Agglutination की प्रतिक्रिया की कार्रवाई पर आधारित क्या है। त्वरित agglutination प्रतिक्रियाओं के लिए विकल्प

इन प्रतिक्रियाओं में, कणों के रूप में एंटीजन (माइक्रोबियल कोशिकाएं, एरिथ्रोसाइट्स और अन्य कॉर्पस्क्यूलर एंटीजन) शामिल हैं, जो एंटीबॉडी के साथ चिपके हुए हैं और तलछट में गिर जाते हैं।

Agglutination की प्रतिक्रिया बनाने के लिए (आरए) तीन घटकों की आवश्यकता है: 1) एंटीजन (agglutinogen);

2) एंटीबॉडी (agglutinin)

3) इलेक्ट्रोलाइट (सोडियम क्लोराइड का आइसोटोनिक समाधान)।

अनुमानित agglutination प्रतिक्रिया (आरए)

लगभग, या लैमेलर, आरए कमरे के तापमान पर ग्लास ग्लास पर रखा जाता है। इसके लिए, गिलास पर पाश्चर विंदुक को सीरम ड्रॉप से \u200b\u200bकमजोर पड़ने में 1:10 - 1:20 और आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान की नियंत्रण ड्रॉप से \u200b\u200bअलग से लागू किया जाता है। एक और एक और बैक्टीरियोलॉजिकल लूप, कॉलोनियों या बैक्टीरिया की दैनिक संस्कृति (डायग्नोस्टिकम की एक बूंद) बनाई जाती है और उन्हें अच्छी तरह मिलाया जाता है। प्रतिक्रियाएं कुछ मिनटों में दृष्टि से होती हैं, कभी-कभी एक आवर्धक ग्लास (x5) के साथ। एक सकारात्मक आरए के साथ, सीरम के साथ एक बूंद बड़े और छोटे फ्लेक्स की उपस्थिति को चिह्नित करती है, नकारात्मक - सीरम समान रूप से गंदे बनी हुई है।

अंजीर। 2. अनुमानित agglutination प्रतिक्रिया।

विस्तारित प्रतिक्रिया agglutination रोगी में विशिष्ट एंटीबॉडी के टिटर की पहचान करने के लिए।

सेरोडायग्नोसिस के लिए तैनात आरए को रोगियों के सीरम में रखा जाता है। यह तलाकशुदा और सोडियम क्लोराइड का 1:50 - 1: 100 से 1: 800 या 1: 1600 तक है। स्वस्थ लोगों या रोगियों में एक अलग निदान (नैदानिक \u200b\u200bशीर्षक) के साथ उपलब्ध सामान्य agglutinins कम सीरम परीक्षण में हो सकता है। डायग्नोस्टिकम का उपयोग इस प्रतिक्रिया में एंटीजन के रूप में किया जाता है - स्पष्ट रूप से ज्ञात निलंबन, एक नियम के रूप में, बैक्टीरिया को मार दिया जाता है।

Agglutination ट्यूबों को प्रारंभिक रूप से 1 मिलीलीटर आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान में गिरा दिया जाता है। उनमें से पहले में, सीरम के 1 मिलीलीटर को 1: 100 पतला, और, इसे मिलाकर, 1 मिलीलीटर दूसरे को दूसरे स्थान पर स्थानांतरित किया जाता है - तीसरे स्थान पर। सीरम के दो बार dilutions (1: 100 से 1: 1600 या अधिक) में, 1 मिलीलीटर में 3 बिलियन माइक्रोबियल निकाय युक्त बैक्टीरिया के निलंबन की 1-2 बूंदें बनाई जाती हैं। टेस्ट ट्यूबों को हिलाकर 37 डिग्री सेल्सियस पर थर्मोस्टेट में 2 घंटे के लिए रखा गया है, फिर दिन कमरे के तापमान पर रखा जाता है।

तैनात agglutination की प्रतिक्रिया के लिए लेखांकन प्रत्येक परीक्षण ट्यूब का आकलन करके, सावधानीपूर्वक हिलाने के साथ नियंत्रण से शुरू होता है। नियंत्रण के नियंत्रण ट्यूबों में नहीं होना चाहिए। Agglutination की प्रतिक्रिया की तीव्रता निम्नलिखित संकेतों द्वारा नोट किया गया है: ++++ - पूर्ण agglutination (पूर्ण पारदर्शी तरल में agglutination फ्लेक्स); +++ - अपूर्ण agglutination (कमजोर अवशोषित तरल पदार्थ में फ्लेक्स); ++ - आंशिक agglutination (फ्लेक्स स्पष्ट रूप से अलग, तरल थोड़ा टर्बिड); + - कमजोर, संदिग्ध agglutination - एक बहुत ही टर्बिड तरल, इसमें फ्लेक्स खराब अंतर हैं; - - एग्लूटिनेशन की अनुपस्थिति (तरल समान रूप से टर्बिड है)।

बाद की प्रजनन पर, जिसमें एग्लूटिनेशन की तीव्रता कम से कम दो प्लस (++) अनुमानित है

अंजीर। 7. agglutination प्रतिक्रिया तैनात।

अप्रत्यक्ष (निष्क्रिय) हेमग्लुटिनेशन (आरएलएम, आरपीजीए) की प्रतिक्रिया

प्रतिक्रिया निर्धारित की गई है:

1) Polysaccharides, प्रोटीन, बैक्टीरिया के निष्कर्षों और अन्य अत्यधिक फैलाने वाले पदार्थों, रिकेट्सिस और वायरस के निष्कर्षों का पता लगाने के लिए, जिनके परिसर सामान्य समय में agglutinins के साथ नहीं देखा जा सकता है,

2) इन अत्यधिक फैले पदार्थों और छोटे सूक्ष्मजीवों के लिए सीरम रोगियों में एंटीबॉडी की पहचान करने के लिए।

अप्रत्यक्ष, या निष्क्रिय, agglutination के तहत प्रतिक्रिया को समझते हैं कि एंटीबॉडी एंटीजनों के साथ बातचीत करते हैं, निष्क्रिय कणों पर पूर्व-adsorbed (लेटेक्स, सेलूलोज़, पॉलीस्टरॉल, बेरियम ऑक्साइड, आदि या बीन के एरिथ्रोसाइट्स, मैं (0)

एक वाहक उपयोग के रूप में निष्क्रिय हेमग्लुटिनेशन प्रतिक्रिया (आरपीजीए) में एरिथ्रोसाइट्स। एंटीजन के साथ लोड एरिथ्रोसाइट्स इस एंटीजन को विशिष्ट एंटीबॉडी की उपस्थिति में चिपके हुए हैं और तलछट में आते हैं। एरिथ्रोसाइट संवेदनशील एंटीजन का उपयोग आरपीजीए में एंटीबॉडी (सेरोडायग्नोसिस) का पता लगाने के लिए एरिथ्रोसाइटियन डायग्नोस्टिक्स के रूप में किया जाता है। यदि आप एंटीथ्रोसाइट्स को एंटीबॉडी (एरिथ्रोसाइटियन एंटीस डायग्नोस्टिकम) के साथ लोड करते हैं, तो इसका उपयोग एंटीजन का पता लगाने के लिए किया जा सकता है।

अंजीर। 3. आरपीजीए योजना: एरिथ्रोसाइट्स (1), एंटीजन (3) से भरा हुआ, विशिष्ट एंटीबॉडी (4) के लिए बाध्यकारी हैं।

मचान। पॉलीस्टीरिन गोलियों के कुओं में, सीरम dilutions की एक श्रृंखला तैयार की जाती है। वर्तमान में, 0.5 मिलीलीटर जानबूझकर सकारात्मक सीरम और अंतिम 0.5 मिलीलीटर नमकीन (नियंत्रण) में है। फिर, पतला एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम के 0.1 मिलीलीटर को सभी कुओं में जोड़ा जाता है, 2 घंटे के लिए थर्मोस्टेट में शेक और रखा जाता है।

लेखांकन। सकारात्मक मामले में, लाल रक्त कोशिकाएं कुएं के निचले हिस्से में एक तक्के या परोसे हुए किनारे (एक उलटा छतरी) के साथ कोशिकाओं की एक चिकनी परत के रूप में कुएं के नीचे बसे, नकारात्मक में - एक बटन या अंगूठियों के रूप में बसे।

चित्र 4। अंगूठी खाता (आरपीजीए)।

Botulinumoxin का पता लगाने के लिए रिंग परिणामों के लिए लेखांकन।

बोटुलिज़्म का रोगजनक - क्लॉस्ट्रिडियम बोटुलिनम सात सर्वर (ए, बी, सी, डी, ई, एफ, जी) के विषाक्त पदार्थ पैदा करता है, लेकिन अक्सर वहां सेरोवास ए, बी, ई होते हैं। सभी विषाक्त पदार्थ एंटीजनिक \u200b\u200bगुणों में भिन्न होते हैं और उन्हें विभेदित किया जा सकता है टाइप-विशिष्ट सेरा प्रतिक्रियाओं में। इस उद्देश्य के लिए, आप रोगी के सीरम के साथ निष्क्रिय (अप्रत्यक्ष) हेमग्लूशन की प्रतिक्रिया डाल सकते हैं, जिसमें विषाणु की उपस्थिति माना जाता है, और एरिथ्रोसाइट्स एंटी-एस्टेट एंटी-कैंसर के प्रकार के प्रकार ए, बी, ई के साथ लोड किया जाता है । नियंत्रण सामान्य सीरम द्वारा परोसा जाता है।

अंजीर। 3. अंगूठी का प्रदर्शन और परिणाम।

लेखांकन। सकारात्मक मामले में, लाल रक्त कोशिकाएं कुएं के निचले हिस्से में एक तक्के या परोसे हुए किनारे (एक उलटा छतरी) के साथ कोशिकाओं की एक चिकनी परत के रूप में कुएं के नीचे बसे, नकारात्मक में - एक बटन या अंगूठियों के रूप में बसे।

निष्कर्ष: बोटोलुलस-विषाक्त प्रकार रोगी के सीरम में पाया गया था।

हेमग्लथिनेशन (आरटीएचए) की ब्रेकिंग प्रतिक्रिया।

अंजीर। 8. हेमग्लथिनेशन (आरटीजीए) (योजना) की ब्रेकिंग प्रतिक्रिया।

प्रतिक्रिया का सिद्धांत विभिन्न वायरस को बांधने और उन्हें बेअसर करने की क्षमता पर आधारित होता है, लाल रक्त कोशिकाओं को उत्तेजित करने की क्षमता को वंचित करता है। दृष्टि से यह प्रभाव और हेमग्लथिनेशन के "ब्रेकिंग" में खुद को प्रकट करता है। आरटीएचए का उपयोग वायरल संक्रमणों के निदान में विशिष्ट एंटीघेमगग्लुटिनिन का पता लगाने और अपने हेमग्लुटिनिन में विभिन्न वायरस की पहचान करने के लिए किया जाता है, जो एजी के गुणों को प्रकट करता है।

वायरस का टाइपिंग टाइपोस्पैसिफिक सेरा के एक सेट के साथ आरटीजीए प्रतिक्रिया में किया जाता है। प्रतिक्रिया के परिणाम गमगुन की अनुपस्थिति में ध्यान में रखते हैं। एच 0 एन 1, एच 1 एन 1, एच 2 एन 2, एच 3 एन 2 एंटीजनों और अन्य के साथ एक वायरस प्रकार के सबटाइप को होमोलॉगस टाइप-विशिष्ट सेरा के सेट के साथ आरटीजीए में अलग किया जा सकता है

अंजीर। 9. इन्फ्लूएंजा वायरस टाइप करते समय आरटीजीए परिणाम

किंवदंती: - हेमग्लथिनेशन ब्रेकिंग (बटन); - हेमग्लथिनेशन (छतरी)।

निष्कर्ष: अध्ययन के तहत सामग्री में इन्फ्लूएंजा वायरस प्रकार ए एच 3 एन 2 एंटीजन के साथ होता है

विषय की सामग्री की तालिका "immunomodulators। संक्रामक रोगों के immunodiagnostics।":

विस्तारित प्रतिक्रिया agglutination (आर)। रोगी के सीरम में निर्धारित करने के लिए तैनात agglutination प्रतिक्रिया (आरए)। ऐसा करने के लिए, सीरम dilutions की एक श्रृंखला के लिए, विकृत सूक्ष्मजीवों या कणों के निहित उच्च रक्तचाप के साथ निलंबन में निदान जोड़ा जाता है। अधिकतम प्रजनन भागों का जुड़ना एजी, जिसे रक्त सीरम टिटर कहा जाता है।

प्रतिक्रिया agglutination की किस्में (आर) तुलारेविया पर रक्त-ड्रिप नमूना (रक्त की बूंद और दृश्य सफेद agglutinates की उपस्थिति के साथ) और ब्रुसेलोसिस पर हैडलसन प्रतिक्रिया के निदान के साथ (सज्जन बैंगनी के साथ चित्रित सीरम डायग्नोस्टिकम की एक बूंद के साथ)।

अनुमानित agglutination प्रतिक्रिया (आरए)

चयनित सूक्ष्मजीवों की पहचान करने के लिए, अनुमानित आरए को मूल खिड़कियों पर रखा गया। ऐसा करने के लिए, रोगजनक की संस्कृति मानक डायग्नोस्टिक एंटीसेम (कमजोर पड़ने में 1:10, 1:20) की बूंद में जोड़ा जाता है। सकारात्मक परिणाम के साथ, वे एंटीसेम की बढ़ती प्रजनन के साथ एक निष्कासित प्रतिक्रिया डालते हैं।

प्रतिक्रिया वे सकारात्मक मानते हैं कि क्या डायग्नोस्टिक सीरम के टिटर के करीब dilutions में agglutination मनाया जाता है।

ओएएस. सोमैटिक ओ-एजी थर्मोस्टेबल और 2 घंटे के लिए उबलते हैं। जब पर बातचीत करते हैं, तो बढ़िया इकाइयां बनती हैं।

एन-एजी. एन-एजी (फ्लैगरी) Termolabile और जल्दी से 100 डिग्री सेल्सियस, साथ ही इथेनॉल की कार्रवाई के तहत नष्ट कर दिया। 2 घंटे के बाद एच-एंटी-सिकर के साथ प्रतिक्रियाओं में, ऊष्मायन ढीले बड़े फ्लेक्स होते हैं (बैक्टीरिया बंधन स्वाद वाले फ्लेकिंग द्वारा गठित)।

के जरिए। थर्मोस्टेबल के सापेक्ष पेट बैक्टीरिया (2 घंटे के लिए 60-62 डिग्री सेल्सियस के तापमान को रोकता है); जब vi-antiserum के साथ ऊष्मायन, ठीक अनाज agglutinat का गठन किया जाता है।

प्रतिक्रियाएं प्रत्यक्ष हेमग्लुटिनेशन

की तरह सबसे सरल प्रतिक्रियाओं - भागों का जुड़ना एरिथ्रोसाइट्स, या हेमग्लूटिनेशन का उपयोग एबी 0 सिस्टम में रक्त समूहों को निर्धारित करने के लिए किया जाता है। निर्धारण के लिए भागों का जुड़ना (या इसकी कमी) एंटी-ए और एंटी-इन-एग्ग्लुटिनिन के साथ मानक एंटीसेम्स का उपयोग करें। प्रतिक्रिया को सीधे कहा जाता है, क्योंकि एजी का अध्ययन एरिथ्रोसाइट्स का प्राकृतिक घटक है।

सामान्य एस। प्रत्यक्ष हेमग्लुटिनेशन तंत्र में वायरल हेमग्लुलेशन होता है। कई वायरस पक्षियों और स्तनधारियों की लाल रक्त कोशिकाओं को स्वचालित रूप से पीड़ित करने में सक्षम हैं, एरिथ्रोसाइट निलंबन के लिए उनके अतिरिक्त उनके योग के गठन का कारण बनता है।

दीर्घवृत्तीय प्रतिक्रिया

Agglutination (लेट। Agglutinatio। - ग्लूइंग) - इलेक्ट्रोलाइट्स की उपस्थिति में विशिष्ट एंटीबॉडी के साथ एंटीजन-सिस्टमिक कणों (ठोस कोशिकाओं, लेटेक्स कणों, आदि) के बंधन (यौगिक), जो नग्न आंखों (एग्लूटिनैट) के लिए दृश्यमान या तलछट के गठन के साथ समाप्त होता है। तलछट का चरित्र एंटीजन की प्रकृति पर निर्भर करता है: फ्लैगेला बैक्टीरिया एक बड़े-उपयुक्त प्रक्षेपण, flaky और सतर्कता - बढ़िया अनाज, कैप्सूल - भारी देता है। वहां agglutination प्रत्यक्ष है, जिसमें, विशिष्ट एंटीबॉडी के साथ प्रतिक्रिया करने में, बैक्टीरिया या किसी अन्य सेल के eigencilaments, उदाहरण के लिए, Aerghrocytes, सीधे शामिल हैं; और अप्रत्यक्ष, या निष्क्रिय, जिसमें बैक्टीरिया कोशिकाएं या एरिथ्रोसाइट्स, या लेटेक्स कण गैर-स्वयं-स्वर्गीय एंटीजन होते हैं (या एंटीबॉडी उन्हें एंटीबॉडी (या एंटीजन) की पहचान करने के लिए अलग हो जाते हैं। एग्लूटिनेशन की प्रतिक्रिया में, मुख्य रूप से आईजीजी और आईजीएम कक्षाओं से संबंधित एंटीबॉडी शामिल हैं। यह दो चरणों में आता है: सबसे पहले एंटीजन के निर्धारक के साथ एंटीबॉडी के सक्रिय केंद्र की एक विशिष्ट बातचीत होती है, यह चरण इलेक्ट्रोलाइट्स की अनुपस्थिति में हो सकता है और प्रतिक्रिया प्रणाली में दृश्य परिवर्तनों के साथ नहीं है। दूसरे चरण के लिए - Agglutinat का गठन - इलेक्ट्रोलाइट्स की उपस्थिति आवश्यक है, जो एंटीजन + एंटीबॉडी परिसरों के विद्युत प्रभार को कम करता है और ग्लूइंग की प्रक्रिया में तेजी लाता है। यह चरण agglutinate के गठन के साथ समाप्त होता है।

Agglutination प्रतिक्रियाओं या तो ग्लास, या चिकनी कार्डबोर्ड प्लेटों, या बाँझ agglutination ट्यूबों में हैं। ग्लास पर एग्लूटिनेशन प्रतिक्रियाएं (प्रत्यक्ष और निष्क्रिय) आमतौर पर एक रोगी सीरम (उदाहरण के लिए, ब्रूकोलोसिस के दौरान) या कारक एजेंट की सीरोलॉजिकल पहचान के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए एक त्वरित विधि के रूप में उपयोग की जाती हैं। बाद के मामले में, अच्छी तरह से शुद्ध (adsorbed) डायग्नोस्टिक सीरम केवल मोनोरसेप्टर एंटीबॉडी या विभिन्न एंटीजनों के लिए उनके सेट का उपयोग किया जाता है। ग्लास पर एग्लूटिनेशन की प्रतिक्रिया का निस्संदेह लाभ इसके उत्पादन की सादगी है और तथ्य यह है कि यह कई मिनट या सेकंड के लिए होता है, क्योंकि दोनों घटकों को केंद्रित रूप में उपयोग किया जाता है। हालांकि, यह केवल गुणात्मक महत्व और परीक्षण ट्यूब की तुलना में कम संवेदनशील है। ट्यूबों में agglutination की विस्तारित प्रतिक्रिया अधिक सटीक परिणाम देती है, क्योंकि यह आपको सीरम एंटीबॉडी की मात्रात्मक सामग्री निर्धारित करने की अनुमति देता है (अपने टिटर की स्थापना) और यदि आवश्यक हो, तो एंटीबॉडी टिटर को बढ़ाने के तथ्य को पंजीकृत करें, जिसमें डायग्नोस्टिक वैल्यू है। Egglutination ट्यूबों के लिए प्रतिक्रिया बनाने के लिए, एक अलग से विभाजित 0.85% NaCl सीरम द्वारा विभाजित और मानक डायग्नोस्टिकम (या सांस्कृतिक अध्ययन) निलंबन के बराबर मात्रा (आमतौर पर 0.5 मिलीलीटर) 1 मिलीलीटर के 1 मिलीलीटर के 1 मिलीलीटर में निलंबन किया जाता है। Agglutination प्रतिक्रिया के परिणामों के लिए लेखांकन 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर ट्यूबों के 2 घंटे के ऊष्मायन के बाद पूर्व-आयोजित किया जाता है और अंत में दो विशेषताओं के माध्यम से 20 - 24 घंटे के बाद: उपस्थिति और आकार की स्थिति और पारदर्शिता की डिग्री सुपरनाटन। अनुमान चार गुना प्रणाली पर किया जाता है। प्रतिक्रिया सीरम नियंत्रण और एंटीजन के साथ जरूरी है। ऐसे मामलों में जहां ट्यूब में तैनात एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया रोगजनक की सीरोलॉजिकल पहचान के लिए सेट की जाती है, यदि प्रतिक्रिया का निदान मूल्य होता है यदि प्रतिक्रिया को सकारात्मक डायग्नोस्टिक सीरम के रूप में कम से कम आधा टिटर के रूप में अनुमानित किया जाता है।

यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि जब homologous antigens और एंटीबॉडी के समाधान मिश्रण, हमेशा agglutination प्रतिक्रिया के प्रकट अभिव्यक्ति नहीं हैं। प्रक्षेपण केवल प्रतिक्रिया घटकों के कुछ इष्टतम अनुपात के साथ बनाया जाता है। इन सीमाओं के बाहर, एंटीजन या एंटीबॉडी की एक महत्वपूर्ण अतिरिक्त के साथ, प्रतिक्रिया नहीं देखी जाती है। इस घटना को "फेनोमेनॉन ट्रांसोस" नाम प्राप्त हुआ। यह agglutination की प्रतिक्रिया और वर्षा की प्रतिक्रिया के दौरान दोनों को देखा जाता है। प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं में संक्रमण की उपस्थिति इस तथ्य के कारण है कि उनमें भाग लेने वाली एंटीजन आमतौर पर पॉलीवर्मन होते हैं, और आईजीजी एंटीबॉडी अणुओं में दो सक्रिय केंद्र होते हैं। एंटीबॉडी के अतिरिक्त के साथ, एंटीजन के प्रत्येक कण की सतह एंटीबॉडी अणुओं द्वारा कवर की जाती है ताकि कोई मुक्त निर्धारक समूह न हो, इसलिए दूसरा, एंटीबॉडी का असंबंधित सक्रिय केंद्र एक और एंटीजनिक \u200b\u200bकण के साथ बातचीत नहीं कर सकता है और उन्हें एक दूसरे के साथ बांध सकता है। दृश्यमान agglutinate या precipitate का गठन एंटीजन के एक अतिरिक्त में भी दबा दिया जाता है जब एंटीबॉडी का एक भी मुक्त सक्रिय केंद्र नहीं रहता है, और इसलिए एंटीजन + एंटीबॉडी + एंटीजन के परिसरों को और अधिक समेकित नहीं किया जा सकता है।

1.1। Agglutination प्रतिक्रिया (आरए)

Agglutination प्रतिक्रिया (आरए)

इसकी विशिष्टता के कारण, फॉर्मूलेशन और प्रदर्शन की सादगी के कारण, कई संक्रामक बीमारियों के निदान के लिए माइक्रोबायोलॉजिकल अभ्यास में एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया व्यापक थी।

Agglutination प्रतिक्रिया पूर्णांक माइक्रोबियल या अन्य कोशिकाओं (agglutinogens) के साथ एंटीबॉडी (agglutinins) की बातचीत की विशिष्टता पर आधारित है। इस बातचीत के परिणामस्वरूप, कण बनते हैं - गुच्छे के रूप में एक precipitate (agglutinat) में गिरने वाले agglomerates।

Agglutination प्रतिक्रिया दोनों जीवित और मारे गए बैक्टीरिया, sprochetes, मशरूम, सरल, रिक्टेट्सिया, साथ ही लाल रक्त कोशिकाओं और अन्य कोशिकाओं दोनों शामिल हो सकते हैं। प्रतिक्रिया दो चरणों में बहती है: पहला (अदृश्य) एक विशिष्ट, एंटीजन और एंटीबॉडी का यौगिक है, दूसरा (दृश्यमान) गैर-विशिष्ट, ग्लूइंग एंटीजन, यानी है। Agglutinate का गठन।

एक निर्धारित एंटीजन समूह के साथ बीक्लेंट एंटीबॉडी के एक सक्रिय केंद्र को जोड़ते समय agglutinat का गठन किया जाता है। एग्लूटिनेशन की प्रतिक्रिया, साथ ही किसी भी सीरोलॉजिकल प्रतिक्रिया इलेक्ट्रोलाइट्स की उपस्थिति में आगे बढ़ती है।

बाहरी रूप से, agglutination की सकारात्मक प्रतिक्रिया के प्रकटीकरण में दो-तरफा चरित्र है। ब्रिजर रूप से सूक्ष्मजीवों में, केवल एक सोमैटिक ओ-एंटीजन, सीधे माइक्रोबियल कोशिकाओं द्वारा ग्लूइंग। इस तरह के agglutination को सुगंधित कहा जाता है। यह 18 - 22 घंटे के भीतर होता है। वी

Birchtikov माइक्रोब्स में दो एंटीजन हैं - एक सोमैटिक ओ-एंटीजन और स्वादित एन-एंटीजन। यदि कोशिकाएं स्वादों से चिपके हुए हैं, तो बड़े ढीले गुच्छे का गठन किया जाता है और इस तरह की प्रतिक्रिया को मोटे-अनाज कहा जाता है। यह 2 - 4 घंटे के भीतर आता है।

रोगी के रक्त सीरम में विशिष्ट एंटीबॉडी के गुणात्मक और मात्रात्मक निर्धारण के लिए अर्हता प्राप्त करने के लिए agglutination की प्रतिक्रिया दोनों को सेट किया जा सकता है और समर्पित रोगजनक प्रजाति संबद्धता को निर्धारित करने के लिए। वी

एग्लूटिनेशन की प्रतिक्रिया दोनों तैनात संस्करण में रखी जा सकती है, जिससे सीरम के साथ डायग्नोस्टिक टिटर को पतला कर दिया जा सकता है, और एक संकेतक प्रतिक्रिया के अवतार में, जो विशिष्ट एंटीबॉडी का पता लगाने या रोगजनक की प्रजातियों को निर्धारित करने की अनुमति देता है।

सीरम में जांच की गई एंटीबॉडी की पहचान करने के लिए, एक तैनाती agglutination प्रतिक्रिया सेट करते समय, परीक्षण सीरम कमजोर पड़ता है 1:50 या 1: 100। यह इस तथ्य के कारण है कि पूरे या छोटे पतला सीरम में, सामान्य एंटीबॉडी बहुत अधिक एकाग्रता में हो सकते हैं, और फिर प्रतिक्रिया परिणाम गलत हो सकते हैं। अध्ययन के तहत सामग्री प्रतिक्रिया का संस्करण रोगी का खून है।

रक्त को खाली पेट या भोजन के 6 घंटे से पहले नहीं लिया जाता है (अन्यथा सीरम में वसा की बूंदें हो सकती हैं, जिससे यह गंदा और अनुसंधान के लिए अनुपयुक्त हो जाती है)। रोगी का सीरम आमतौर पर रोग के दूसरे सप्ताह में प्राप्त होता है, जो कोहनी नस से 3 - 4 मिलीलीटर रक्त से बाँझ प्राप्त करता है (इस समय तक विशिष्ट एंटीबॉडी की अधिकतम संख्या केंद्रित होती है)। एक ज्ञात एंटीजन के रूप में, द हत्या से तैयार डायग्नोस्टिकम, लेकिन किसी विशेष एंटीजनिक \u200b\u200bसंरचना के साथ किसी विशेष प्रकार की माइक्रोबियल कोशिकाओं को नष्ट नहीं किया जाता है।

प्रजातियों को निर्धारित करने के लिए एक तैनात agglutination प्रतिक्रिया सेट करते समय, रोगजनक का नमूना सहायक, एंटीजन अध्ययन के तहत सामग्री से समर्पित एक लाइव रोगजनक है। ज्ञात एंटीबॉडी प्रतिरक्षा नैदानिक \u200b\u200bसीरम में निहित हैं। वी

प्रतिरक्षा डायग्नोस्टिक सीरम एक टीकाकरण खरगोश के खून से प्राप्त किया जाता है। टिटर (अधिकतम कमजोरता जिसमें एंटीबॉडी का पता लगाया जाता है), निदान सीरम को संरक्षक के अतिरिक्त के साथ एम्पोस द्वारा फैलाया जाता है। इस सीरम का उपयोग समर्पित रोगजनक की एंटीजनिक \u200b\u200bसंरचना की पहचान के लिए किया जाता है।

Agglutination की प्रतिक्रिया के रूप

इन प्रतिक्रियाओं में, कणों के रूप में एंटीजन (माइक्रोबियल कोशिकाएं, एरिथ्रोसाइट्स और अन्य कॉर्पस्क्यूलर एंटीजन) शामिल हैं, जो एंटीबॉडी के साथ चिपके हुए हैं और तलछट में गिर जाते हैं।

Agglutination प्रतिक्रिया (आरए) के निर्माण के लिए, तीन घटकों की आवश्यकता है: 1) एंटीजन (agglutinogen); 2) एंटीबॉडी (एग्लूटिनिन) और 3) इलेक्ट्रोलाइट (सोडियम क्लोराइड का आइसोटोनिक समाधान)।

एग्लटन (आरए) की अनुमानित (लैमेलर) प्रतिक्रिया

लगभग, या लैमेलर, आरए कमरे के तापमान पर ग्लास ग्लास पर रखा जाता है। इसके लिए, गिलास पर पाश्चर विंदुक को सीरम ड्रॉप से \u200b\u200bकमजोर पड़ने में 1:10 - 1:20 और आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान की नियंत्रण ड्रॉप से \u200b\u200bअलग से लागू किया जाता है। एक और एक और बैक्टीरियोलॉजिकल लूप, कॉलोनियों या बैक्टीरिया की दैनिक संस्कृति (डायग्नोस्टिकम की एक बूंद) बनाई जाती है और उन्हें अच्छी तरह मिलाया जाता है। प्रतिक्रियाएं कुछ मिनटों में दृष्टि से होती हैं, कभी-कभी एक आवर्धक ग्लास (x5) के साथ। एक सकारात्मक आरए के साथ, सीरम के साथ एक बूंद बड़े और छोटे फ्लेक्स की उपस्थिति को चिह्नित करती है, नकारात्मक - सीरम समान रूप से गंदे बनी हुई है।

अप्रत्यक्ष (निष्क्रिय) हेमग्लुटिनेशन (आरएलएम, आरपीजीए) की प्रतिक्रिया

प्रतिक्रिया सेट की गई है: 1) पॉलीसाकाइराइड्स, प्रोटीन, बैक्टीरिया के निष्कर्षों और अन्य अत्यधिक फैलाने वाले पदार्थों, रिकेट्सिस और वायरस के निष्कर्षों का पता लगाने के लिए, जिनके परिसर सामान्य राह में एग्लूटिनिन के साथ शामिल नहीं किए जा सकते हैं, या 2) रोगियों के सिरों में एंटीबॉडी की पहचान करने के लिए अत्यधिक फैला हुआ पदार्थ और सबसे छोटा सूक्ष्मजीव।

अप्रत्यक्ष, या निष्क्रिय, agglutination के तहत उस प्रतिक्रिया को समझते हैं जिसमें एंटीबॉडी एंटीजनों के साथ बातचीत करते हैं (लेटेक्स, सेलूलोज़, पॉलीयरोल, बेरियम ऑक्साइड इत्यादि या बीन के एरिथ्रोसाइट्स, मैं (0)-समूह के साथ पूर्व-adsorbed मानव रक्त)।

निष्क्रिय हेमग्लिटिनेशन (आरपीजीए) की प्रतिक्रिया में, एरिथ्रोसाइट्स को एक वाहक के रूप में उपयोग किया जाता है। एंटीजन के साथ लोड एरिथ्रोसाइट्स इस एंटीजन को विशिष्ट एंटीबॉडी की उपस्थिति में चिपके हुए हैं और तलछट में आते हैं। एरिथ्रोसाइट संवेदनशील एंटीजन का उपयोग आरपीजीए में एंटीबॉडी (सेरोडायग्नोसिस) का पता लगाने के लिए एरिथ्रोसाइटियन डायग्नोस्टिक्स के रूप में किया जाता है। यदि आप एंटीथ्रोसाइट्स को एंटीबॉडी (एरिथ्रोसाइटियन एंटीस डायग्नोस्टिकम) के साथ लोड करते हैं, तो इसका उपयोग एंटीजन का पता लगाने के लिए किया जा सकता है।

स्टेजिंग। पॉलीस्टीरिन गोलियों के कुओं में, सीरम dilutions की एक श्रृंखला तैयार की जाती है। वर्तमान में, 0.5 मिलीलीटर जानबूझकर सकारात्मक सीरम और अंतिम 0.5 मिलीलीटर नमकीन (नियंत्रण) में है। फिर, पतला एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम के 0.1 मिलीलीटर को सभी कुओं में जोड़ा जाता है, 2 घंटे के लिए थर्मोस्टेट में शेक और रखा जाता है। वी

लेखांकन। सकारात्मक मामले में, लाल रक्त कोशिकाएं कुएं के निचले हिस्से में एक तक्के या परोसे हुए किनारे (एक उलटा छतरी) के साथ कोशिकाओं की एक चिकनी परत के रूप में कुएं के नीचे बसे, नकारात्मक में - एक बटन या अंगूठियों के रूप में बसे।

1.2। निराकरण प्रतिक्रिया। Lysis,
सेक्सन-फागोसाइटिक प्रतिक्रिया, उच्च संवेदनशीलता प्रतिक्रिया

एंटीटॉक्सिन एक्सोटॉक्सिन (पीएच) की तटस्थ प्रतिक्रिया

प्रतिक्रिया Exotoxin के प्रभाव को बेअसर करने के लिए एंटीटॉक्सिक सीरम की क्षमता पर आधारित है। इसका उपयोग एंटीटॉक्सिक सेरा और एक्सोटॉक्सिन की परिभाषा को टाइट्रेट करने के लिए किया जाता है।

सीरम के शीर्षक में, संबंधित विषैलेन की एक निश्चित खुराक एंटीटॉक्सिक सेरा के विभिन्न dilutions में जोड़ा जाता है। एंटीजन के पूर्ण तटस्थता और गैर-बिताए एंटीबॉडी की अनुपस्थिति के साथ, प्रारंभिक फ़्लोक्यूलेशन होता है। फ्लोक्यूलेशन प्रतिक्रिया न केवल सीरम टाइट्रेशन (उदाहरण के लिए, डिप्थीरिया) के लिए लागू की जा सकती है, बल्कि टाइक्सिन और एंटेसीसिन टाइट्रेशन के लिए भी लागू होती है। एंटीटॉक्सिन विषाक्तता की तटस्थ प्रतिक्रिया के पास एंटीटॉक्सिक उपचार सेरा की गतिविधि को निर्धारित करने के लिए एक विधि के रूप में एक बड़ा व्यावहारिक मूल्य है। इस प्रतिक्रिया में एक एंटीजन सच exotoxin है।

एंटीटॉक्सिक सीरम की ताकत एई की पारंपरिक इकाइयों द्वारा निर्धारित की जाती है।

1 एई बोटुलिनेट सीरम इसकी 1000 डीएलएम बोटुलिन विषाक्त पदार्थों की संख्या है। एक्सोटॉक्सिन की प्रजातियों या नमूना सहायक को निर्धारित करने के लिए तटस्थ प्रतिक्रिया (टेटनस, बोटुलिज़्म, डिप्थीरिया इत्यादि के निदान में) को विट्रो (रामोना के माध्यम से) में किया जा सकता है, और जेल में माइक्रोबियल कोशिकाओं के विषाक्त पदार्थों को निर्धारित करने में किया जा सकता है (O.Tuteroni पर)।

लिसिस रिएक्शन (आरएल)

प्रतिरक्षा सीरम की सुरक्षात्मक गुणों में से एक शरीर में प्रवेश करने वाले सूक्ष्म जीवों या सेल तत्वों को भंग करने की क्षमता है।

कोशिकाओं के विघटन (एलिसिस) को निर्धारित करने वाले विशिष्ट एंटीबॉडी को लिसिन कहा जाता है। एंटीजन की प्रकृति के आधार पर, वे बैक्टिलेट, साइटोलिसिन, स्पिरोकेटोलिसिन, हेमोलिन इत्यादि हो सकते हैं।

लाइसिना केवल एक अतिरिक्त कारक की उपस्थिति में अपनी कार्रवाई दिखाती है - पूरक। अनुपलब्ध, गैर-संपत्तियों की प्रतिरक्षा के एक कारक के रूप में, रीढ़ की हड्डी के तरल पदार्थ और आंख के सामने के कक्ष के तरल पदार्थ को छोड़कर लगभग सभी जीवों के तरल पदार्थ में पाया जाता है। सुंदर उच्च और निरंतर पूरक सामग्री मानव सीरम में चिह्नित है और गिनी पिग के सीरम में इसका बहुत कुछ है। शेष स्तनधारियों में, सीरम में पूरक की सामग्री अलग है।

पूरक सीरम प्रोटीन की एक जटिल प्रणाली है। यह 30 मिनट के लिए 55 डिग्री पर झगड़ा और नष्ट हो गया है। कमरे के तापमान पर, पूरक दो घंटे के भीतर नष्ट हो जाता है। यह एसिड और पराबैंगनी किरणों की क्रिया के लिए दीर्घकालिक हिलाने के लिए बहुत संवेदनशील है। हालांकि, पूरक कम तापमान पर सूखे राज्य में लंबे समय तक (छह महीने तक) संरक्षित है। पूरक माइक्रोबियल कोशिकाओं और लाल रक्त कोशिकाओं के lysis को बढ़ावा देता है।

बैक्टेरियोलिस और हेमोलिसिस की प्रतिक्रिया को आपदा करता है।

बैक्टोलिज़राइजेशन की प्रतिक्रिया का सार यह है कि जब विशिष्ट प्रतिरक्षा सीरम पूरक की उपस्थिति में उचित homologous aluminous माइक्रोबियल कोशिकाओं के साथ मिश्रित होता है, तो सूक्ष्म जीवों का लसीस होता है।

हेमोलिसिस प्रतिक्रिया यह है कि पूरक की उपस्थिति में एक विशिष्ट, प्रतिरक्षा सीरम (हेमोलिटिक) के साथ एरिथ्रोसाइट्स के संपर्क में, लाल रक्त कोशिकाओं का विघटन मनाया जाता है, यानी हेमोलिसिस।

प्रयोगशाला अभ्यास में हेमोलिसिस प्रतिक्रिया का उपयोग पूरक टायर को निर्धारित करने के लिए किया जाता है, साथ ही नैदानिक \u200b\u200bपूरक बाध्यकारी प्रतिक्रियाओं के परिणामों के लिए लेखांकन के लिए भी किया जाता है। पूरक टिटर सबसे छोटी राशि है जो 2.5 मिलीलीटर की मात्रा में हेमोलिटिक सिस्टम में 30 मिनट के भीतर लाल रक्त कोशिका lysis का कारण बनती है। फ्लोराइड प्रतिक्रिया, साथ ही सभी सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाएं इलेक्ट्रोलाइट की उपस्थिति में होती हैं।

अतिसंवेदनशीलता प्रतिक्रियाएं (एलर्जी)

शरीर के साथ फिर से संपर्क में एंटीजन के कुछ रूपों को प्रतिक्रिया के आधार के रूप में विशिष्ट प्रतिक्रिया हो सकती है, लेकिन एक गंभीर सूजन प्रतिक्रिया के गैर-विशिष्ट सेलुलर सेल और आणविक कारकों को शामिल किया जा सकता है। बढ़ी प्रतिक्रियाशीलता के दो रूपों को जाना जाता है: तत्काल प्रकार (जीटीटी) की अतिसंवेदनशीलता और धीमी प्रकार के प्रकार (जीजेडटी) की अतिसंवेदनशीलता। पहली प्रकार की प्रतिक्रिया एंटीबॉडी की भागीदारी के साथ प्रकट होती है, जबकि प्रतिक्रिया एलर्जी के साथ फिर से संपर्क करने के 2 घंटे बाद नहीं विकसित होती है। दूसरे प्रकार की प्रतिक्रिया के मुख्य प्रभावक के रूप में सूजन, (टीजीजेडआईटी) की टी-कोशिकाओं का उपयोग करके लागू किया जाता है, जिसमें मैक्रोफेज की सूजन के क्षेत्र में संचय प्रदान किया जाता है, प्रतिक्रिया 6-8 घंटे और बाद में प्रकट होती है।

अतिसंवेदनशीलता की प्रतिक्रिया का विकास एक एंटीजन और संवेदीकरण की घटना के साथ एक बैठक से पहले है, यानी एंटीबॉडी की उपस्थिति, सक्रिय रूप से अनुशंसित लिम्फोसाइट्स और अन्य ल्यूकोसाइट्स (मैक्रोफेज, ग्रैन्युलोसाइट्स) के साइटोफिलिक एंटीबॉडी द्वारा निष्क्रिय रूप से संवेदनशील।

अतिसंवेदनशीलता प्रतिक्रियाओं के विकास के तीन चरण हैं: इम्यूनोलॉजिकल; पेटोचिमिक; पैथोफिजियोलॉजिकल।

पहले, विशिष्ट, चरण में, एलर्जी एंटीबॉडी और (या) संवेदनशील कोशिकाओं के साथ बातचीत करता है। दूसरे चरण में, सक्रिय कोशिकाओं से जैविक रूप से सक्रिय पदार्थ होते हैं। मुक्त मध्यस्थ (हिस्टामाइन, सेरोटोनिन, ल्यूकोट्रियान्स, ब्रैडकिन, आदि) विभिन्न परिधीय प्रभावों का कारण बनता है जो इसी प्रकार की प्रतिक्रिया की विशेषता है - तीसरा चरण।

चार प्रकार की उच्च संवेदनशीलता प्रतिक्रियाएं

इस प्रकार की प्रतिक्रियाएं संवेदनशील टी-हेल्पर्स, साइटोटोक्सिक टी-लिम्फोसाइट्स (टी-हत्यारों) और मोनोन्यूक्लियर फागोसाइट सिस्टम की सक्रिय कोशिकाओं के रोगजनक इंटरसेल्यूलर इंटरैक्शन के कारण होती हैं, जो बैक्टीरियल एंटीजन द्वारा प्रतिरक्षा की अवधि के दीर्घकालिक उत्तेजना के कारण होती हैं , जिसमें शरीर की प्रतिरक्षा प्रणाली की सापेक्ष विफलता जीवाणु रोगजनकों की संक्रामक बीमारियों के इंटीरियर से समाप्त हो जाती है। बढ़ी हुई संवेदनशीलता प्रतिक्रिया का डेटा तपेदिक फेफड़ों, उनके कभी-कभी नेक्रोसिस और तपेदिक के रोगियों में सामान्य नशा के कारण होता है। तपेदिक के साथ त्वचा granulommy और morphopathogenetic शब्दों में पंपिंग काफी हद तक चौथी संवेदनशीलता प्रतिक्रियाओं द्वारा संकलित किया जाता है।

चौथी संवेदनशीलता प्रतिक्रिया का सबसे प्रसिद्ध उदाहरण एक मंता प्रतिक्रिया है जो ट्यूबरकुलिना रोगी के इंट्राडर्मल प्रशासन की साइट पर विकसित होती है, शरीर और प्रणाली जिसमें माइकोबैक्टेरिया के एंटीजन के लिए संवेदनशील होती है। प्रतिक्रिया के परिणामस्वरूप, केंद्र में नेक्रोसिस के साथ एक घने अतिशयोमिक पापुला का गठन किया जाता है, जो केवल कुछ घंटों (धीमी) के बाद तपेदलकुलिन के इंट्राडर्मल प्रशासन के बाद दिखाई देता है। पापुला का गठन रक्त परिसंचरण के मोनोन्यूक्लियर फागोसाइट्स के अंतःक्रियात्मक स्थानों में संवहनी बिस्तर के बाहर निकलने के साथ शुरू होता है। साथ ही, polymorphonuclears के संवहनी बिस्तर से प्रवासन शुरू होता है। फिर घुसपैठ न्यूट्रोफिल गिरता है, और घुसपैठ में लिम्फोसाइट्स और मोनोन्यूक्लियर फागोसाइट्स शामिल होते हैं। यह मंता प्रतिक्रिया आर्ट्यस प्रतिक्रिया से अलग होती है, जिसमें प्लेसमेंट साइट पर मुख्य रूप से पॉलीफोन्यूक्लियर ल्यूकोसाइट्स जमा होता है।

चौथे प्रकार की बढ़ी संवेदनशीलता की प्रतिक्रियाओं के साथ, संवेदनशील लिम्फोसाइट्स की एंटीजन की लंबी अवधि की उत्तेजना ऊतकों में रोगजनक परिवर्तनों के स्थानों में होती है जो साइटोकिन्स के टी-हेल्पर्स की रोगजनक रूप से तीव्र और दीर्घकालिक रिलीज के लिए होती है। फैब्रिक डैमेज लोकस में साइटोकिन्स की गहन रिलीज में मोनोन्यूक्लियर फागोकसाइट कोशिकाओं की कोशिकाओं की अति सक्रियता का कारण बनता है, जिनमें से कई अतिसंवेदनशील राज्य में गठित होते हैं, और कुछ विशाल कोशिकाओं के गठन के साथ एक दूसरे के साथ विलय करते हैं। मैक्रोफागी, जिस सतह पर जीवाणु और वायरल एंटीजन प्रदर्शित किए जाते हैं, टी-हत्यारों (प्राकृतिक हत्यारों) के कामकाज के माध्यम से नष्ट किए जा सकते हैं।

चौथी संवेदनशीलता प्रतिक्रिया आईटी टी-हेल्पर्स के संबंध में संवेदी एक विदेशी जीवाणु एंटीजन को पहचानकर प्रेरित होती है। आवश्यक मान्यता स्थिति एंड्रेटर्स की बातचीत है जो एंटीजन-प्रेजेंटिंग कोशिकाओं की सतह पर उजागर होती है जो एंडोसाइटोसिस और एलियन इम्यूनोजेन के मोनोन्यूक्लियर फागोसाइट्स द्वारा प्रसंस्करण के बाद प्रसंस्करण और प्रसंस्करण के बाद उजागर होती है। एक और आवश्यक शर्त ऊतक संगतता के मुख्य परिसर से कक्षा I अणुओं के साथ एक परिसर में एंटीजनों का संपर्क है। एंटीजन मान्यता के बाद, संवेदनशील सहायताकर्ता साइटोकिन्स जारी करते हैं और विशेष रूप से, इंटरलुकिन -2, प्राकृतिक हत्यारों और मोनोन्यूक्लियर फागोसाइट्स को सक्रिय करते हैं। सक्रिय मोनोन्यूक्लियर फागोसाइट्स प्रोटीलाइटिक एंजाइम और मुफ्त ऑक्सीजन रेडिकल जारी करते हैं, जो कपड़े को नुकसान पहुंचाते हैं।

त्वचा-एलर्जी परीक्षण - एलर्जी के लिए शरीर की संवेदनशीलता की स्थापना के लिए परीक्षण, इसके संक्रमण को निर्धारित करना, उदाहरण के लिए, तपेदिक, ब्रूकोलोसिस, सामूहिक प्रतिरक्षा का स्तर, उदाहरण के लिए, तुल्यक्तिया के लिए। एलर्जी के प्रशासन के स्थान पर, वे अंतर करते हैं: 1) पत्राचार; 2) स्कारिफिकेशन; 3) इंट्राडर्मल; 4) subcutaneous। त्वचा के तहत एलर्जी के लिए नैदानिक \u200b\u200bप्रतिक्रिया-एलर्जी नमूना स्थानीय, सामान्य और फोकल, साथ ही तत्काल और धीमी रूप से विभाजित है।

मध्यस्थ प्रकार के जीटीटी की स्थानीय प्रतिक्रियाएं 5-20 मिनट के बाद होती हैं, जो एरिथेमा और ब्लिस्टर के रूप में व्यक्त की जाती हैं, कुछ घंटों के बाद गायब हो जाती हैं, इसका मूल्यांकन एमएम में मापा एरिथेमा की सकारात्मक विधि द्वारा किया जाता है। स्थानीय आरजेडटी प्रतिक्रियाएं 24-48 घंटों के बाद होती हैं, लंबे समय तक, घुसपैठ के रूप में खुद को प्रकट करती हैं, कभी-कभी केंद्र में नेक्रोसिस के साथ, एमएम में घुसपैठ की परिमाण की परिमाण, सकारात्मक प्रणाली पर भी अनुमानित होती है। जीएनटी, हाइपरमिया और घुसपैठ के साइटोटोक्सिक और immunocomplete प्रकारों में 3-4 घंटे के बाद चिह्नित किया जाता है, अधिकतम 6-8 घंटे तक पहुंचते हैं और लगभग एक दिन के लिए कम हो जाते हैं। कभी-कभी संयुक्त प्रतिक्रियाएं देखी जाती हैं।

1.3। पूरक बाध्यकारी प्रतिक्रिया (आरएसके)

इस प्रतिक्रिया का उपयोग प्रयोगशाला अध्ययन के लिए विभिन्न संक्रमणों में सीरम एंटीबॉडी का पता लगाने के साथ-साथ एंटीजनिक \u200b\u200bसंरचना के लिए कारक एजेंट की पहचान करने के लिए किया जाता है।

पूर्ण बाध्यकारी प्रतिक्रिया जटिल सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाओं को संदर्भित करती है और उच्च संवेदनशीलता और विशिष्टता द्वारा विशेषता है।

इस प्रतिक्रिया की एक विशेषता यह है कि जब यह विशिष्ट एंटीबॉडी के साथ बातचीत करता है तो एंटीजन में परिवर्तन केवल पूरक की उपस्थिति में होता है। पूरक केवल एंटीबॉडी - एंटीजन कॉम्प्लेक्स पर adsorbed है। जटिल "एंटीबॉडी - एंटीजन" केवल तभी गठित किया जाता है जब सीरम में एंटीजन और एंटीबॉडी के बीच संबंध हो।

एंटीजन में सामान्य रूप से सोखना - एंटीजन कॉम्प्लेक्स अपनी सुविधाओं के आधार पर एंटीजन के भाग्य के विभिन्न तरीकों से भिन्न हो सकता है।

कुछ एंटीजन इन स्थितियों के तहत इन स्थितियों के अधीन किए जाते हैं, तीव्र रूपरेखा परिवर्तनों के साथ, विघटन (हेमोलिसिस, इस्एव की घटना - पफेफर, साइटोलाइटिक कार्रवाई) के साथ। अन्य आंदोलन की गति (ट्रेपोनिया के immobilization) को बदलते हैं। तेज विनाशकारी परिवर्तनों के बिना तीसरा मर जाता है (जीवाणुनाशक या साइटोटोक्सिक प्रभाव)। अंत में, पूरक के सोखने के साथ एंटीजन में परिवर्तन के साथ नहीं हो सकता है, आसानी से अवलोकन के लिए सुलभ हो सकता है।

तंत्र के अनुसार, आरएसके दो चरणों में बहती है:

1. पहला चरण इस पूरक परिसर पर एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स और सोखना का गठन है। चरण का नतीजा दृष्टिहीन रूप से दिखाई नहीं देता है (पूरक की अनिवार्य भागीदारी के साथ एंटीजन और एंटीबॉडी की बातचीत)।
2. दूसरा चरण पूरक की उपस्थिति में विशिष्ट एंटीबॉडी के प्रभाव में एंटीजन में बदलाव है। चरण का नतीजा दृष्टिहीन या दृश्यमान नहीं हो सकता है (संकेतक हेमोलिटिक सिस्टम (रॉबर एरिथ्रोसाइट्स और हेमोलिटिक सीरम) की मदद से प्रतिक्रिया परिणामों की पहचान)।

एरिथ्रोसाइट हेमोलिटिक सीरम का विनाश केवल हेमोलिटिक सिस्टम के पूरक के मामले में होता है। यदि पूरक एंटीजन एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स पर पहले adsorbed किया गया था, तो लाल रक्त कोशिकाओं का हेमोलिसिस नहीं होता है।

अनुभव का परिणाम सभी परीक्षण ट्यूबों में हेमोलिसिस की उपस्थिति या अनुपस्थिति को ध्यान में रखते हुए मूल्यांकन किया जाता है। प्रतिक्रिया को पूर्ण हेमोलिसिस देरी के साथ सकारात्मक माना जाता है जब ट्यूब में तरल पदार्थ रंगहीन होता है और एरिथ्रोसाइट्स नीचे, नकारात्मक होते हैं - लाल रक्त कोशिकाओं के पूर्ण lysys के साथ, जब तरल तीव्र रूप से चित्रित होता है ("लाह" रक्त)। हेमोलिसिस विलंब की डिग्री का अनुमान लगाया जाता है कि तरल की तीव्रता की तीव्रता और नीचे एरिथ्रोसाइट तलछट के आकार (+++, ++, ++, +) के आकार के आधार पर अनुमानित है।

इस मामले में जब एंटीजन में परिवर्तन दृश्य अवलोकन के लिए अनुपलब्ध रहते हैं, तो आपको दूसरी प्रणाली का उपयोग करना होगा जो संकेतक की भूमिका निभाता है जो आपको पूरक की स्थिति का आकलन करने और प्रतिक्रिया के परिणाम के बारे में निष्कर्ष निकालने की अनुमति देता है।

यह सूचक प्रणाली हेमोलिसिस प्रतिक्रिया घटकों द्वारा दर्शायी जाती है, जिसमें भेड़ का बच्चा एरिथ्रोसाइट्स और हेमोलिटिक सीरम होता है जिसमें विशिष्ट एंटीबॉडी (हेमोलिज़ीन) होते हैं, लेकिन पूरक नहीं होते हैं। मुख्य आरएसके सेटिंग के एक घंटे बाद यह सूचक प्रणाली परीक्षण ट्यूबों में जोड़ा जाता है। यदि बाध्यकारी प्रतिक्रिया सकारात्मक है, तो एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स का गठन होता है, जो पूरक को दर्शाता है। चूंकि पूरक केवल एक प्रतिक्रिया के लिए आवश्यक राशि में उपयोग किया जाता है, और एरिथ्रोसाइट्स का लीस केवल पूरक की उपस्थिति में हो सकता है, फिर जब यह "एंटीजन - एंटीबॉडी" कॉम्प्लेक्स पर सोखना होता है, तो हेमोलिटिक में एरिथ्रोसाइट्स का लीस (संकेतक) प्रणाली नहीं होगी। यदि पूरक की बाध्यकारी की प्रतिक्रिया नकारात्मक है, तो एंटीजन - एंटीजन कॉम्प्लेक्स का निर्माण नहीं किया गया है, पूरक मुक्त रहता है, और हेमोलिटिक सिस्टम जोड़ते समय लाल रक्त कोशिकाओं का लीस होता है।

1.4। डीएनए जांच। पॉलिमरेज़ चेन रिएक्शन (पीसीआर),
इम्यूनो-एंजाइम विधि (एलिसा), फ्लोरोसेंट एंटीबॉडी विधि (एमएफए)

जीन सेंसिंग के तरीके

आणविक जीवविज्ञान का गहन विकास और अनुवांशिक अध्ययन के एक आदर्श पद्धतिपूर्ण आधार का निर्माण जेनेटिक इंजीनियरिंग का आधार था। डायग्नोस्टिक्स के क्षेत्र में, दिशा उत्पन्न हुई और डीएनए और आरएनए, तथाकथित जीन जांच के विशिष्ट न्यूक्लियोटाइड अनुक्रमों को निर्धारित करने के लिए तेजी से विकसित हो जाती है। ऐसी तकनीकों का आधार हाइब्रिडाइजेशन के लिए न्यूक्लिक एसिड की क्षमता है - पूरक न्यूक्लियोटाइड्स (एए-टी, एम-सी) की बातचीत के कारण डबल-फंसे हुए संरचनाओं का गठन।

डीएनए (या आरएनए) के वांछित अनुक्रम को निर्धारित करने के लिए, अड्डों के एक निश्चित प्रतिस्थापन के साथ तथाकथित polynucleotide जांच विशेष रूप से बनाई गई है। यह परिसर के गठन की पहचान करने के लिए एक विशेष लेबल पेश करता है।

यद्यपि जीन सेंसिंग को इम्यूनोकेमिकल विश्लेषण के तरीकों के लिए जिम्मेदार नहीं ठहराया जा सकता है, इसका मुख्य सिद्धांत (पूरक संरचनाओं की बातचीत) को इम्यूनोडायग्नोसिस के संकेतक तरीकों के समान तरीकों से विधिवत रूप से कार्यान्वित किया जाता है। इसके अलावा, जीन सेंसिंग के तरीके अपने फेनोटाइपिक अभिव्यक्ति की अनुपस्थिति में संक्रामक एजेंट के बारे में जानकारी भरना संभव बनाता है (जीनोम में एम्बेडेड वायरस, "मूक" जीन)।

डीएनए के विश्लेषण के लिए, नमूना एकल-श्रृंखला संरचनाओं को प्राप्त करने के लिए denaturation के अधीन है जिसके साथ डीएनए या आरएनए-जांच अणु प्रतिक्रिया देते हैं। जांच तैयार करने के लिए, या तो प्राकृतिक स्रोत से अलग डीएनए (या आरएनए) के विभिन्न क्षेत्रों (उदाहरण के लिए, एक सूक्ष्मजीव) आमतौर पर वेक्टर प्लास्मिड्स के हिस्से के रूप में आनुवांशिक अनुक्रमों के रूप में प्रतिनिधित्व किया जाता है, या रासायनिक रूप से संश्लेषित oligonucleotides। कुछ मामलों में, जीनोमिक डीएनए का प्रशासन, टुकड़ों पर हाइड्रोलाइज्ड, कभी-कभी - आरएनए की तैयारी एक जांच के रूप में उपयोग की जाती है, कभी-कभी रिबोसोमल आरएनए। एक लेबल के रूप में, समान संकेतकों का उपयोग विभिन्न प्रकार के इम्यूनोकेमिकल विश्लेषण के लिए किया जाता है: रेडियोधर्मी आइसोटोप, फ्लोरोसेंस, बायोटोप (एविडिन-एंजाइम कॉम्प्लेक्स के एक और अभिव्यक्ति के साथ) इत्यादि।

विश्लेषण की प्रक्रिया उपलब्ध जांच के गुणों द्वारा निर्धारित की जाती है

वर्तमान में, सभी आवश्यक अवयवों वाले वाणिज्यिक किटों का तेजी से उपयोग किया जाता है।

ज्यादातर मामलों में, विश्लेषण प्रक्रिया को निम्नलिखित चरणों में विभाजित किया जा सकता है: नमूने की तैयारी (डीएनए की निष्कर्षण और denaturation सहित), वाहक (अक्सर एक बहुलक झिल्ली फिल्टर), preygridization, वास्तव में संकरण, गैर समृद्ध उत्पादों, पता लगाने की लॉन्डरिंग। एक मानक डीएनए या आरएनए-जांच दवा की अनुपस्थिति में, यह प्री-प्राप्त करने और लेबल पेश करने के लिए है।

नमूना तैयार करने के लिए, अध्ययन के तहत सामग्री का प्रारंभिक "वार्ड व्यक्तिगत बैक्टीरिया उपनिवेशों की पहचान करने या सेल संस्कृति में वायरस की एकाग्रता में वृद्धि के लिए आवश्यक हो सकता है। सीरम नमूने, मूत्र, रक्त या ठोस रक्त के समान तत्वों का प्रत्यक्ष विश्लेषण एक संक्रामक एजेंट की उपस्थिति के लिए किया जाता है। सेल संरचनाओं से न्यूक्लिक एसिड जारी करने के लिए, सेल लीसिस किया जाता है, और कुछ मामलों में डीएनए तैयारी फिनोल से साफ हो जाती है।

डीएनए denaturation, यानी, एक एकल श्रृंखला रूप में संक्रमण, तब होता है जब इसे क्षार द्वारा संसाधित किया जाता है। फिर न्यूक्लिक एसिड का नमूना एक वाहक - नाइट्रोसेल्यूलोस या नायलॉन झिल्ली पर तय किया जाता है, आमतौर पर ऊष्मायन द्वारा वैकुओ में 80 डिग्री सेल्सियस पर 10 मिनट से 4 घंटे तक ऊष्मायन द्वारा। इसके अलावा, preygridization की प्रक्रिया में, झिल्ली के साथ जांच के गैर-विशिष्ट बातचीत को कम करने के लिए मुक्त बाध्यकारी स्थानों की निष्क्रियता हासिल की जाती है। नमूना में डीएनए की एकाग्रता, जांच की एकाग्रता और उसके आकार की एकाग्रता के आधार पर हाइब्रिडाइजेशन प्रक्रिया 2 से 20 घंटे तक होती है।

असंबंधित उत्पादों के संकरण और लॉन्डरिंग के अंत के बाद, परिणामी परिसर का एक पता लगाया जाता है। यदि जांच में रेडियोधर्मी लेबल शामिल है, तो प्रतिक्रिया की प्रतिक्रिया के लिए, झिल्ली एक फिल्म (ऑटोडियोग्राफी) के संपर्क में है। अन्य लेबल के लिए उपयुक्त प्रक्रियाओं का उपयोग करें।

सबसे आशाजनक गैर विकिरण (तथाकथित ठंड) जांच का उत्पादन है। इसी आधार पर, एक संकरन तकनीक एक ही आधार पर विकसित होती है, जो खंडों, ऊतक बिंदुओं में रोगजनक की उपस्थिति स्थापित करना संभव बनाता है, जो कि पैथोलॉजिकल विश्लेषण (आईएनएसआईटीयू के संकरण) में विशेष रूप से महत्वपूर्ण है।

जीन सेंसिंग विधियों के विकास में आवश्यक चरण पॉलिमरस एम्पलीफिकेशन रिएक्शन (पीसीआर) का उपयोग था। यह दृष्टिकोण आपको विट्रो में कई प्रतियों के संश्लेषण द्वारा नमूना में एक निश्चित (पूर्व ज्ञात) डीएनए अनुक्रम की एकाग्रता बढ़ाने की अनुमति देता है। अध्ययन डीएनए नमूने, डीएनए पॉलीमरेज़ एंजाइम की दवा, संश्लेषण के लिए deoxynucleotides की एक अतिरिक्त, तथाकथित primers - दो प्रकार के oligonucleotides के दो प्रकार के oligonucleotides डीएनए के अंतिम भाग के अनुरूप है ब्याज का क्रम। प्राइमरों में से एक को पढ़ने के दौरान डीएनए कोडिंग सर्किट के रीडिंग सेक्शन की शुरुआत की एक प्रति होनी चाहिए, और दूसरा - अस्पष्ट श्रृंखला के विपरीत छोर की एक प्रति। फिर, पॉलिमरसेस प्रतिक्रिया के प्रत्येक चक्र के साथ, डीएनए प्रतियों की एक दोगुनी संख्या होती है।

प्राइमर्स के बाध्यकारी को पूरा करने के लिए, डीएनए denaturation (पिघलना) 94 डिग्री सेल्सियस पर आवश्यक है, इसके बाद मिश्रण में कमी 40-55 डिग्री सेल्सियस।

प्रतिक्रिया के लिए, प्रोग्राम करने योग्य माइक्रोफोडक्ट इनक्यूबेटर को प्रतिक्रिया के प्रत्येक चरण के लिए आसानी से वैकल्पिक तापमान परिवर्तन इष्टतम के लिए डिज़ाइन किया गया है।

प्रवर्धन प्रतिक्रिया जीन संवेदन के दौरान विश्लेषण की संवेदनशीलता में काफी वृद्धि कर सकती है, जो कि संक्रामक एजेंट की कम सांद्रता पर विशेष रूप से महत्वपूर्ण है।

प्रवर्धन के साथ जीन सेंसिंग के आवश्यक फायदों में से एक है जो पैथोलॉजिकल सामग्री की सबमोलॉस्कोपिक मात्रा का अध्ययन करने की क्षमता है।

एक विधि की एक और विशेषता, संक्रामक सामग्री का विश्लेषण करने के लिए अधिक महत्वपूर्ण है, छिपी हुई (चुप) जीन की पहचान करने की संभावना है। जीन सेंसिंग के उपयोग से संबंधित तरीके निश्चित रूप से संक्रामक बीमारियों का निदान करने के अभ्यास में अधिक व्यापक रूप से लागू की जाएंगी क्योंकि वे सरल और सस्ता हैं।

एलिसा और रीफ के तरीके अधिक उच्च गुणवत्ता वाले या अर्ध-मात्रात्मक हैं। घटकों की बहुत कम सांद्रता के साथ, एंटीजन के एक परिसर का गठन - एंटीबॉडी को दृष्टि से और न ही सरल उपकरण पंजीकृत नहीं किया जा सकता है। एक एंटीजन - ऐसे मामलों में एंटीबॉडी संकेत यह किया जा सकता है कि प्रारंभिक घटकों में से एक एंटीजन या एंटीबॉडी है - एक लेबल में प्रवेश करने के लिए जिसे विश्लेषणित पदार्थ की एकाग्रता के तुलनीय सांद्रता में आसानी से पता लगाया जा सकता है।

रेडियोधर्मी आइसोटोप (उदाहरण के लिए, 125i), फ्लोरोसेंट पदार्थ, एंजाइमों को एक लेबल के रूप में उपयोग किया जा सकता है।

उपयोग किए गए टैग के आधार पर, रेडियोम्यून (आरआईए), फ्लोरोसेंट इम्यून (एफआईए), इम्यूनो-एंजाइम (आईएफए) विश्लेषण के तरीकों आदि। हाल के वर्षों में, एलिसा का व्यापक रूप से व्यावहारिक उपयोग किया गया है, जो मात्रात्मक की संभावना से जुड़ा हुआ है परिभाषाएं, उच्च संवेदनशीलता, विशिष्टता और लेखा स्वचालन।

विश्लेषण के इम्यूनो-इम्यूनिमल विधियां विधियों का एक समूह हैं जो आपको एंटीजन कॉम्प्लेक्स की पहचान करने की अनुमति देती हैं - एक सब्सट्रेट के साथ एक एंटीबॉडी, जिसे रंग की उपस्थिति के साथ एंजाइम द्वारा विभाजित किया जाता है।

एंटीजन के प्रतिक्रिया घटकों के संबंध में विधि का सार निष्कर्ष निकाला गया है - एक औसत दर्जे के एंजाइम लेबल के साथ एक एंटीबॉडी। एंटीजन या एंटीबॉडी प्रतिक्रिया एंजाइम द्वारा की जाती है। एंजाइम की क्रिया के तहत सब्सट्रेट के परिवर्तन के तहत, प्रतिक्रिया घटक की बातचीत में एंटीजन-एंटीजन प्रतिक्रिया घटक की संख्या का न्याय करना संभव है। इस मामले में एंजाइम प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के मार्कर के रूप में कार्य करता है और आपको इसे दृष्टिहीन या वाद्य यंत्रों का निरीक्षण करने की अनुमति देता है।

एंजाइम बहुत सुविधाजनक लेबल हैं, क्योंकि उनके उत्प्रेरक गुण उन्हें एम्पलीफायरों के रूप में कार्य करने की अनुमति देते हैं, क्योंकि एक एंजाइम अणु प्रति मिनट उत्प्रेरक प्रतिक्रिया उत्पाद के 1-105 से अधिक अणुओं के गठन में योगदान दे सकता है। ऐसे एंजाइम को चुनना आवश्यक है जो लंबे समय तक अपनी उत्प्रेरक गतिविधि जारी रखता है, एक एंटीजन या एंटीबॉडी को बाध्य करने पर इसे खो नहीं देता है, और सब्सट्रेट के संबंध में उच्च विशिष्टता है।

एंजाइम द्वारा लेबल एंटीबॉडी या एंटीजन बनाने के मुख्य तरीके - संयुग्मन: रासायनिक, इम्यूनोलॉजिकल और जेनेटिक इंजीनियरिंग। एंजाइम अक्सर आईएफए के लिए उपयोग किया जाता है: क्रोनिक पेरोक्साइड, क्षारीय फॉस्फेटेज, गैलेक्टोसिडेस इत्यादि।

एंटीजन एंटीजन कॉम्प्लेक्स में एंटीजन एंटीजन कॉम्प्लेक्स में एंजाइम की गतिविधि की पहचान करने के लिए, क्रोमोजेनिक सब्सट्रेट का उपयोग किया जाता है, जिनके समाधान, शुरुआत में रंगहीन, एंजाइमेटिक प्रतिक्रिया प्रक्रिया में उपयोग किए जाते हैं, जिनकी तीव्रता आनुपातिक होती है एंजाइम की मात्रा। इस प्रकार, ठोस चरण आईएफए में एक सब्सट्रेट के रूप में फॉक्सिडेस की गतिविधि की पहचान करने के लिए, 5-अमीनोएलिसिलिक एसिड, जो तीव्र भूरे रंग के धुंधला, ऑर्थो-फेनिनेलनेडियम देता है, जिससे नारंगी-पीला धुंधला होता है। क्षारीय फॉस्फेटेज की गतिविधि की पहचान करने के लिए और? --गलज़िदेस क्रमशः नाइट्रोफेनिल फॉस्फेट और नाइट्रोफेनिलाएक्टोसाइड का उपयोग किया जाता है।

चित्रित उत्पाद के गठन में प्रतिक्रिया का नतीजा दृष्टि से या एक स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग एक निश्चित तरंग दैर्ध्य से प्रकाश के अवशोषण को मापने का उपयोग करता है।

आईएफए के लिए कई विकल्प हैं। सजातीय और विषम विकल्पों को अलग करें।

फॉर्मूलेशन की विधि के अनुसार, एलिसा के प्रतिस्पर्धी और गैर-प्रतिस्पर्धी तरीके भिन्न हैं। यदि, पहले चरण में, केवल विश्लेषण यौगिक और संबंधित बाध्यकारी केंद्र (एंटीजन और विशिष्ट एंटीबॉडी) सिस्टम में मौजूद हैं, विधि गैर-प्रतिस्पर्धी है। यदि कोई विश्लेषण कंपाउंड (एंटीजन) और एक एनालॉग (लेबल एंटीजन लेबल वाला एंटीजन) है, तो विशिष्ट बाध्यकारी केंद्रों (एंटीबॉडी) को बाध्यकारी के लिए खुद के बीच प्रतिस्पर्धा करना, विधि प्रतिस्पर्धी है। इस मामले में, अध्ययन के तहत एंटीजन में एक समाधान होता है, बाध्यकारी लेबल वाली बाध्यकारी की संख्या कम होती है।

फ्लोरोसेंट एंटीबॉडी (एमएफए) या इम्यूनोफ्लोरेसेंस प्रतिक्रियाओं (रीफ) की विधि

इम्यूनोफ्लोरेसेंट विधि अध्ययन के तहत सामग्री में अज्ञात सूक्ष्मजीव की तीव्र पहचान और पहचान के लिए पसंद का तरीका है।

एजी + एटी + इलेक्ट्रोलाइट \u003d यूवी में चमकती - किरण परिसर

फ्लोरोक्रोमा के साथ लेबल माइक्रोबेरी सीरम

अक्सर डाई isothiocyonate फ्लोरोसेंस - फिट्ज का उपयोग करें

अध्ययन में, यह विधि एक लुमेनसेंट माइक्रोस्कोप का उपयोग करती है।

चट्टान

धुंध पर फिट्ज लेबल वाले एंटीबॉडी के समाधान के 30 μl लागू होता है।

ग्लास को आर्द्र कक्ष में रखें और कमरे के तापमान पर 20-25 मिनट के लिए, या थर्मोस्टेट में 15 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर रखा जाता है।

प्रवाहित नल के पानी में ग्लास धो लें 2 मिनट, आसुत पानी के साथ rinsed और हवा में सूख गया।

घुड़सवार तरल की एक बूंद सूखे धुंध पर लागू होती है, धुंध को एक लुमेनसेंट माइक्रोस्कोप या एक पारंपरिक ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप के लिए एक लुमेनसेंट नोजल का उपयोग करके कोटिंग ग्लास और माइक्रोस्कोपी के साथ कवर किया जाता है।

13.1। एंटीजन एंटीबॉडी प्रतिक्रियाएं और उनके आवेदन

जब एंटीजन शरीर में प्रशासित होता है, तो एंटीबॉडी बनते हैं। एंटीबॉडी पूरक एंटीजन, जो उनके संश्लेषण का कारण बनता है, और इससे संपर्क करने में सक्षम हैं। एंटीबॉडी के साथ एंटीजनों की बाध्यकारी में दो चरण होते हैं। पहला चरण विशिष्ट है, जिसमें एंटीबॉडी के फैब खंड के सक्रिय केंद्र के साथ एंटीजनिक \u200b\u200bनिर्धारकों की तीव्र बाध्यकारी होती है। यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि बाध्यकारी वैन डेर वाल्स बलों, हाइड्रोजन और हाइड्रोफोबिक इंटरैक्शन के कारण है। संचार शक्ति एंटीबॉडी के सक्रिय केंद्र और एंटीजन एपिटॉप के स्थानिक अनुपालन की डिग्री से निर्धारित की जाती है। विशिष्ट चरण के बाद, एक धीमी-गैर-विशिष्ट, जो दृश्यमान भौतिक घटना से प्रकट होता है (उदाहरण के लिए, agglutination, आदि में गुच्छे का गठन) हो रहा है।

प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाएं एंटीबॉडी और एंटीजन के बीच बातचीत होती हैं, और ये प्रतिक्रियाएं विशिष्ट होती हैं और उच्च संवेदनशीलता होती है। वे चिकित्सा अभ्यास में व्यापक रूप से उपयोग किए जाते हैं। प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं का उपयोग करके, आप निम्न कार्यों को हल कर सकते हैं:

ज्ञात एंटीबॉडी का निर्धारण ज्ञात एंटीजन (एंटीजन डायग्नोस्टिकम) के अनुसार। ऐसा कार्य तब होता है जब रोगी एंटीबॉडी के सीरम में कार्टिव एजेंट (सेरोडायग्नोसिस) में निर्धारित करना आवश्यक होता है। एंटीबॉडी ढूँढना आपको निदान की पुष्टि करने की अनुमति देता है;

ज्ञात एंटीबॉडी (डायग्नोस्टिक सीरम) के अनुसार अज्ञात एंटीजन का निर्धारण। रोगी सामग्री (सेरोटाइपिंग) से पृथक रोगजनक की संस्कृति की पहचान करते समय यह अध्ययन किया जाता है, साथ ही साथ पता चला है

रक्त और अन्य जैविक तरल पदार्थों में सूक्ष्म जीवों और उनके विषाक्त पदार्थों की एंटीजन। प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं की कई किस्में हैं जो सेटिंग और पंजीकृत प्रभाव की तकनीक में भिन्न होती हैं। यह एग्लूटिनेशन (आरए), वर्षा (आरपी), पूरक (आरएसके), लेबल वाले घटकों (रीफ, आईएफए, आरआईए) का उपयोग करके प्रतिक्रियाओं को शामिल करने वाली प्रतिक्रियाओं की प्रतिक्रिया है।

13.2। दीर्घवृत्तीय प्रतिक्रिया

एग्लूटिनेशन रिएक्शन (आरए) इलेक्ट्रोलाइट्स की उपस्थिति में एंटीबॉडी के साथ एंटीजन के संपर्क की प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया है, और एंटीजन कॉर्पस्क्यूलर राज्य (एरिथ्रोसाइट्स, बैक्टीरिया, लेटेक्स कण adsorbed एंटीजनों के साथ) में है। Agglutination में, एंटीबॉडी के कॉर्पस्क्यूलर एंटीजन glueeding हैं, जो एक flaky precipitate के गठन से प्रकट होता है। फ्लेक्स का गठन इस तथ्य के कारण होता है कि एंटीबॉडी में दो सक्रिय केंद्र होते हैं, और एंटीजन पोलिवलेंट होते हैं, यानी कुछ एंटीजनिक \u200b\u200bनिर्धारक हैं। आरए का उपयोग रोगी सामग्री से पृथक रोगजनक की पहचान करने के लिए किया जाता है, साथ ही साथ सीरम में रोगी एंटीबॉडी का पता लगाने वाले एजेंट (उदाहरण के लिए, ब्रुसेलोसिस के दौरान राइट और हेडलसन की प्रतिक्रिया, पेट और परिधि पर विडल की प्रतिक्रिया) ।

आरए का उत्पादन करने का सबसे आसान तरीका एक ग्लास प्रतिक्रिया है, यह आरए का संकेत है, जिसका उपयोग रोगी से समर्पित रोगजनक को निर्धारित करने के लिए किया जाता है। स्लाइड ग्लास पर प्रतिक्रिया करते समय, डायग्नोस्टिक एग्लूटिनेटिंग सीरम लागू होता है (कमजोर पड़ने में 1:10 या 1:20), फिर रोगी से संस्कृति बनाई जाती है। प्रतिक्रिया सकारात्मक होती है यदि एक कैड जैसी तलछट एक बूंद में दिखाई देती है। अगला नियंत्रण है: सीरम के बजाय, सोडियम क्लोराइड समाधान की एक बूंद लागू होती है। यदि नैदानिक \u200b\u200bagglutinating सीरम गैर-किण्वित 1 है, तो यह पतला होता है (टिटर - dilution, किस agglutination होने के लिए), यानी बढ़ते हुए परीक्षण ट्यूबों में तैनाती आरए रखो

1 अपर्याप्त agglutinating सीरम संबंधित बैक्टीरिया को उत्तेजित कर सकता है जिसमें आम (क्रॉस-प्रतिक्रियाशील) एंटीजन होते हैं। इसलिए, उपयोग करेंadsorbed agglutinating serums, जिनमें से अपने संबंधित बैक्टीरिया द्वारा सोखना द्वारा क्रॉस-प्रतिक्रिया एंटीबॉडी हटा दिए जाते हैं। ऐसे सीरम में, एंटीबॉडी संरक्षित होते हैं, केवल इस जीवाणु के लिए विशिष्ट होते हैं।

प्रजनन aglutinating सीरम, जिसमें रोगी से पृथक रोगजनक के निलंबन की 2-3 बूंदें जोड़ दी जाती हैं। एग्लूटिनेशन को गति की मात्रा और परीक्षण ट्यूबों में तरल पदार्थ के ज्ञान की डिग्री के कारण लिया जाता है। प्रतिक्रिया को सकारात्मक माना जाता है यदि डायग्नोस्टिक सीरम के टिटर के नजदीक प्रजनन में agglutination मनाया जाता है। प्रतिक्रिया नियंत्रण के साथ है: आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान के साथ पतला सीरम पारदर्शी होना चाहिए, एक ही समाधान में सूक्ष्म जीवों का निलंबन - समान रूप से गंदा, बिना वर्षा के।

रोगी के सीरम में निर्धारित करने के लिए, कारक एजेंट के लिए एंटीबॉडी तैनाती आरए का उपयोग करते हैं। जब यह ट्यूबों में स्थापित होता है, तो रोगी का रक्त सीरम पैदा होता है और परीक्षण ट्यूबों (मारे गए सूक्ष्म जीवों के निलंबन) में डायग्नोस्टिकम के बराबर मात्रा में निलंबन जोड़ा जाता है। ऊष्मायन के बाद, सबसे बड़ा सीरम कमजोर पड़ने का निर्धारण किया जाता है, जिसमें agglutination हुआ, यानी। तलछट (सीरम टिटर) का गठन किया गया था। साथ ही, ओ-डायग्नोस्टिकम के साथ agglutination की प्रतिक्रिया (हीटिंग द्वारा मारे गए बैक्टीरिया, जो थर्मोस्टेबल ओ-एंटीजन को संरक्षित किया गया) ठीक दाग वाले agglutination के रूप में होता है। एच-डायग्नोस्टिकम (फॉर्मलिन द्वारा मारे गए बैक्टीरिया, जो थर्मोलबिल हार्नेस एच-एंटीजन को संरक्षित करने वाले बैक्टीरिया की प्रतिक्रिया बड़ी है और तेजी से बहती है।

अप्रत्यक्ष (निष्क्रिय) हेमग्लथिनेशन की प्रतिक्रिया(अंगूठी या आरपीजीए) एक प्रकार का आरए है। इस विधि में उच्च संवेदनशीलता है। अंगूठी का उपयोग करके, आप दो कार्यों को हल कर सकते हैं: रोगी के सीरम एंटीबॉडी को निर्धारित करने के लिए, जिसके लिए एंटीजनिक \u200b\u200bएरिथ्रोसाइटियन डायग्नोस्टिकम जोड़ा जाता है, जो एरिथ्रोसाइट्स है, जिस पर ज्ञात एंटीजन adsorbed हैं; अध्ययन के तहत सामग्री में एंटीजन की उपस्थिति निर्धारित करें। इस मामले में, प्रतिक्रिया को कभी-कभी उलटा अप्रत्यक्ष हेमग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया (रोंग) के रूप में जाना जाता है। स्टेजिंग करते समय, एरिथ्रोसाइटरी डायग्नोस्टिकम (एंटीबॉडी वाले लाल रक्त कोशिकाएं उनकी सतह पर adsorbed) जोड़ा जाता है। इस प्रतिक्रिया में एरिथ्रोसाइट्स वाहक की भूमिका निभाते हैं और प्रतिरक्षा समेकन के गठन में निष्क्रिय रूप से शामिल होते हैं। सकारात्मक प्रतिक्रिया के साथ, निष्क्रिय रूप से चिपके हुए लाल रक्त कोशिकाएं खदान के किनारों ("छतरी") के साथ एक चिकनी परत के साथ छेद के नीचे कवर करती हैं; एग्लूटिनेशन की अनुपस्थिति में, एरिथ्रोसाइट्स अच्छी तरह से केंद्रीय गहराई में जमा होते हैं, जो एक कॉम्पैक्ट "बटन" बनाते हैं जो तेजी से परिभाषित किनारों के साथ होते हैं।

कोगग्लुटिनेशन प्रतिक्रियाएंटीबॉडी का उपयोग करके कारक एजेंट (एंटीजन) की कोशिकाओं को निर्धारित करने के लिए उपयोग किया जाता है स्टाफीलोकोकस ऑरीअस,प्रोटीन ए प्रोटीन युक्त एफ्यूनोग्लोबुलिन के एफसी खंड के लिए एफ़िनिटी है। इसके कारण, एंटीबॉडी अप्रत्यक्ष रूप से एफसी खंड के माध्यम से स्टैफिलोकोकस से जुड़े हुए हैं, और फैब टुकड़े उन्मुख हैं और रोगियों से अलग किए गए संबंधित सूक्ष्मजीवों के साथ बातचीत करने में सक्षम हैं। उसी समय, फ्लेक्स गठित होते हैं।

Gemagglutination ब्रेकिंग रिएक्शन (आरटीएचए)वायरल संक्रमण के निदान में उपयोग किया जाता है, और केवल हेमग्लूटिंग वायरस के कारण संक्रमण। इन वायरस में उनकी सतह पर एक Gemagglutinin प्रोटीन होता है, जो वायरस में लाल रक्त कोशिकाओं को जोड़ते समय हेमगग्लुटिनेशन प्रतिक्रिया (आरजीए) के लिए ज़िम्मेदार होता है। आरटीएच वायरल एंटीजनों की एंटीबॉडी को अवरुद्ध करना है, जिसके परिणामस्वरूप वायरस लाल रक्त कोशिकाओं को परेशान करने की क्षमता खो देता है।

कंबा प्रतिक्रिया -अपूर्ण एंटीबॉडी निर्धारित करने के लिए आरए। कुछ संक्रामक बीमारियों में, उदाहरण के लिए, ब्रुकोलोसिस में, कारम में कारम में अपूर्ण एंटीबॉडी प्रसारित हो जाती है। अपूर्ण एंटीबॉडी को ब्लॉकिंग कहा जाता है, क्योंकि उनके पास एक एंटीजन बाध्यकारी क्षेत्र है, दो नहीं, पूर्ण एंटीबॉडी के रूप में। इसलिए, एंटीजनिक \u200b\u200bडायग्नोस्टिकम जोड़ते समय, अपूर्ण एंटीबॉडी एंटीजन से जुड़े होते हैं, लेकिन उन्हें गोंद नहीं देते हैं। एंटी-ग्लोबुलिन सीरम प्रतिक्रिया (मानव इम्यूनोग्लोबुलिन्स को एंटीबॉडी) में जोड़ा जाता है, जिससे प्रतिक्रिया के पहले चरण में प्रतिरक्षा परिसरों (एंटीजनिक \u200b\u200bडायग्नोस्टिक्स + अपूर्ण एंटीबॉडी) का एग्लूटिनेशन होगा।

अप्रत्यक्ष coumbs प्रतिक्रिया का उपयोग इंट्रावास्कुलर हेमोलिसिस के रोगियों में किया जाता है। ऐसे कुछ रोगियों में, अपूर्ण मोनोवलेंट एंटी -सस एंटीबॉडी पाए जाते हैं। वे विशेष रूप से प्रतिरोधी लाल रक्त कोशिकाओं के साथ बातचीत करते हैं, लेकिन उनके agglutination का कारण नहीं है। इसलिए, एंटी-एग्ग्लोबुलिन सीरम सिस्टम, एंटी-हाइड्रोक्साइट्स में जोड़ा जाता है, जो एरिथ्रोसाइट्स के एग्लूटिनेशन का कारण बनता है। कुम्भ की प्रतिक्रिया का उपयोग करके, प्रतिरक्षा उत्पत्ति के एरिथ्रोसाइट्स के इंट्रावास्कुलर लिसिस से जुड़ी रोगजनक स्थितियों का निदान किया जाता है, उदाहरण के लिए, रीसस संघर्ष के कारण नवजात शिशुओं की एक हेमोलिटिक बीमारी।

रक्त समूहों को निर्धारित करने के लिए आरएरक्त समूहों ए (ii), बी (iii) के एंटीजन के प्रति प्रतिरक्षा सेरा एंटीबॉडी के एरिथ्रोसाइट्स के एग्लोसाइट के आधार पर आधारित। नियंत्रण सीरम हैं जो एंटीबॉडी नहीं हैं, यानी सीरम एबी (iv) रक्त समूह, और एरिथ्रोसाइट समूहों की एंटी-घनत्व ए (पी) और बी (iii)। समूह 0 (i) के एरिथ्रोसाइट्स का उपयोग नकारात्मक नियंत्रण के रूप में किया जाता है, क्योंकि उनके पास एंटीजन नहीं होते हैं।

आरएच के निर्धारण के लिए, एंटी -सस सीरम (कम से कम दो अलग श्रृंखला) का उपयोग किया जाता है। यदि झिल्ली पर इन कोशिकाओं का एक agglutination है, तो इन कोशिकाओं का विरोधी agglutination होता है।

13.3। प्रीकिपेंट प्रतिक्रिया

आरपी इलेक्ट्रोलाइट्स की उपस्थिति में एंटीजन के साथ एंटीबॉडी की बातचीत की प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया है, और एंटीजन घुलनशील राज्य में है। वर्षा के दौरान, घुलनशील एंटीजन एंटीजन उपद्वीपित होते हैं, जो वर्षा बैंड के रूप में अशांति से प्रकट होता है। समकक्ष अनुपात में दोनों अभिकर्मकों को मिश्रण करते समय एक दृश्यमान प्रक्षेपण का गठन मनाया जाता है। उनमें से एक से अधिक प्रतिबिंबित प्रतिरक्षा परिसरों की संख्या को कम कर देता है। वर्षा की प्रतिक्रिया का उत्पादन करने के कई तरीके हैं।

किसी न किसी प्रतिक्रियायह एक छोटे व्यास के साथ वर्षा परीक्षण ट्यूबों में रखा गया है। इम्यून सीरम ट्यूब में पेश किया जाता है और सतर्कता से एक घुलनशील एंटीजन द्वारा स्तरित होता है। दो समाधानों की सीमा पर सकारात्मक परिणाम के साथ, एक दूध रंग की अंगूठी बनती है। अंगूठी रद्दीकरण की प्रतिक्रिया, जिसके साथ अंगों और ऊतकों में एंटीजन की उपस्थिति, जिनके निष्कर्ष उबले हुए और फ़िल्टर किए जाते हैं, को थर्मोकिपेशन प्रतिक्रिया कहा जाता है (थर्मल स्थिर एंटीजन निर्धारित करने के लिए एस्कोलम प्रतिक्रिया)।

O.Tutorloni पर डबल इम्यूनोडिफल्यूजन की प्रतिक्रिया।यह प्रतिक्रिया agar जेल में किया जाता है। एक निश्चित दूरी पर समान मोटाई के जेल की परत में, कुएं क्रमशः एंटीजन और प्रतिरक्षा सीरम से कट और भरे हुए हैं। उसके बाद, एंटीजन और एंटीबॉडी जेल में फैलते हैं, वे एक-दूसरे से मिलते हैं और प्रतिरक्षा परिसरों बनाते हैं, जो जेल में निकलते हैं और संक्रमण लाइनों के रूप में दिखाई देते हैं

पोषण। इस प्रतिक्रिया का उपयोग अज्ञात एंटीजन या एंटीबॉडी निर्धारित करने के लिए किया जा सकता है, साथ ही विभिन्न एंटीजनों के बीच समानताओं का परीक्षण करने के लिए किया जा सकता है: यदि एंटीजन समान हैं, तो वर्षा रेखाएं मर्ज करती हैं यदि एंटीजन एकदम स्पष्ट है, तो वर्षा रेखाएं आंशिक रूप से समान हैं, स्पर है गठित।

रेडियल इम्यूनोडिफ्यूजन की प्रतिक्रिया।एंटीबॉडी पिघला हुआ agar जेल में एंटीबॉडी जोड़ें और ग्लास पर एक समान परत के साथ एक जेल लागू करें। जेल कुएं काट दिया जाता है और विभिन्न एंटीजन समाधानों की मानक मात्रा में कटौती की जाती है। एंटीजनों के ऊष्मायन के दौरान, कुएं से मूल रूप से फैलता है और एंटीबॉडी से मुलाकात की जाती है, जो वर्षा की अंगूठी बनाती है। जब तक कुएं छेद में बनी रहे हैं, तब तक एंटीजन संरक्षित है, वर्षा की अंगूठी के व्यास में धीरे-धीरे वृद्धि होती है। इस विधि का उपयोग परिणामस्वरूप समाधान में एंटीजन या एंटीबॉडी निर्धारित करने के लिए किया जाता है (उदाहरण के लिए, सीरम में विभिन्न वर्गों के इम्यूनोग्लोबुलिन की एकाग्रता निर्धारित करने के लिए)।

इम्यूनोइलेक्ट्रोफोरज़।पूर्व-इलेक्ट्रोपोरेटिक रूप से एंटीजनों का मिश्रण अलग हो गया, फिर नाली में, जो प्रोटीन के आंदोलन की दिशा के साथ जाता है, एक प्रक्षेपण एंटीसेरम बनाते हैं। एंटीजन और एंटीबॉडी एक दूसरे की ओर जेल में फैलते हैं; बातचीत, वे आर्कुएट वर्षा रेखाएँ बनाते हैं।

निरर्थक प्रतिक्रिया(रामोनू द्वारा) - एक प्रकार की वर्षा प्रतिक्रिया, जिसका उपयोग एंटीटॉक्सिक सीरम या एनाटॉक्सिन की गतिविधि को निर्धारित करने के लिए किया जाता है। प्रतिक्रिया ट्यूबों में प्रतिक्रिया की जाती है। ट्यूब में, जहां एनाटोकिन और एंटीटॉक्सिन समकक्ष अनुपात में होते हैं, बादल छाए जाते हैं।

13.4। पूर्ण बाध्यकारी प्रतिक्रिया

एंटीबॉडी, उपयुक्त एंटीजन के साथ बातचीत, अतिरिक्त पूरक (प्रथम प्रणाली) से जुड़ा हुआ है। हेमोलिटिक सीरम द्वारा संवेदनशील एरिथ्रोसाइट्स पूरक के संकेतक का उपयोग किया जाता है, यानी। एंटीबॉडी एरिथ्रोसाइट्स (दूसरी प्रणाली) के लिए। यदि पूरक 1 सिस्टम में तय नहीं किया गया है, तो। एंटीजन एंटीबॉडी प्रतिक्रिया होती है, संवेदनशील लाल रक्त कोशिकाएं पूरी तरह से lysed (नकारात्मक प्रतिक्रिया) होती हैं। जब पूरक संवेदनशील एरिथ्रोसाइट्स, हेमोलिसिस जोड़ने के बाद पहली प्रणाली के प्रतिरक्षा परिसरों में बाध्यकारी होता है

इस तरह (सकारात्मक प्रतिक्रिया)। संक्रामक रोगों (गोनोरिया, सिफिलिस, इन्फ्लूएंजा इत्यादि) का निदान करने के लिए पूरक बाध्यकारी प्रतिक्रिया का उपयोग किया जाता है।

13.5। निराकरण प्रतिक्रिया

सूक्ष्मजीवों और उनके विषाक्त पदार्थों का मानव शरीर के अंगों और ऊतकों पर हानिकारक प्रभाव पड़ता है। एंटीबॉडी इन हानिकारक एजेंटों से जुड़ सकते हैं और उन्हें ब्लॉक कर सकते हैं, यानी बेअसर। नैदानिक \u200b\u200bतटस्थ प्रतिक्रिया एंटीबॉडी की इस सुविधा पर आधारित है। यह जानवरों को या संवेदनशील परीक्षण वस्तुओं (सेल संस्कृति, भ्रूण) में एंटीजन एंटीबॉडी के मिश्रण को पेश करके किया जाता है। उदाहरण के लिए, रोगी की सामग्री को 1 समूह के जानवरों के साथ रोगी की सामग्री में विषाक्त पदार्थों का पता लगाने में पेश किया जाता है। दूसरे समूह के पशु एक समान सामग्री पेश करते हैं जो पहले उपयुक्त एंटीसेम के साथ इलाज करते थे। सामग्री में विषाक्त पदार्थ की उपस्थिति में पहले समूह के जानवर मर जाते हैं। जानवरों का दूसरा समूह जीवित रहता है, विषाक्त पदार्थ का हानिकारक प्रभाव प्रकट नहीं होता है, क्योंकि यह इसका तटस्थता होती है।

13.6। लेबल एंटीबॉडी या एंटीजन का उपयोग करके प्रतिक्रियाएं

13.6.1। इम्यूनोफ्लोरेसेंस रिएक्शन (रीफ, कुन विधि)

इस विधि का उपयोग एक्सप्रेस डायग्नोस्टिक्स के लिए किया जाता है। इसके साथ, माइक्रोबियल एंटीजन और एंटीबॉडी दोनों की पहचान करना संभव है।

प्रत्यक्ष रीफ विधि- एंटीजनों के साथ एंटीबॉडी की बातचीत की प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया, और एंटीबॉडी फ्लोरोक्रोमा द्वारा बनाई जाती हैं - पदार्थ प्रकाश क्वांटा उत्सर्जित करने के लिए एक निश्चित तरंग दैर्ध्य की रोशनी में प्रवेश करने में सक्षम पदार्थ भी एक निश्चित तरंग दैर्ध्य। इस विधि के फॉर्मूलेशन की विशिष्टता गैर-विशिष्ट चमक के पता लगाने के लिए अपरिवर्तित घटकों को हटाने के लिए है। इसके लिए, अपरिवर्तित एंटीबॉडी से लॉन्ड्रिंग। परिणाम एक लुमेनसेंट माइक्रोस्कोप का उपयोग करके मूल्यांकन किया जाता है। एक धुंध में बैक्टीरिया, इस तरह के लुमेनसेंट सीरम के साथ इलाज, सेल की परिधि के साथ एक अंधेरे पृष्ठभूमि पर चमक।

अप्रत्यक्ष रीफ विधिपिछले एक की तुलना में अधिक बार उपयोग किया जाता है। यह प्रतिक्रिया दो चरणों में की जाती है। एंटीजन के पहले चरण में

हम प्रतिरक्षा परिसरों का निर्माण, उपयुक्त एंटीबॉडी के साथ संशोधित करते हैं। सभी घटकों ने प्रतिक्रिया नहीं की है (यानी प्रतिरक्षा परिसरों की संरचना में नहीं) को लॉन्डरिंग द्वारा हटाया जाना चाहिए। दूसरे चरण में, फ्लोरोक्रोमर्ड एंटी-ग्लोबुलिन सीरम का उपयोग करके एंटीजन एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स का पता लगाया गया था। नतीजतन, माइक्रोबेब कॉम्प्लेक्स का गठन + एंटीमाइक्रोबायल खरगोश एंटीबॉडी + फ्लोरोक्रोमा के साथ लेबल खरगोश इम्यूनोग्लोबुलिन्स को एंटीबॉडी करता है। परिणाम एक लुमेनसेंट माइक्रोस्कोप का उपयोग करके मूल्यांकन किया जाता है।

13.6.2. इम्यूनो एंजाइम विधि या विश्लेषण

एलिसा सबसे आम आधुनिक तरीका है जिसका उपयोग वायरल, जीवाणु, प्रोटोजोअल संक्रमण का निदान करने के लिए किया जाता है, विशेष रूप से एचआईवी संक्रमण, वायरल हेपेटाइटिस इत्यादि के निदान के लिए।

बहु संशोधन बहुत अधिक हैं। एलिसा के ठोस चरण गैर-प्रतिस्पर्धी संस्करण का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। यह 96-अच्छी तरह से पॉलीस्टीरिन प्लेटों (ठोस चरण) में किया जाता है। प्रतिक्रिया को पूरा करते समय, प्रत्येक चरण में प्रत्येक चरण में अपरिवर्तित घटकों को धोने के लिए आवश्यक होता है। कुएं में एंटीबॉडी निर्धारित करते समय, जिस पर एंटीजनों को थकाया जाता है, परीक्षण सीरम पेश किया जाता है, फिर एंटी-ग्लोबुलिन सीरम एंजाइम द्वारा लेबल किया जाता है। एंजाइम के लिए एक सब्सट्रेट जोड़कर प्रतिक्रिया दिखाएं। एंजाइम की उपस्थिति में सब्सट्रेट भिन्न होता है, और एंजाइमस्यूब्सनल कॉम्प्लेक्स का चयन इस तरह से किया जाता है कि प्रतिक्रिया में गठित उत्पाद रंग था। इस प्रकार, सकारात्मक प्रतिक्रिया के साथ, समाधान के रंग में एक बदलाव मनाया जाता है। एंटीजन निर्धारित करने के लिए, ठोस चरण वाहक एंटीबॉडी द्वारा संवेदनशील है, फिर एंजाइम के साथ लेबल किए गए एंटीजनों के लिए सामग्री (एंटीजन) और सीरम लगातार दर्ज की जाती है। प्रतिक्रिया के लिए, सब्सट्रेट एंजाइम के लिए पेश किया जाता है। समाधान का रंग बदलना सकारात्मक प्रतिक्रिया के साथ होता है।

13.6.3. immunoblotting

यह विधि इलेक्ट्रोफोरोसिस और एलिसा के संयोजन पर आधारित है। Immunoblotting आयोजित करते समय (अंग्रेजी से ब्लोटिंग। दाग- स्पॉट) एंटीजन का एक जटिल मिश्रण पहले पॉलीएक्रियामाइड जेल में इलेक्ट्रोफोरोसिस के अधीन होता है। परिणामी आंशिक विरोधी-

जीन पेप्टाइड्स को नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली में स्थानांतरित कर दिया जाता है। फिर ब्लॉट्स को एंटीबॉडी के साथ एक विशिष्ट एंटीजन में माना जाता है, जो एंजाइम द्वारा लेबल किया जाता है, यानी। एक आईएफए पिस्सू का प्रदर्शन करें। Immunoblotting का उपयोग एचआईवी जैसे संक्रमण के निदान में किया जाता है।

13.6.4। प्रतिरक्षा इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी

विधि वायरस के इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप (अन्य सूक्ष्म जीवों के कम) में सूक्ष्मदर्शी है, उचित प्रतिरक्षा सीरम के साथ पूर्व-इलाज, इलेक्ट्रॉन ऑप्टिक-घने तैयारियों जैसे कि फेरिटिन-आयरन युक्त प्रोटीन लेबल।

13.7। फ़्लो साइटॉमेट्री

लेजर CytoOfluorometry के आधार पर रक्त कोशिकाओं को विभेदित किया जाता है। इसके लिए, वांछित कोशिकाओं को सीडी एंटीजन के लिए फ्लोरोसेंट मोनोक्लोनल एंटीबॉडी के साथ चित्रित किया जाता है। लेबल वाले एंटीबॉडी के साथ प्रसंस्करण के बाद एक रक्त नमूना एक पतली ट्यूब के माध्यम से पारित किया जाता है और एक लेजर बीम इसके माध्यम से पारित किया जाता है, जो फ्लोरोक्रोम की चमक को उत्तेजित करता है। फ्लोरोसेंस की तीव्रता सेल सतह पर एंटीजनों की घनत्व के साथ सहसंबंध करती है और इसे एक फोटोमल्टीप्लियर का उपयोग करके मात्रात्मक रूप से मापा जा सकता है। प्राप्त परिणाम एक हिस्टोग्राम में परिवर्तित होते हैं।

प्रवाह साइटोमेट्री का उपयोग प्रतिरक्षा स्थिति निर्धारित करने के लिए किया जाता है (लिम्फोसाइट्स की मुख्य आबादी की सामग्री, इंट्रासेल्यूलर और बाह्य कोशिकीय साइटोकिन्स की सामग्री, एनके कोशिकाओं की कार्यात्मक गतिविधि, फागोसाइटोसिस की गतिविधि इत्यादि)।