवेदनशीलता 84% और अन्य चरणों के लिए 100%, विशिष्टता 96%)। नवजात शिशुओं में निदान के लिए लागू नहीं है।

कुछ प्रयोगशालाएँ "रिवर्स" स्क्रीनिंग परीक्षणों का उपयोग करती हैं।

सीडीसी (रोग नियंत्रण और रोकथाम केंद्र, यूएसए) पारंपरिक अध्ययनों की सिफारिश करता है, मात्रात्मक गैर-ट्रेपोनेमल परीक्षणों द्वारा सत्यापित, यदि परिणाम सकारात्मक है, तो उपचार किया जाता है।

इम्यूनोफ्लोरेसेंस प्रतिक्रिया (आरआईएफ)

ट्रेपोनिमा एंटीजन के लिए विशिष्ट फ्लोरोक्रोम-लेबल एंटीबॉडी वाले सीरम को एकत्रित सामग्री पर लागू किया जाता है, रोगज़नक़ प्रतिरक्षा परिसरों को अपनी ओर आकर्षित करता है, यही कारण है कि यह एक ल्यूमिनसेंट माइक्रोस्कोप में चमकना शुरू कर देता है।

निष्क्रिय हेमोग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया या RPHA

एरिथ्रोसाइट्स के हेमाग्लगुटिनेशन (आसंजन) की उपस्थिति से पहले, पेल ट्रेपोनिमा की शुरूआत के क्षण से कम से कम 4 सप्ताह बीतने चाहिए।

रोगज़नक़ के निश्चित प्रोटीन अंशों के साथ तैयार एरिथ्रोसाइट्स प्लाज्मा के साथ बातचीत करते हैं, अगर सिफलिस के प्रति एंटीबॉडी होते हैं, तो एक प्रतिक्रिया होती है।

रोग के किसी भी चरण की पुष्टि के लिए उपयुक्त।

लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट परख

यह एंटीजन-एंटीबॉडी प्रतिक्रिया पर आधारित है। विभिन्न वर्गों के एंटीबॉडी का पता लगाया जाता है, जिनकी मात्रा निर्धारित की जा सकती है।

प्राप्त परिणाम रोग प्रक्रिया की अवधि, उपचार की सफलता, प्रतिरक्षात्मक स्थिति, रोगजनकों की गतिविधि का न्याय करना संभव बनाते हैं।

इम्युनोब्लॉटिंग एक प्रकार का एलिसा है जिसका उपयोग सभी संदिग्ध परिणामों के साथ गहन निदान के लिए किया जाता है।

संवेदनशीलता और विशिष्टता 100% के करीब है, जो वर्तमान में प्रोटीन की पहचान के लिए एक अति संवेदनशील तरीका है।

RIBT

विधि एक एंटीजन-एंटीबॉडी प्रतिक्रिया पर आधारित है। खरगोश के अंडकोष में खेती की जाने वाली पेल ट्रेपोनिम्स प्रतिजन के रूप में काम करती हैं। संक्रमित व्यक्ति के एंटीबॉडी के साथ बातचीत करते समय, रोगजनक अपनी गतिशीलता खो देते हैं। डार्क फील्ड माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके प्रतिक्रिया का आकलन किया जाता है।

ध्यान दें

आरआईबीटी वर्तमान में इसकी श्रमसाध्यता के कारण कम बार प्रयोग किया जाता है, लेकिन विश्लेषण विवादास्पद मुद्दों (सिफलिस के लिए झूठी सकारात्मक प्रतिक्रिया) को हल करने के लिए उपयोगी हो सकता है।

विभेदक निदान

सबसे बड़ी कठिनाई तृतीयक उपदंश का निदान है, जो हृदय और तंत्रिका तंत्र के लक्षणों के साथ-साथ त्वचा की अभिव्यक्तियों के कारण होता है।

मरीजों की जांच की जानी चाहिए, और।

हम उन रोगों को सूचीबद्ध करते हैं जिनके साथ उपदंश में विभेदक निदान किया जाता है:

• त्वचा संबंधी अभिव्यक्तियाँ;
• जननांग मस्सा ();
• डोनोवानोसिस;
• ल्यंफोंग्रानुलोमा वेनेरेउम;
• वाइरस;
• जम्हाई

सिफलिस का निदान कैसे शुरू होता है?

प्रारंभ में, रोगी के साथ बातचीत की जाती है, जिसके दौरान विवरण निर्दिष्ट किया जाता है: जब संदेहास्पद यौन संपर्क था और क्या शिकायतें हैं।

इतिहास एकत्र करने के बाद, वे एक शारीरिक परीक्षा के लिए आगे बढ़ते हैं, जननांग और गुदा क्षेत्र, श्लेष्म झिल्ली और लिम्फ नोड्स पर विशेष ध्यान दिया जाता है। एक प्रारंभिक निदान पहले से ही किया जा सकता है। प्रयोगशाला परीक्षणों का उपयोग करके अंतिम सत्यापन होता है।

यदि हम केवल जटिल के बारे में कहते हैं, तो कुछ विश्लेषण सिफलिस के प्रेरक एजेंट की पहचान करते हैं, जबकि अन्य ट्रेपोनिमा पेल की शुरूआत के लिए शरीर की प्रतिक्रिया को दर्शाते हैं।

अंतिम निदान स्थापित करने के लिए, RPHA को 1 ट्रेपोनेमल और 1 गैर-ट्रेपोनेमल विश्लेषण के साथ पूरक किया जाना चाहिए।

गर्भवती महिलाओं में उपदंश का निदान

गर्भावस्था के दौरान सिफलिस के लिए अनिवार्य परीक्षण कई बार किया जाता है।

डीएसी के विश्लेषण के लिए रेफरल महिला की पहली परामर्श यात्रा के दौरान जारी किया जाता है, और गर्भावस्था के दौरान तीन बार परीक्षा की जाती है। एक बोझिल इतिहास वाले उच्च जोखिम वाले समूह के मरीजों: असामाजिक, आदी, आदि को विशेष रूप से निकट ध्यान देने की आवश्यकता होती है।

यदि परीक्षण के परिणाम सकारात्मक हैं, तो एक गहन निदान किया जाता है, और संकेतों के अनुसार, उपचार निर्धारित किया जाता है, जो चरण और नैदानिक ​​​​अभिव्यक्तियों पर निर्भर करता है।

जन्मजात उपदंश का निदान

अधिकांश बच्चे अनुपचारित माताओं या उन लोगों के लिए पैदा होते हैं जिन्हें बहुत देर से उपचार मिला है।

आईजीजी एंटीबॉडी के निष्क्रिय हस्तांतरण के कारण नवजात सीरम का उपयोग करने वाले ट्रेपोनेमल परीक्षणों की सिफारिश नहीं की जाती है। उपदंश से ग्रस्त माताओं से जन्म लेने वाले सभी शिशुओं को नवजात सीरम का उपयोग करके किए गए मात्रात्मक गैर-ट्रेपोनेमल सीरोलॉजिक परीक्षण (आरपीआर या वीडीआरएल) के साथ जांच की जानी चाहिए।

सीरोलॉजिकल परीक्षण के परिणामों की व्याख्या कैसे करें

सूक्ष्म अवक्षेपण प्रतिक्रिया, आरआईएफ और आरपीएचए नकारात्मक हैं - आदर्श, सकारात्मक - उपदंश की पुष्टि।

सूक्ष्म अवक्षेपण प्रतिक्रिया नकारात्मक है, बाकी सकारात्मक हैं - विशिष्ट चिकित्सा के बाद उपदंश का इतिहास, या देर से चरण।

सकारात्मक RPHA और सूक्ष्म अवक्षेपण प्रतिक्रिया के साथ नकारात्मक RIF - परिणाम संदिग्ध, बार-बार जटिल मूल्यांकन है।

RIF और सूक्ष्म अवक्षेपण का एक नकारात्मक परिणाम है, लेकिन एक सकारात्मक RPHA सफल एंटीबायोटिक चिकित्सा या गलत सकारात्मक परिणाम के बाद की स्थिति है।

नकारात्मक RPHA और सूक्ष्म अवक्षेपण प्रतिक्रियाओं के साथ सकारात्मक RIF - एक प्रारंभिक चरण, उपचार या परिणाम की अविश्वसनीयता।

एक सकारात्मक सूक्ष्म अवक्षेपण प्रतिक्रिया, जिसकी पुष्टि RPHA या RIF द्वारा नहीं की जाती है, उपदंश की अनुपस्थिति है।

उपदंश में वाद्य अनुसंधान

अंगों की भागीदारी के आधार पर वाद्य निदान किया जाता है। उदाहरण के लिए, पेट में granulomatous जिगर की क्षति देखी जा सकती है।

तृतीयक उपदंश के रोगी महाधमनी का फैलाव दिखा सकते हैं। महाधमनी के साथ रैखिक कैल्सीफिकेशन सिफिलिटिक महाधमनी का सुझाव देता है।